高效液相色谱法测定利胆片中绿原酸的含量

刘海霞，杨志伟，邹文斌

（松原市药品检验所，吉林 松原138000）

利胆片由大黄、金银花等11味中药组成，具有舒肝止痛、清热利湿之功效，是治疗肝胆湿热所致的胁痛的常用中成药，收载于《中国药典》2010年版一部，无金银花主要成分绿原酸含量测定检验项目。本文采用高效液相色谱法，一次进样分离测定利胆片中绿原酸的含量。

1 仪器与药品

1.1 高效液相色谱仪

北京普析通用仪器公司L6－AS6。检测器：紫外检测器。色谱工作站：LCwin1.0（采用自动进样、自动记录）。

1.2 试药

甲醇：色谱纯；其它均为分析纯。

1.3 对照品

绿原酸对照品，购自中国药品生物制品检定所。

1.4 药品

利胆片，市场购买。样1：青岛国风药业股份有限公司，100106；样2：青岛国风药业股份有限公司，100922；样3：芜湖张恒春药业有限公司，110203；样4：芜湖张恒春药业有限公司，110827；样5：吉林真元制药有限公司，101104。

2 色谱条件与分离结果

2.1 色谱条件

色谱样：Kromasil C18柱，4.6mm×250mm；流动相：甲醇－冰醋酸－水（15∶1∶85）；流速1.0mL／min；检测波长324nm；柱温30℃。

2.2 分离结果

绿原酸对照品及利胆片样品色谱，见图1、图2。

图1 对照品液相色谱

图2 供试品液相色谱

3 方法与结果

3.1 对照品溶液的制备

取绿原酸对照品约10mg，精密称量，置250mL容量瓶中，加40%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。对照品溶液浓度39.94μg／mL。

3.2 供试品溶液的制备

取供试品10片，除去包衣，精密称定重量，研细，精密称取适量（药相当于6片），置具塞锥形瓶中，精密加入40%甲醇150mL，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用40%甲醇补足减失的重量，取上清液以0.45μm滤膜滤过，作为供试品溶液。

3.3 线性关系考察

分别精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10mL，置于10mL容量瓶中，加40%甲醇至刻度，分别进样10μL，按上述色谱条件分离测定，以对照品溶液浓度为横坐标、以绿原酸峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程、相关系数及线性范围分别为Y＝18261.15X＋863.9，r＝0.9998，结果表明当浓度为7.99～39.94μg／mL时呈良好的线性关系。

3.4 精密度考察

取对照品溶液5mL，加40%甲醇稀释至10mL，进样10μL，分离测定绿原酸对照品的峰面积值，重复进行样5次，峰面积分别为818857，819288，816224，823410，819703，RSD＝0.31%（n＝5）。

3.5 稳定性试验

精密称取供试品适量（约相当于6片），按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，精密量取该溶液5mL，置10mL容量瓶中，加40%甲醇稀释至刻度，每小时进样1次，每次10μL，连续进样8次，测得绿原酸的峰面积分别为：872812、868288、870899、869083、868908、870236、868087、869180。结果7h内表明绿原酸的40%甲醇溶液较稳定，RSD＝0.18（n＝8）。

3.6 重复性试验

精密称取同一生产企业同一批号的利胆片（吉林真元制药有限公司，批号：101104）样品5份，按供试品溶液制备的方法制得供试品溶液，取各份供试品溶液5mL，分别置于10mL容量瓶中，加40%甲醇稀释至刻度，分别进样10μL，按外标法测定每份含量，结果每份含量分别为（每片含绿原酸 mg数）：0.964、0.961、0.963、0.959、0.956mg，RSD＝0.33%（n＝5）

3.7 加样回收率试验

取利胆片（吉林真元制药有限公司，批号：101104，已测得含量为0.956mg／片）约6片，共5份，精密称量，分别精密加入绿原酸对照品溶液10mL（浓度为39.94μg／mL），再分别加入40%甲醇溶液140mL，照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。分别吸取供试品溶液5mL，置10mL容量瓶中，加40%甲醇稀释至刻度，进样20μL测定，按外标法计算含量，结果见表1。

表1 加样回收率试验

3.8 样品测定

取不同生产企业不同批号的利胆片各10片，除去包衣，精密称定重量，研细，精密称取适量（约相当于6片），置具塞锥形瓶中，照供试品溶液制备方法制成供试品溶液。精密量取各供试品溶液5mL，置10mL容量瓶中，加40%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10μL，分离测定，按外标法测定含量，测得每片含绿原酸量见表2。

4 讨论

采用高效液相色谱法，一次进样分离测定利胆片中绿原酸的含量，方法简便、快速、结果可靠。本实验经多种流动相选择，比较绿原酸对照品的保留时间、分离度及理论塔板数，认为甲醇－冰醋酸－水（15∶1∶85）分离效果较好。对样品提取条件考察时，采用甲醇、70%甲醇、40%甲醇、水分别经15、30、60min的超声提取，经测定比较，结果表明采用40%甲醇超声提取30min可提取完全，效果最佳。根据《中国药典》有关规定及处方组成，测定结果表明采用高效液相色谱法测定利胆片中绿原酸的含量，误差小，方法可行，可为质量控制提供科学依据。

表2 利胆片中绿原酸的含量