NO/NOS 和T-AOC/LPO 在气虚血瘀型萎缩性胃炎中的表达及益气活血中药干预作用的研究*

成映霞，段永强，杨晓轶，朱立鸣，张 虹

(1．甘肃中医学院基础课部，甘肃 兰州730020;2．甘肃省第二人民医院，甘肃 兰州730020)

慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)的发生机制主要为多种因素诱发胃黏液、胃黏膜屏障防御减弱，胃动力障碍，自由基交联损伤，最终导致细胞的不典型性、异常分化和黏膜结构紊乱。其中自由基在细胞内大量堆积，损伤生物大分子，特别是通过脂质过氧化损伤生物膜，使膜通透性增加，导致细胞功能障碍甚至细胞崩解。有研究［1］表明:自由基损伤在胃黏膜炎症、萎缩病变中具有重要的诱导作用。益气活血中药治萎防变胶囊是基于临床效方而研制的疗效确切的医院制剂之一，主治气虚血瘀型CAG。本研究旨在通过实验研究治萎防变胶囊对CAG 大鼠胃黏膜一氧化氮(NO)/一氧化氮合酶(NOS)、总抗氧化能力(T-AOC )/过氧化脂质(LPO)表达水平的影响，进一步探讨该制剂防治CAG 的作用机制。

1 材料与方法

1．1 动 物

采用Wistar 大鼠90 只，SPF 级，体质量(180 ±20)g，雌雄各半，标准饲料喂养，均由甘肃中医学院医学实验中心提供，动物合格证号:SCXK (甘)2004－0006－0000202。

1．2 药品、试剂与仪器

治萎防变胶囊由人参、枳实、白术、半夏、白花蛇舌草、三七等药物组成，0．4 g / 粒，为甘肃中医学院附属医院院内制剂，批号061208;维酶素，0．2 g / 片，山东鲁北药业有限公司产品，批号060407;盐酸雷尼替丁胶囊，江西汇仁药业有限公司产品，批号0611025。考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(批号20071119，20051029 )、T-AOC 测 试 盒(批 号20071204)、LPO 测试盒(批号20071204)、NO 测试盒(批号20051122)、NOS 测试盒(批号20051120)，均由南京建成医学生物研究所提供;甲基硝基亚硝基胍(MNNG)，Fluka 公司产品，批号68051。DF 110 型电子分析天平，常熟市衡器厂产品;721 型可见光分光光度计，北京瑞利分析仪器公司产品;XYJ 80－2 离心机，江苏响水县医疗器械厂产品;HH－4数显恒温水浴箱，郑州杜甫仪器厂产品。

1．3 分组、模型的建立与给药

除空白对照组10 只大鼠正常饲养不予造模外，其余大鼠建立气虚血瘀型CAG 模型，方法参照文献［2－3］改进:①以灭菌水配制0．1 g/L 甲基硝基亚硝基胍溶液，给大鼠自由饮用(避光)，1 d 配制1 次。②采用饥饱失常喂养法:足量喂养2 d ，禁食1 d 。③给以盐酸雷尼替丁胶囊0．03 g/kg 灌胃，1 d 1 次。综合造模60 d 后，每隔1 周杀检大鼠，取胃黏膜做病理检查判定肠化生的情况，至第12 周，大鼠胃黏膜肠化生形成后开始治疗。

造模成功后将CAG 大鼠按体质量编号，用随机数字表法分为模型对照组，益气活血中药大、中、小剂量组，维酶素组，每组9 只，雌雄各半分笼饲养。益气活血中药大、中、小剂量组分别予0．6，0．3 ，0．15 g/(kg·d)益气活血中药灌胃(分别相当于60 kg 成人每日剂量的10，5，2．5 倍)。维酶素组给予0．25 g/(kg·d)维酶素灌胃(相当于60 kg 成人每日剂量的5 倍)，等效剂量按人与动物体型系数折算［4］，给药容积均为0．01 mL/g 体质量。空白对照组、模型对照组给予同体积蒸馏水灌胃。各组均灌胃给药90 d。

1．4 检测指标

各组动物于末次灌胃给药后，禁食不禁水24 h，测体质量并记录后，断头处死大鼠。胃黏膜组织匀浆制备:低温条件下快速剖取胃黏膜组织，以冰冷的生理盐水冲洗，滤纸吸干，称质量后用眼科小剪刀尽快剪碎，置于匀浆器中，用组织重9 倍生理盐水匀浆(匀浆器的末端置于放冰块的冷水中)，以3500 r/min离心10 min，取上清液置4 ℃冰箱保存，采用比色法检测NO/NOS 及T-AOC/LPO。

1．5 统计学方法

采用SPSS 13．0 统计分析软件处理。计量资料数据以均数()±标准差(s)表示，组间样本均数差异的比较选用F检验，在F检验有统计学意义时，进一步用q检验进行两两比较。以P＜0．05 为差别有统计学意义。

2 结 果

2．1 各组大鼠胃黏膜NO 和NOS 水平对比

与空白对照组对比，模型对照组大鼠胃黏膜组织NO 和NOS 水平升高，差别有统计学意义(P＜0．01，P＜0．05)。与模型对照组对比，益气活血中药各剂量组胃黏膜组织NO/NOS 水平降低，其中大剂量组此两指标较之差别有统计学意义(P＜0．05);维酶素组NO 水平与模型对照组对比，差别亦有统计学意义(P＜0．05)。见表1。

表1 各组大鼠胃黏膜NO 和NOS 水平对比 ±s

表1 各组大鼠胃黏膜NO 和NOS 水平对比 ±s

注:与空白对照组对比，* P ＜0．05，＊＊ P ＜0．01;与模型对照组对比，# P ＜0．05。

组 别 动物数 剂量/(g·kg －1) NO/(μmol·g prot －1) NOS/(U·mg prot －1)6．84 ±1．37 2．12 ±0．54模型对照组 9 — 8．78 ±1．65＊＊ 2．82 ±0．73*益气活血中药大剂量 9 0．60 7．19 ±1．21# 2．25 ±0．57#益气活血中药中剂量 9 0．30 7．89 ±1．59 2．36 ±0．65益气活血中药小剂量 9 0．15 8．19 ±1．78 2．41 ±0．50维酶素组 9 0．25 7．28 ±1．15#空白对照组 9 —2．40 ±0．51

2．2 各组大鼠胃黏膜T-AOC 和LPO 水平对比

与空白对照组对比，模型对照组大鼠胃组织TAOC 水平降低、LPO 水平升高，差别有统计学意义(P＜0．01)。与模型对照组对比，益气活血中药各剂量组T-AOC 水平升高、LPO 水平降低，大、中剂量组较之差别具有统计学意义(P＜0．05);维酶素组LPO 水平与模型对照组对比，差别有统计学意义(P＜0．05)。见表2。

表2 各组大鼠胃黏膜T-AOC 和LPO 水平的影响 ±s

表2 各组大鼠胃黏膜T-AOC 和LPO 水平的影响 ±s

注:与空白对照组对比，＊＊ P ＜0．01;与模型对照组对比，#P ＜0．05。

组 别 动物数 剂量/(g·kg －1) T-AOC/(U·mg prot －1) LPO/(nmol·mg prot －1)6．20 ±0．89 8．51 ±1．80模型对照组 9 — 4．85 ±0．82＊＊ 11．71 ±2．62＊＊益气活血中药大剂量 9 0．60 6．10 ±0．95# 9．32 ±2．02#益气活血中药中剂量 9 0．30 6．06 ±1．21# 9．08 ±2．03#益气活血中药小剂量 9 0．15 5．98 ±1．08 9．71 ±2．89维酶素组 9 0．25 5．75 ±0．92 9．33 ±2．56空白对照组 9 —#

3 讨 论

慢性萎缩性胃炎属中医学“痞满”“胃脘痛”范畴，主要病理机制为气血两虚、瘀血内停的虚实夹杂之证，其中血瘀是CAG 的主要病理基础。因本病病程迁延，反复难愈，病变由气入血，由经入络，又易导致因虚致瘀的病理改变，此与现代医学“胃黏膜血循环障碍”的认识相一致［5］。益气活血法为临床常用防治CAG 的治则治法之一。

有研究［6］表明:氧自由基与急慢性胃黏膜损伤、慢性萎缩性胃炎和胃癌的形成有密切关系。在正常生理条件下，机体内存在着自由基的清除系统，其中T-AOC 是机体内抗氧化力量的总体体现，是机体对抗氧自由基损伤的主要体系，是可以反映机体对外来刺激代偿能力及抗氧化能力的良好指标［7］。笔者在实验中发现:CAG 模型大鼠胃黏膜LPO 水平明显升高，而T-AOC 水平明显下降，尤其是局部胃黏膜自由基代谢异常时更明显。此说明了自由基代谢异常在CAG 中起着重要作用。

NO 是一种神经递质和信使分子，由NOS 催化底物左旋精氨酸产生。NOS 主要有两种异构体，即原生型(CNOS)和诱生型NOS(iNOS)。其中iNOS 几乎分布于所有组织中，在受到内毒素或各种细胞因子刺激后被激活，可生成大量NO。NO 的作用因剂量、作用时间的不同而有很大差异，如:早期、小剂量NO 可以抑制内皮素产生，增加胃黏膜血流量，具有细胞保护作用。当iNOS 被激活释放大量NO 时，过量生成的NO 一方面将发挥其自由基(或继发生成的高活性羟自由基)性质的细胞毒作用，直接损害胃黏膜血管内皮细胞，刺激NO 更多释放，形成恶性循环;另一方面失去对ET 的抑制，减少胃黏膜血流量，造成胃黏膜缺血－再灌流损伤。同时，NO 是抑制性非肾上腺非胆碱能神经的转递和调节递质。NO 的释放可以延长消化间期移动性复合运动波相时间，引起胃排空延长［8－9］，从而诱发胃动力障碍。益气活血中药治萎防变胶囊主要由人参、枳实、白术、半夏、白花蛇舌草、三七等药味经过提取、分离而组成，主治气虚血瘀型慢性萎缩性胃炎。现代药理学研究证明:人参［10］、枳实［11］、白术［12］、半夏［13］、白花蛇舌草［14］、三七［15］所含有效成分具有不同程度改善胃肠平滑肌运动、解痉镇痛、抗自由基损伤、抑制血小板聚集、抑杀幽门螺杆菌，以及诱导肿瘤细胞凋亡、抗肿瘤的作用。本研究结果显示:益气活血中药治萎防变胶囊可通过提高胃黏膜组织抗氧化能力、减轻自由基胶联损伤来发挥保护胃黏膜的作用。

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