正交试验优选茅莓总皂苷的提取工艺

贺红军，邱宗荫（重庆医科大学药学院，重庆400016）

正交试验优选茅莓总皂苷的提取工艺

贺红军＊，邱宗荫#（重庆医科大学药学院，重庆400016）

目的：优选茅莓总皂苷的提取工艺。方法：在单因素考察的基础上，以乙醇浓度、固液比、提取温度和提取时间为考察因素，以茅莓总皂苷提取率为指标，优选茅莓总皂苷的提取工艺。结果：最佳提取工艺为乙醇浓度80%，提取时间为3h，固液比为1∶20，提取温度为80℃。在此条件下，茅莓总皂苷提取率达到1.994%。结论：该工艺稳定、可行，可为工业化生产提供理论依据。

茅莓总皂苷；正交试验；提取工艺

茅莓又名红梅消、天青地白草等，系蔷薇科悬钩子属植物茅莓Rubus parvifolius L.的干燥全草。茅莓根、茎、叶均可作药用，具有清热凉血、止血、散结止痛、利尿消肿等功效，其中含有皂苷、糖、酚类物质和鞣质、挥发油、微量元素等多种成分[1]。药理研究表明，茅莓总皂苷具有多种重要的药理活性[2～4]。

由于茅莓中皂苷的含量较低，因此茅莓中的皂苷类活性成分能否被有效利用，与皂苷的分离提取、纯化方法戚戚相关，如何建立一种高效、实用的茅莓总皂苷提取纯化工艺就成为该有效部位进一步开发研究的主要环节，所以有必要对其提取工艺进行优化。

1 仪器与试药

UV-2450紫外分光光度计（日本岛津公司）；analytic A200s电子天平（德国Sartorius公司）；真空旋转蒸发仪（上海申科机械研究所）；CS501超级恒温水浴锅（重庆市实验设备厂）。

茅莓药材样品，采集于重庆市璧山县（2009年），经重庆市中药研究院生药室鉴定为蔷薇科悬钩子属植物茅莓Rubus parvifolius L.的全草，将部分切段，分别置50℃烘箱烘干，备用，齐墩果酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：0709-9803，供含量测定用）；香草醛、冰醋酸、高氯酸、甲醇、无水乙醇、石油醚（分析纯，成都科龙化工试剂厂）。

2 样品的制备及茅莓总皂苷含量测定

2.1 样品溶液的制备

取干燥茅莓药材粗粉25g，置于索氏提取器中，经石油醚脱脂至无色，自然挥干石油醚，加200mL70%乙醇80℃水浴加热回流提取2次，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，用蒸馏水定容至100mL左右，再用等体积水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，用300mL正丁醇饱和的水洗涤，弃去水洗液，将正丁醇液水浴减压蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至100mL容量瓶中，定容，摇匀，备用。

2.2 茅莓总皂苷含量测定方法

精密吸取样品溶液0.5mL，置10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，再取稀释后的样品溶液200µL，置于20mL具塞比色管中，水浴挥干溶剂，冷却至室温，依次加入0.2mL新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8mL高氯酸，摇匀，于60℃水浴加热15min，立即取出，流水冷却；再加入5mL冰醋酸，摇匀，20min后于546nm波长处测定，并将结果代入以齐墩果酸为对照的回归方程（A＝1.806c－0.0063（r＝0.9985））计算含量（式中，A为吸光度；c为齐墩果酸检测浓度）。

2.3 茅莓总皂苷提取率的计算

在“2.1”项下方法的基础上，按单因素试验和正交设计的参数进行样品制备，按“2.2”项下方法测其含量，按下式计算茅莓总皂苷提取率：提取率（%）＝提取液中茅莓总皂苷的总量/所用原料的总量×100%。

3 茅莓提取工艺研究

3.1 单因素试验

3.1.1 提取溶剂的考察 取茅莓药材粗粉25g，分别以蒸馏水和50%、60%、70%、80%、90%乙醇作为溶剂，80℃水浴回流提取2h。结果，70%乙醇作为提取溶剂时提取率最高。乙醇浓度对茅莓总皂苷提取率的影响见图1。

3.1.2 固液比的考察 固定其他提取条件，取茅莓药材粗粉25g，用70%乙醇分别以1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30体积比，80℃水浴回流提取2h。结果，当固液比在1∶20以上时，茅莓总皂苷的提取率高于1.7%，固液比继续增加对提取率影响不大，从节约资源角度考虑，选择1∶20为茅莓总皂苷的最终固液比例。固液比对提取茅莓总皂苷提取率的影响见图2。根据茅莓总皂苷的特性，考虑到甲醇毒性较大，本试验采用乙醇回流法提取茅莓总皂苷，确定工艺的优化工艺参数。所采用提取工艺简单，无需特殊设备。所用溶剂具有无毒、无污染、安全、价廉等优点，且方法简便、易于操作。

茅莓皂苷类成分的法定对照品国内目前尚无，而茅莓皂苷类成分主要为三萜皂苷，故以齐敦果酸作对照品，采用紫外-可见分光光度法测定茅莓总皂苷含量。虽然与实际含量相比较所得的结果有一定差异，但是在尚无茅莓皂苷类成分法定标准品的情况下，利用显色原理一致，选择齐敦果酸作对照品仍不失为一种较佳的选择。

[1] 中国植物志编辑委员会.中国植物志（第37卷）[M].北京：科学出版社，1985：61.

[2] 郑振洨，张玲菊，黄常新，等.茅莓总皂苷体外抗肿瘤作用研究[J].浙江临床医学，2007，19（5）：611.

[3] 王继生，邱宗荫.茅莓总皂苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠兴奋性氨基酸含量的影响[J].中国医院药学杂志，2007，27（8）：1029.

[4] 王继生，邱宗荫.茅莓总皂苷对大鼠海马神经元细胞缺氧损伤后胞内钙超载的影响[J].中国药理学通报，2007，23（7）：934.

Study on the Extraction Process of the Total Saponins of Rubus parviflolius

HE Hong-jun，QIU Zong-yin（College of Pharmacy，Chongqing Medical University，Chongqing，400016）

OBJECTIVE：Find out the optimal extraction process of total saponins of Rubus rviflolius（TGRP）to provide a foundation for the future research of it.METHODS：Based on the single factors research，throughl orthogonal design to optimize the extraction process of TGRP.RESULTS：The optimal extraction process of TGRP were：the concentration of ethanol solution was 80%；ratio to solid was 1∶20；extraction temperature was 80℃；extraction time was 3h.Under this condition the extraction rate of TGRP achieved 1.994%.CONCLUSION：The process gotten in the research is suitable for industrial production.

The total saponins of Rubus parviflolius；Orthogonal test；Extraction process

R284.2；R283

A

1001-0408（2012）07-0611-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.07.12

＊硕士研究生。研究方向：药物分析。电话：023-86977192。E-mail：hehongjun666@yahoo.com.cn

#通讯作者：教授，博士研究生导师。研究方向：生物分析化学、新药药理与质量控制。电话：023-68485272。E-mail：zongyin@163.com

2011-05-17

2011-07-10）