鼻炎灵丸质量标准的研究

康 建，张晓坚

(郑州大学第一附属医院，河南 郑州450052)

鼻炎灵丸由苍耳子、辛夷、白芷、细辛、黄芩、薄荷、川贝母、淡豆豉等药物组成，具有祛风清热、消肿通窍的功效，用于鼻渊、鼻塞、鼻流浊涕等急、慢性鼻炎等的治疗。鼻炎灵丸收载于中华人民共和国卫生部药品标准《中药成方制剂》第十册［1］中，原标准较简单，只有性状及检查项，无法对药品进行有效的质量控制。辛夷、白芷、川贝母等为方中重要药物。据文献资料报道，辛夷主要含有木兰脂素、辛夷脂素、松脂素二甲醚等木质素类成分［2－3］，具有抗炎、抗过敏等作用［4］;白芷中含有欧前胡素和异欧前胡素等香豆素类成分，具有抗炎、抗肿瘤等多种药理作用［5］;川贝母主要含有川贝碱、西贝素等多种生物碱［6］，具有松弛平滑肌、镇咳祛痰等作用［7］。根据以上主要化学成分的理化性质及鼻炎灵丸的剂型特点，本研究采用薄层色谱(TLC)法进行了白芷、川贝母的定性鉴别实验，采用高效液相色谱(HPLC)法进行了辛夷中木兰脂素的含量测定研究，以便更好地控制药品质量。

1 药品、试剂与仪器

鼻炎灵丸，安阳路德药业有限责任公司产品，批号101201，100301，100401。白芷(批号121013－200607)、川贝母对照药材(批号120941－200506)、木兰脂素对照品(批号110882－200605，供含量测定用)及欧前胡素对照品(批号110857－200608)，均由中国药品生物制品检定所提供;甲醇、乙腈为色谱纯;水为乐百氏纯净水;其他试剂均为分析纯。Waters 2690 高效液相色谱仪、Waters 996 二极管阵列检测器，均为美国Waters 公司产品;硅胶G 预制薄层板，青岛海洋化工厂产品，批号030507;KQ－300 型超声波清洗机，功率250W，频率40 kHz，昆山市超声仪器有限公司产品。

2 方法与结果

2．1 薄层色谱鉴别

2．1．1 白 芷

取本品2 g，研碎，加乙醚60 mL，超声提取20 min，滤过，滤液挥发至1 mL，作为供试品溶液。取处方中除白芷外的其他药物，按鼻炎灵丸制备工艺制备，同法制成缺白芷阴性对照溶液。另取白芷对照药材0．5 g，同法制成对照药材溶液。再取欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每mL 含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)—乙醚(3 ∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点;缺白芷阴性对照品色谱中，在相对应的位置无干扰。白芷的TLC 图谱见图1。

图1 白芷鉴别的TLC 图谱

2．1．2 川贝母

取本品4 g，研碎，加三氯甲烷－乙醇(7∶3)混合溶液30 mL，摇匀，温浸20 min，时时振摇，滤过，药渣挥干溶剂，加三氯甲烷30 mL、浓氨溶液5 mL，加热回流30 min，取出，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0．5 mL 使溶解，作为供试品溶液。取处方中除川贝母外其他药物，按鼻炎灵丸制备工艺制备，同法制成缺川贝母阴性对照溶液。另取川贝母对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3 种溶液各10～20 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯—二乙胺(12∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以稀碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺川贝母阴性对照色谱中，在相对应的位置无干扰。川贝母的TLC 图谱见图2。

图2 川贝母鉴别的TLC 图

2．2 含量测定

2．2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱为Phenomenex Luna C18柱(4．6 mm ×250 mm，5 μm)，柱温为35 ℃，检测波长为278 nm，流动相为乙腈－水(35∶65)［8］，体积流量为1 mL/min，进样体积为10 μL。理论塔板数按木兰脂素峰计算应不低于6000。色谱见图3。

2．2．2 对照品溶液的制备

取木兰脂素对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每mL 含50 μg 的溶液，即得。

2．2．3 供试品溶液的制备

取本品6 g，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中;精密加人甲醇25 mL，称定质量;超声处理(功率250 W，频率33 kHz)45 min，放冷，再称定质量;用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过;精密量取续滤液5 mL;加在中性氧化铝柱(100～200 目，2 g，内径为1cm)上，用甲醇20 mL 洗脱，收集洗脱液，置25 mL 量瓶中;加甲醇至刻度，摇匀，滤过取续滤液，即得。

图3 鼻炎灵丸HPLC 图

2．2．4 阴性溶液的制备

按鼻炎灵丸处方中比例称取除辛夷外的其他药物，按鼻炎灵丸制备工艺制备缺辛夷阴性对照药，按

2．2．3 项下方法制得缺辛夷阴性对照品溶液。

2．2．5 线性关系考察

精密吸取木兰脂素对照品溶液(50．12 mg/L)2，5，7，10，15，25 μL，按上述色谱条件测定。以进样量(X，μg)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=550 013X+2 586(r=0．999 9)。结果表明:木兰脂素在0．100 24～1．253 00 μg 线性良好。

2．2．6 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液，进样10 μL，重复进样6 次。结果木兰脂素峰面积的RSD 为0．48%，表明精密度良好。

2．2．7 重复性试验

取同一批样品(批号为100401)，平行制备6 份供试品溶液，测定木兰脂素的含量。结果RSD 为2．7%，表明重复性良好。

2．2．8 稳定性试验

取同一供试品溶液，按上述色谱条件分别于0，2，4，6，8，10 h 测定木兰脂素峰面积积分值。结果峰面积的RSD 为0．54%，表明供试品溶液在10 h 内基本稳定。

2．2．9 加样回收率试验

精密称取已知含量的本品(批号为100401，木兰脂素含量5．423 8 mg/g)约0．5 g，精密加入质量浓度为0．501 2 g/L 的木兰脂素对照品甲醇溶液5 mL，再精密加入甲醇溶液20 mL，按2．2．3 项下方法制备加样供试品溶液。精密吸取对照品溶液与供试品溶液，分别注入液相色谱仪，测定木兰脂素含量，计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2．2．10 样品含量测定

按2．2．3 项下方法制备供试品溶液，测定3 批鼻炎灵丸中木兰脂素的含量，平行测定2 次，结果见表2。

表2 3 批样品含量测定结果

3 讨 论

鼻炎灵丸原标准较简单，只有性状及检查项，不能对药品进行有效的质量控制。本文采用薄层色谱法增加了药品中白芷、川贝母的定性鉴别，采用HPLC 法进行了辛夷中木兰脂素的含量测定，丰富了药品的定性定量指标，与原标准相比，可更好的控制药品质量，确保药品的安全有效性。

在鼻炎灵含量测定研究过程中，曾比较了超声提取及加热回流等不同的方法制备供试品溶液，结果超声提取较简便且提取杂质较少，因此选用超声提取的方法制备供试品溶液。另外，在实验中还考察了超声提取后上氧化铝柱除杂后进样及超声提取后直接进样的方法，结果超声提取后直接进样的供试品溶液色谱杂质峰较多，且木兰脂素峰与相邻的杂质峰较难达到基线分离，而经氧化铝柱处理过的供试品色谱图中杂质峰明显减少，木兰脂素峰与杂质峰分离度较好，因此选用超声提取后上氧化铝柱后进样的方法制备供试品溶液。

［1］中华人民共和国卫生部．卫生部药品标准新药转正标准:第十册［S］．1997:32．

［2］蔡海敏，范伟，王旭东．木兰属植物化学成分及其药理作用研究进展［J］．中国药房，2011，22(39):3735．

［3］马玉良，韩桂秋．辛夷中木脂素成分的研究［J］．中国中药杂志，1995，20(2):102．

［4］李小莉，张永忠．木兰脂素抗炎、抗过敏作用的实验研究［J］．中草药，2002，33(11):1014．

［5］王洪志，李惠芬，周静，等．HPLC 法测定元胡止痛片中欧前胡素和异欧前胡素［J］．中草药，2007，38(7):1018．

［6］童志远，颜晓燕．贝母化学成分及质量控制方法研究进展［J］．西南军医，2009，11(2):260．

［7］朱丹妮，蒋莹，陈婷，等．组织培养川贝母化学成分和药理作用的研究［J］．中国药科大学学报，1992，23(2):118．

［8］国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［M］．北京:化学工业出版社，2005:405．