HPLC法测定肤疾洗剂中苦参碱的含量

张智军 崔 华 马久太

(1陕西省彬县食品药品监督管理局，陕西省彬县西大街老政府院内，713500;2陕西摩美得制药有限公司;3陕西步长制药有限公司)

肤疾洗剂由苦参、百部、花椒、白鲜皮、硼砂、雄黄等6味中药组成，具有解毒杀虫、止痒收敛、活血祛瘀的功能，主治疥疮、湿疹、脂溢性皮炎、瘙痒性皮肤病及花斑癣［1］。为了更好地控制产品质量，我们在其原质量标准的基础上，对苦参碱的含量测定方法，进行了方法学研究。报道如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 高效液相色谱仪(岛津LC－20AD)，色谱工作站(岛津LC－solution)，紫外检测器(岛津SPDM20A)，电子天平(梅特勒－奥豪斯AR1140)。

1.2 试剂 苦参碱对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号110805－200906)，肤疾洗剂(陕西摩美得制药有限公司生产，批号 110305、110307、110309、110311、110313)，乙腈为色谱纯，用水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;检测波长220nm;0.016mol·L－1磷酸二氢钾溶液－0.016mol·L－1十二烷基硫酸钠溶液－乙腈(30︰30︰35)为流动相;流速1.0mL·min－1;理论塔板数以苦参碱计算应不低于3000。上述色谱条件下供试品分离度高，阴性无干扰。

2.2 供试品溶液的制备 精密吸取肤疾洗剂10mL，用稀盐酸调pH值至3～4，以石油醚(60℃ ～90℃)萃取3次，每次20mL，弃去石油醚液，水层用0.5%氢氧化钠溶液调pH值至9～10，用三氯甲烷萃取3次，每次20mL，合并三氯甲烷层，加无水硫酸钠脱水，三氯甲烷液蒸至3mL，过中性氧化铝柱(100～200目，10g，内径1cm)，以三氯甲烷50mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察 精密称取苦参碱对照品10.30mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品备用液。精密吸取备用液各0.25mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得苦参碱对照品溶液。吸取对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录峰面积，结果见表1。

表1 苦参碱线性关系考察

以C代表进样量、A代表峰面积，计算回归方程为A=1427718.13C+148727.67，r=0.9999;苦参碱在0.515～5.15μg之间有良好的线性关系，标准曲线见图1。

图1 苦参碱标准曲线

2.4 精密度试验 吸取苦参碱对照品溶液(浓度0.103mg·mL－1)20μL，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪中，连续进样6次，记录峰面积，结果见表2。

表2 精密度试验

结果表明对照品溶液峰面积RSD为1.23%，本方法精密度良好。

2.5 稳定性试验 取样品(批号110305)，按照上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别于0、2、4、8、16h时注入液相色谱仪中，进样量10μL，记录峰面积，结果见表3。

表3 稳定性试验

结果表明供试品溶液峰面积在16h内RSD为1.42%，本方法稳定性良好。

2.6 重现性试验 精密吸取样品(批号110305)10mL 5份，制备供试品溶液，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪中，进样量10μl，记录峰面积，结果见表4。

表4 重现性试验

结果表明样品含量的RSD为1.31%，本方法重现性良好。

2.7 回收率试验 精密吸取样品(批号110305)10mL 6份，分别精密加入样品中含量80%、100%和120%的苦参碱对照品，制备供试品溶液，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪中，记录峰面积，结果见表5。

表5 回收率试验结果

结果表明平均回收率为98.73%，RSD为1.01%，本方法回收率良好。

2.8 样品测定 按照上述方法制备供试品溶液，参照上述色谱条件操作，测定苦参碱含量，结果见表6。

表6 肤疾洗剂中苦参碱含量测定

药品的质量受药材、生产设备、工艺等多种因素影响，根据5批肤疾洗剂的含量测定结果，在其含量平均值0.118mg·mL－1的基础上，以70%转移率计算，暂定肤疾洗剂中苦参碱含量限度为每1mL不得低于0.08mg。

3 结论

肤疾洗剂中的君药苦参，含有多种生物碱，其中苦参碱、氧化苦参碱具有抗肿瘤、抗炎、抑制皮肤过敏反应等作用［2］。原质量标准中没有含量测定项目，为了更好地控制产品质量，我们对苦参中的有效成分进行了含量测定。苦参碱含量测定方法有薄层扫描法［3］、高效液相色谱法［4］等，本产品采用高效液相色谱法对肤疾洗剂中苦参碱的含量进行了测定，结果表明方法准确、简便、快速，平均回收率为 98.73%，RSD为1.01%。

试验中曾考察了苦参碱不同的提取方法［4－5］，结果以萃取提取所得到的苦参碱含量高于蒸干后回流提取法，这与苦参碱遇热不稳定有很大关系。同时由于本品为复方制剂，所含成分复杂，为有效去除杂质，我们采用了萃取加过中性氧化铝小柱方法，排除了干扰。实验中［4，6－8］曾选用乙腈 － 无水乙醇 －3% 磷酸溶液(80∶10∶10)、甲醇 － 水 － 三乙胺(105∶95∶0.04)、0.016moL·L－1磷酸二氢钾 － 0.016moL·L－1十二烷基硫酸钠－乙腈(30∶30∶35)为流动相，结果前两个条件未能达到满意的分离效果，后者分离度好，阴性无干扰，所以实验最终选用后者为流动相。

在含量测定研究过程中，发现肤疾洗剂中的氧化苦参碱几乎检测不到，可能是氧化苦参碱在药品生产过程中分解或转化为苦参碱，这与文献报到是基本一致的［3，9－10］，所以后期没有对氧化苦参碱进行含量测定的方法学研究。

［1］肤疾洗剂质量标准(标准编号WS3－B－2918－98).中华人民共和国卫生部部颁标准《中药成方制剂》第十五册［S］.1998:111.

［2］苗抗立，张建中，董颖.苦参的化学成分及药理的研究进展［J］.天然产物研究与开发，2000，13(2):69 －73.

［3］贾敏鸽，孙文基.苦参及其复方中苦参碱与氧化苦参碱的转化研究［J］.药物分析杂志，2003，23(2):90.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部［S］.化学工业出版社:188－189.

［5］赵骏，齐喜红.生物碱提取方法研究概述［J］.天津中医学学报，2003，22(4):43 －44.

［6］匡海学.中药化学［M］.北京:中国中医药出版社，2003:148－149.

［7］张蕾，陈晓辉，李娟.RP－HPLC法测定苦参中苦参碱的含量［J］.沈阳药科大学学报，2005，22(1):33 －35.

［8］蒋珍藕.苦参碱的提取工艺及测定方法的研究进展［J］.中医药导报，2005，11(8):90 －94.

［9］陆蕴如，杨钟柯，董育妹.苦参在复方中化学成分变化的研究［J］.中国中药杂志，1996，21(7):412.

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