三子汤的体内抑菌作用试验

2012-11-23陈绍辉胥洪冰赵海沄马红霞

中国兽医杂志 2012年11期

陈绍辉，胥洪冰，赵海沄，马红霞

（1.吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118；2.吉林大学中日联谊医院，吉林长春130031）

三子汤处方原于三子散，是常用的蒙药，由诃子、川楝子、栀子三味中药组成，最早见于《四部医典》，现收开载于《中华人民共和国兽药典》（2010年版），具有清热、解毒、凉血、祛湿、调和、止血等功效，临床用于治疗清热解毒等症，疗效确切［1］。处方中3种药物均具有抗菌、抑制胃肠运动等作用［2］，目前对三子散的报道多局限于临床应用、化学成分及质量标准方面，关于三子散的抑菌作用文献罕见报道。我们采用血清药理学试验方法，观察了三子汤对大肠杆菌、志贺氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌4种细菌的抑菌作用和给药后含药血清的最佳采血时间。报告如下。

1 试验材料

1.1 试验动物大耳白兔，购自长春高新医学动物实验研究中心。

1.2 菌种大肠杆菌、志贺氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌，菌种，购自中国兽医药品监察所。

1.3 药品琼脂粉、胰蛋白胨、酵母抽提物，均为北京奥博星生物技术有限责任公司生产；氯化钠，购自长春市科隆生物工程公司；诃子、川楝子、栀子，均购自长春医药大厦。

1.4 仪器多功能真空浓缩机（YZN－50），购自北京东华原医疗设备有限责任公司；吉尔森移液器，购自北京奥博星生物技术有限责任公司。

2 试验方法

2.1 试验准备

2.1.1 三子汤剂的制备处方取自《中华人民共和国兽药典》（2005年版）：诃子200g，川楝子200g，栀子200g，浸泡9h，多功能真空浓缩机中60℃，620mmHg～680mmHg压力下，煎煮3h；低温浓缩到2g／mL，真空包装，备用。

2.1.2 试验动物取大耳白兔18只，随机分为两组，分别为试验组和对照组。分别禁食12h后，称重，编号。试验组灌胃给药1.4g／kg体重，每日2次，连续3d，最后1次给药后0.5、1、2、4h采血2 mL；对照组同时取血2mL，分别37℃静止24h，分离血清，备用。

2.1.3 细菌的准备将细菌分别在肉汤培养基中培养24h，放入4℃冰箱中保存备用。

2.1.4 滤纸片的准备将普通定性滤纸用打孔器打成直径6mm的圆形纸片，放入高压锅中121℃、20 min灭菌，60℃干燥，备用。

2.2 试验方法在超净工作台内将灭菌好的培养基趁热倒入无菌的培养皿，厚约5mm，水平静止凝固，加入菌液100μL，用L棒均匀涂布，用无菌镊子分别夹取滤纸片，均匀放置在涂完菌的琼脂平板上，分别为0.5、1、2、4h的含药血清纸片及对照血清纸片，37℃培养24h。每组两个重复。

3 结果

3.1 三子汤含药血清不同时间对几种细菌的抑制结果见表1。

由表1可知，大肠杆菌0.5h剂量组与对照组相比无显著差异，1h、4h组有显著差异，2h组有极显著差异，志贺氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌各剂量组与对照组相比，差异极显著。

以上所得数据均用SPSS12.0统计分析软件包处理，采用S－N－K法进行多重差异比较。

3.2 三子汤含药血清抑菌作用拟合曲线为研究三子汤含药血清体内抑菌作用随时间变化规律，采用SPSS12.0软件进行曲线拟合，对不同菌种找出最佳拟合曲线，拟合方程见表2。

通过拟合曲线可以看出，三子汤含药血清对大肠杆菌、志贺氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌在2 h表现最强的抑菌作用，则在给药后2h为最佳采血时间。

表1 三子汤含药血清不同时间抑菌效果（抑菌圈直径mm）

表2 三子汤含药血清抑菌作用最佳拟合曲线方程

4 讨论

本试验三子汤采用低温高压煎煮法，在60℃620 mmHg～680mmHg压力下，最大程度的保留中药原有成分的有效性，避免了高温对中药成分的破坏。处方中诃子、川楝子、栀子三味中药的抑菌作用分别已有文献报道［4－6］。本试验结果表明，三子汤对大肠杆菌、志贺氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌有抑菌作用，且最佳采血时间为给药后2h。

最佳拟合曲线图如图1。

血清药理学是近10年兴起的一种药理学研究方法，即用动物的含药血清进行药理试验，不仅可以反应药物的直接作用，而且可以反应出药物成分的体内代谢产物和药物诱生的机体内源性物质的综合作用。由于中药成分比较复杂，粗制剂直接用于体外药理试验时，由于各种因素的影响，经常造成一些假阴性或假阳性结果，特别中药的作用是以中医理论为基础，强调处方各成分的综合作用，单纯体外试验往往难以取得预期结果，难以得到认可［3］。血清药理学最大程度的模拟了药物在体内的真实作用，试验结果更为科学可靠。