STR分型技术应用于白血病患者个人识别1例

赖 力，薛士杰，金静君

（福建省医学科学研究院明正司法鉴定所，福建 福州 350001）

STR分型技术应用于白血病患者个人识别1例

赖 力，薛士杰，金静君

（福建省医学科学研究院明正司法鉴定所，福建 福州 350001）

法医遗传学；STR；白血病；个人识别

1 案 例

1.1 简要案情

某男性患者就诊于某医院，经骨髓穿刺取出骨髓细胞涂片镜检诊断为白血病，但患者怀疑医院调错骨髓样本，要求医院进行赔偿，医院委托本鉴定所对该患者骨髓细胞与患者自身是否为同一个体进行鉴定。本鉴定所接受医院委托，对医院提供的患者血液和骨髓样本进行检测比对，提示两样本遗传信息存在异常，经过询问病史，发现患者骨髓细胞存在染色体核型分型异常。为保证获得患者自身准确的遗传信息，本鉴定所要求医院提供患者妻子及其孩子的血液样本进行检测，对STR基因座的异常分型进行分析。

1.2 检验过程

Chelex-100法提取DNA，采用Identifiler试剂盒（美国AB公司）进行15个STR基因座检测，发现患者血液样本与孩子血液样本的15个STR基因座均符合孟德尔遗传规律，而患者骨髓样本的FGA、Amelogenin两个基因座与患者血液样本不符合，其中Amelogenin基因座分型仅为X等位基因。之后，先后采用PowerPlex®16试剂盒（美国Promega公司）、Sinofiler试剂盒（美国AB公司）增加4个STR基因座进行检测，并同时对FGA与Amelogenin基因座进行复核验证。针对患者骨髓样本Amelogenin基因座仅出现X等位基因，对患者血液与骨髓样本增加Y-filer试剂盒（美国AB公司）16个Y-STR基因座以及Investigator Argus X-12试剂盒（德国QIAgen公司）12个X-STR基因座检测。所有检测均严格按照使用说明书操作，在AB 9700型基因扩增仪上完成STR基因座复合扩增，扩增产物在AB 3130基因分析仪上进行毛细管电泳，分别采用LIZ500、ILS600以及BTO550分子质量标准为内标，用GeneMapper ID v3.2软件进行基因分型。

1.3 结果

患者、患者妻子血液样本与孩子的血液样本经Identifiler、PowerPlex®16和Sinofiler 3个常染色体STR试剂盒分型检测，获得的19个STR基因座结果均符合孟德尔遗传定律，支持患者、患者妻子与孩子之间存在亲生血缘关系。Amelogenin性别基因座分型也完全正常。但是从患者骨髓样本检测出的FGA基因座结果与患者血液样本的检测结果不一致，并且在Amelogenin基因座表现为X的非正常结果（表1）。对患者血液样本与骨髓样本增加检测Y-STR与XSTR基因座，均检测出相同的16个Y-STR基因座与12个X-STR基因座基因型（表2~3），且均呈现单倍型现象。

表1 患者血液、骨髓样本与其妻子、孩子血液样本的常染色体STR基因座分型

表2 患者血液、骨髓样本与其孩子血液样本的Y-STR基因座分型

表3 患者血液、骨髓样本X-STR基因座分型

2 讨 论

白血病是造血干细胞的恶性克隆性疾病，白血病细胞增殖失控，分化障碍，凋亡受阻，而停止在细胞发育的不同阶段，骨髓等造血组织中白血病细胞大量增生累积，向正常组织侵润导致疾病。

本例中患者骨髓样本两个STR基因座发生变异，其中FGA基因座发生了基因型的改变，由“21，24”变异为“21，25”，出现了新等位基因25；Amelogenin基因座发生完全杂合性丢失，由杂合子基因型“X，Y”，丢失一个等位基因Y，表现为纯合子基因型“X”。患者骨髓样本检测出Y-STR、X-STR基因座基因型，且均呈现单倍型现象，符合男性遗传基因特点，可能由于扩增区基因突变[1]，抑或由于Y染色体短臂片段缺失（例如小Y染色体核型）导致Amelogenin基因座扩增失败。

本例为白血病患者的骨髓样本与血液样本进行同一认定，因未能取得患者正常组织样本，故借助于患者妻子与孩子的STR基因座遗传信息推算出生父基因，生父基因均符合患者血液样本STR基因座中的一半等位基因分型，且另一半等位基因分型与骨髓样本STR基因座等位基因分型结果一致，因此估计患者血液样本中的DNA与正常组织DNA一致。根据赵书民等[2]提出的消化系统肿瘤组织身源准则，当满足共有等位基因数IAn≥23且共有等位基因座数A2≥8时，不支持所检测的肿瘤组织和正常组织来自两个无关个体，如不能确认肿瘤患者是否有全同胞，则当满足IAn≥26且A2≥11时可判定所检测的肿瘤组织和正常组织来自同一个体。本例中两个样本的等位基因比较结果为IAn=29且A2=14，借用以上判定肿瘤组织身源准则，并且结合Y-STR、X-STR基因座分型结果，在排除存在同卵双胞胎的前提下，支持该骨髓样本与血液样本来源于同一个人的推断。有关白血病患者血液与骨髓STR基因座异常分型以及在白血病发病期间、治疗预后阶段STR基因座分型的变化可做进一步研究。

在个人识别鉴定实践中，肿瘤组织的身源鉴定一直是难点，个人识别常用的STR基因座在肿瘤组织中经常存在各种变异现象[3]，包括出现新等位基因、基因型改变和杂合型丢失等，且可能存在多基因座同时变异，严重影响鉴定结论，因此在个人识别尤其是肿瘤组织身源鉴定时应具备多种检测手段，完善判定准则，以保证结果判断的准确性。

[1]李屹，洪银娥，马汝能，等.男性个体Amelogenin基因座Y片段缺失1例[J].中国法医学杂志，2010，25（6）：446-447.

[2]赵书民，张素华，李成涛.采用Identifiler系统判定消化系统肿瘤组织身源准则探讨[J].法医学杂志，2011，27（2）：102-106.

[3]赵书民，李成涛，张素华，等.共有基因座数和等位基因数用于结直肠癌组织的身源认定[J].法医学杂志，2009，25（6）：412-416，420.

2011-11-25）

（本文编辑：柳 燕）

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2012.02.032

1004-5619（2012）02-0159-02

赖力（1980—），男，福建福州人，硕士，助理研究员，主要从事HLA移植免疫、亲权鉴定方面研究；E-mail：amoeba 2000@126.com