情志应激诱发肝硬化大鼠模型肝脏病理学的研究*

雅森·米吉提，玉苏甫·吐尔逊，热孜万古丽·艾合买提，

吾斯曼·艾海提4，米热古丽·艾艾乃都2

(1．新疆医科大学国际教育学院，新疆 乌鲁木齐830011;2．新疆医科大学维吾尔医药系，新疆 乌鲁木齐830011;3．新疆医科大学第六附属医院骨一科，新疆 乌鲁木齐830002;4．新疆医科大学第一附属医院药剂科，新疆 乌鲁木齐830011)

肝硬化是各种慢性肝病的终末期病变，以肝结构破坏－坏死，再纤维结缔组织弥漫增生、进一步假小叶结构形成为特点。我国的原发性肝癌绝大多数合并慢性酒精性肝炎及肝硬化，而80%的原发性肝癌合并肝硬化［1］。从肝脏疾病的病因研究来看，工作高度紧张、心理负担重的人是肝脏疾病的特殊易感人群之一。从肝硬化的病因研究来看，社会心理因素越来越为人们重视，认为肝硬化是遗传因素和环境因素交互作用的结果［2］，而这与中医理论中的情志致病理论也吻合。因此，本研究用二乙基亚硝胺(DEN)溶液，同时施加实验性应激(限制、不良精神刺激)，模拟制作情志不遂诱导肝硬化动物模型，探讨慢性情志应激对肝硬化大鼠模型的病理影响。

1 材料与方法

1．1 动 物

Wistar 大鼠40 只，清洁级，雄性，体质量(150±30)g ，由新疆医科大学实验动物中心提供，许可证号:SCXK(新)20032001。

1．2 主要试剂与仪器

DEN，为Sigma 公司产品。RQH－350 型人工气候箱及JXDT－1 型小鼠跳台仪器，均为上海精宏实验设备有限公司产品;BS－1105 型电子天平，北京赛多科斯天平有限公司产品;JEM100CXⅡ透射电镜，日本LEIKA 公司产品;DM2500 显微成像系统及LEICARM 2235 手动轮转式切片机，均为德国徕卡公司产品;BMJ-1 生物组织包埋机、TSJ-IA 自动组织脱水机及KZPJ-1A 生物组织摊烤片机，均为天津天利航空机电有限公司产品。

1．3 动物分组

将40 只大鼠稳定饲养3 d 后，分为正常组、应激组、单纯DEN 组和DEN+应激组，每组10 只。

1．4 肝硬化模型的建立

单纯DEN 组和DEN+应激组按照文献［3］，以食用水配制0．1 g/ L 的DEN 溶液，自由饮用，每天更换1 次，连续饮用15 周停药，建立肝硬化大鼠模型。

1．5 慢性情志应激刺激

①制动。按照文献［4］，将大鼠放入20 cm ×5 cm×5 cm 铁筒中，水平置于实验台，保证大鼠不受压。以不能回转身为度，但其运动受限制，光线晦暗，每天45 min。②不良精神刺激。按照文献［5］略加改进，采用间断足底电刺激1 次/d，每次35 min、电压40 V。

1．6 检测指标

各组动物15 周后在麻醉状态下颈椎脱臼处死所有动物。每组动物在同一部位取材，迅速取肝组织固定于100 g/L 的甲醛溶液中，经5 d 固定后取材、石蜡包埋、切片、HE 染色，光学显微镜下观察，发现单纯DEN 组和DEN +应激组的大鼠肝组织病变类型均为肝硬化。

2 结 果

2．1 各组一般情况

由于足底电刺激和DEN 溶液的毒副作用，DEN+应激组1 只老鼠在第14 周死亡。单纯DEN组和DEN+应激组肝硬化率为100%。

2．2 各组病理学观察

正常对照组:肝小叶结构完整清晰，肝细胞索排列整齐，围绕小叶中央静脉呈放射状排列，细胞大小一致，肝血窦无狭窄，肝小叶及汇管区无炎性细胞浸润，未见水肿或肿胀肝细胞，未见坏死肝细胞，未见纤维组织增生或纤维化。见图1～2。应激组:肝小叶结构完整清晰，门管区有少量炎细胞聚集，肝细胞轻微水肿并肿胀。见图3～4。单纯DEN 组:正常肝小叶结构被破坏，形成大小不一的假小叶结构;纤维组织增生明显;肝细胞水肿较重，还可见肝细胞肿胀。见图5～6。DEN +应激组组:正常肝小叶结构消失，可见形成大小不一肝细胞团，形成假小叶结构;纤维组织增生，纤维间隔变宽，其中见较多炎细胞浸润;部分肝细胞水肿、变性、坏死，可见再生肝细胞。图7～8。

3 讨 论

肝硬化作为肝癌发生过程中的重要前期阶段，对其研究可为肝癌的发病机制提供十分重要的实验依据。建立实验性动物模型为肝硬化的研究提供了全面、动态观察癌变多阶段演进过程的手段，是目前一种重要的研究方法［6］。近十几年来，肝硬化的研究已成为世界医学攻关的一个热点课题，国内外学者进行了大量相关动物实验和临床研究，取得了瞩目的成就。动物模型建立为研究人类疾病的发病机制、预防和治疗提供了的实验依据。人们对肝硬化形成机制的了解，很大程度上取决于可靠的、可重复的动物模型。梁璇等［7］研究发现:DEN 诱导大鼠肝硬化肝内胶原沉积的变化，结果显示随着肝细胞变性、炎症高峰到桥接性坏死、肝硬化形成。有的学者还建立过肝郁脾虚型肝硬化模型，发现肝郁脾虚型肝硬化模型比单纯肝硬化模型组肝组织病理变化和生物表征更为明显［8］。

随着医学领域对心理社会因素在肝硬化发生中作用的重视，关于肝硬化病因学研究应该从包括情志在内的多因素致病角度认识肝硬化的病因，即在强调生物因素致病作用时，不忽视心理因素在其发病中所起的作用，将两者相互综合，开展多学科研究以更利于肝硬化病因学的认识。病机是中医对疾病的形成机制、动态变化和本质要领的认识，是在分析和综合疾病的各种表现之后获得的。病机就是透过疾病的现象而对疾病本质的一种规律性认识，是通过具体的病邪、病性、病位及病势等病理要素不同组合体现出来的，因而病机具有整体性、动态性、本质性的特点［9］。

本研究结果表明:低浓度DEN 溶液应用15 周可以建立稳定肝硬化大鼠模型，并且DEN +应激组比单纯DEN 组肝细胞出现的损伤坏死或异常增生，甚至细胞水肿程度、形成假小叶结构等病理改变明显或快。笔者推测:在肝硬化的发生过程中，DEN 溶液是其发生的主要原因，而慢性情志起到了促进作用。

总之，笔者采用了低剂量的DEN 溶液和多相应激刺激相结合的造模方式，从中医病因学角度模拟情志不遂从而建立病(肝硬化)证(气机紊乱)结合大鼠模型具有一定的可行性，其过程与人类肝硬化的发生过程极为相似，便于进行药物干预和疗效分析。

［1］谢胜学，许戈良．诱发性大鼠肝癌模型进展［J］．肝胆外科杂志，2007，15(3):237－239．

［2］Yoshiji H，Yoshii J，Ikenaka Y，et al．Inhibition of reninangiotensin system attenuates liver enzyme-altered preneoplastic lesions and fibrosis development in rats［J］．J Hepatol，2002，37(l):22－30．

［3］玉苏甫·吐尔逊，哈木拉提·吾甫尔，斯坎德尔·白克力，等．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝硬化模型的建立及病理学研究［J］．新疆医科大学报，2011，34(3):261－264．

［4］李杰．情志应激诱发实验2 型糖尿病病因学及相关机理的研究［D］．天津:天津中医学院，2002:296－297．

［5］张有辉，哈木拉提·吾甫尔，玉苏甫·吐尔逊，等．异常黑胆质证载体大鼠模型的建立及其免疫、内分泌紊乱状态的研究［J］．新疆医科大学学报，2010，33(6):596－600．

［6］Sell S，Dunsford HA．Evidence for the stem cell origin of hepatocellular carcinoma and cholangio carcinoma［J］．Am J Pathol，1989，134(6):1347－1363．

［7］梁璇，孙德国．肝复健冲剂对大鼠肝纤维化形成的影响［J］．中华中医药学刊，2011，29(6):1381－1382．

［8］夏小芳，徐珊．肝纤维化大鼠病证结合模型肝脏病理学观察［J］．浙江中医杂志，2010，45(2):101－102．

［9］成肇智，李咸荣．等．中医病机论［M］．北京:中国医药科技出版社，1977:132－133．