利胆止痛片药效学研究

张立群， 闫俊岭△， 王 真， 张信岳， 李 钦， 陈爱君

(1.云南白药研究院， 云南 昆明 650032； 2.浙江省医学科学院， 浙江 杭州 310013)

利胆止痛片是由柴胡、赤芍、茵陈、延胡索等药材组成的复方制剂，该方具有清热利胆，理气止痛之功效，用于肝胆湿热所致的胁痛，黄疸(如急、慢性肝炎，胆囊炎)等症的治疗。临床应用证明，其治疗急慢性肝炎、胆囊炎等疗效显著，为验证其临床疗效，本文从解热、利胆、保肝和镇痛等多方面进行了药效学研究。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 利胆止痛片(浸膏粉)，由云南白药集团丽江药业有限公司生产提供，批号：00708020。阿司匹林(肠溶片)，上海九褔药业有限公司产品，批号：20040810；消炎利胆片，广州白云山和记黄埔中药有限公司产品，批号：E8A004。戊巴比妥钠，中国医药(集团)上海化学试剂公司进口分装，批号：20021216；巴豆油合剂，大肠杆菌(标准株)，由中国药品生物制品检定所提供；四氯化碳，江苏永华精细化学品有限公司产品，批号：080530；α-萘异硫氰酸酯(ANIT)，北京通县育才精细化工厂生产，批号：081019。

1.2 动物 ICR小鼠，SD大鼠，均由浙江省实验动物中心提供，合格证：SCXK(浙)2003-0001号，DHA豚鼠，雌雄兼用，购自上海申旺实验动物养殖场，动物许可证号：SCXK(沪)2002-0011。新西兰家兔，雌雄兼用，由浙江中医学院实验动物中心提供，合格证：SYHK(浙)2003-0003号。

1.3 仪器 ZRY-2智能热原仪，天津大学精密仪器厂生产；AEL-200电子天平，日本SHIMADZU公司生产；721可见分光光度计，上海分析仪器厂生产；AT-738PLUS半自动生化仪，上海安泰分析仪器有限公司生产；MOTIC生物图像采集分析系统，厦门麦奥迪克仪器公司生产。

1.4 利胆止痛片对化脓性胆道感染家兔(胆囊炎)的作用 健康新西兰家兔50只，体重1.6～2.2 kg，雌雄兼用，随机选取8只作为正常对照组，其余42只家兔参照文献方法造模[1]：静脉注射3%戊巴比妥钠生理盐水溶液麻醉，在上腹部做 5 cm～6 cm切口，暴露胆囊，抽出胆汁。向胆囊内注入0.3 mL生理盐水菌液，结扎逐层缝合伤口；正常对照组也按上述方法行假手术，但抽出胆汁后不注射菌液，其他同手术组操作。术后第3天从造模家兔中筛选40只随机分为模型对照组、阳性对照组、利胆止痛片1.4、0.7、0.35 g(浸膏)/kg剂量组，分别灌胃给予相应药物，每天1次，连续30天。正常对照组以及模型对照组给予等体积蒸馏水，每周检测体温，给药2周、4周时耳静脉取血、抗凝处理后进行血液学检查，末次给药后次日，取空腹血分离血清，测定总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆固醇、甘油三酯。

1.5 利胆止痛片对大鼠胆汁流量以及总胆红素的影响 取SD大鼠，体重200～250 g，随机分为正常对照组、阳性对照组、利胆止痛片1.0、0.5、0.25 g(浸膏)/kg三剂量组，每组8只，实验前禁食不禁水12 h。试验按文献所示方法[2]进行：每鼠用乌拉坦麻醉后，仰卧位固定；沿腹正中线切口2cm，在十二指肠降部肠系膜中找到胆管，插入塑料管，见有淡黄色胆汁流出后，结扎固定，收集胆汁。然后各组大鼠由十二指肠分别按剂量给药，给药后每30 min收集胆汁1次，共4次，记录各时段累计胆汁流量，并测定胆汁中的总胆红素浓度。

1.6 利胆止痛片对四氯化碳所致大鼠慢性肝损伤的影响 雄性SD大鼠，体重120～150 g，随机留取10只作为正常对照，其余大鼠按文献所示方法造模[3]，造模8周后采血测定血清中ALT、AST，并根据ALT结合AST结果分组并开始给药，设利胆止痛片1.0、0.5、0.25 g(浸膏)/kg三剂量组、阳性对照组以及模型对照组，分别灌胃给予相应药物，每天1次，连续4周，给药体积均为10 mL/kg，末次给药后次日股动脉取血，测定血清中生化指标；取部分肝脏，然后制备10%组织匀浆液，测定SOD活性及MDA含量。

1.7 利胆止痛片对化学致痛和光热致痛的影响

1.7.1 利胆止痛片对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 雄性ICR小鼠60只，体重18～22 g，随机分为对照组、阿司匹林0.2 g/kg阳性对照组、消炎利胆片12片/kg阳性对照组、利胆止痛片1.5、0.75、0.375 g(浸膏)/kg三剂量组，每组10只，分别灌胃给药，给药体积均为20 mL/kg，对照组给予等容积蒸馏水；给药后30 min，腹腔注射0.6%醋酸生理盐水0.2 mL/只，观察记录小鼠扭体反应潜伏期以及15 min内的扭体次数。

1.7.2 利胆止痛片对光热致痛法所致小鼠痛阈值的影响 选用在TF光热测痛仪上预测甩尾痛阈值在3 s～10 s范围的ICR雌性小鼠，体重(18～22) g，随机分为对照组、阿司匹林0.2 g/kg阳性对照组、消炎利胆片12片/kg阳性对照组、利胆止痛片1.5、0.75、0.375 g(浸膏)/kg三剂量组，每组11只，分别灌胃给药，给药体积均为20 mL/kg，对照组给予等容积蒸馏水，在TF光热测痛仪上测定给药后30、60、120 min各组小鼠的甩尾痛阈值[4]。

2 结果

2.1 利胆止痛片对化脓性胆道感染(胆囊炎)家兔的影响

表1 利胆止痛片对化脓性胆道感染家兔体温的影响( ±s ,n=8)

表1 利胆止痛片对化脓性胆道感染家兔体温的影响( ±s ,n=8)

组别剂量(g/kg)体温(℃)造模前造模后给药1周给药2周给药3周给药4周正常对照--39 9±0 639 5±0 139 5±0 439 4±0 239 7±0 439 7±0 4模型对照--39 7±0 541 2±1 0#40 6±0 7#40 5±0 4#40 2±0 5#39 9±0 8消炎利胆片6片/kg39 8±0 241 0±0 6#39 9±0 5#∗39 8±0 3#∗39 7±0 5∗39 7±0 4利胆止痛片1 439 6±0 341 1±0 2#39 7±0 4∗39 4±0 4∗39 3±0 3∗39 6±0 2利胆止痛片0 739 8±0 241 3±0 8#39 7±0 2∗39 5±0 2∗39 2±0 7∗39 7±0 1利胆止痛片0 3539 7±0 641 1±0 6#39 6±0 4∗39 4±0 3∗39 8±0 7∗40 0±0 6

注：与正常对照组比较，#P<0.05；与模型对照组比较，*P<0.05

从表1结果可见，造模后家兔体温明显升高，但其后呈逐渐下降趋势，至给药4周后基本恢复正常，利胆止痛片用药后1～3周家兔体温较模型对照组明显降低(P<0.05)，提示对化脓性胆道感染所致家兔体温升高有一定的解热作用。

表2 利胆止痛片对化脓性胆道感染家兔血液生化的影响( ±s ,n=8)

表2 利胆止痛片对化脓性胆道感染家兔血液生化的影响( ±s ,n=8)

组别剂量(g/kg)AST(u/L)ALT(u/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)TBIL(umol/L)正常对照--17 3±4 319 8±4 61 92±0 571 13±0 595 86±1 55模型对照--37 3±16 4#41 8±13 9#1 14±0 37#1 13±0 428 19±3 85#消炎利胆片6片/kg29 7±12 931 8±8 21 33±0 521 71±1 056 48±2 11利胆止痛片1 431 4±15 532 6±8 81 71±0 46∗0 96±0 504 67±0 29∗利胆止痛片0 732 4±14 533 2±8 01 84±0 38∗1 48±0 585 45±0 76∗利胆止痛片0 3530 1±16 537 4±8 81 76±0 37∗1 89±1 028 40±3 36

注：与正常对照组比较，#P<0.05；与模型对照组比较，*P<0.05

从表2结果可见，造模后家兔血清ALT、AST、TB明显升高，TC明显降低，利胆止痛片各剂量组用药4周后上述指标均有不同程度地改善，与模型对照组相比，利胆止痛片各剂量组TC明显升高，中、高剂量组TB明显降低，ALT、AST也有降低地趋势，提示对该模型的肝损伤有一定的改善作用。

2.2 利胆止痛片对大鼠胆汁流量以及总胆红素的影响 见表3、表4。

表3 利胆止痛片对大鼠胆汁流量的影响( ±s ,n=8)

表3 利胆止痛片对大鼠胆汁流量的影响( ±s ,n=8)

组别剂量(g/kg)胆汁流量(mL)给药前药后30min药后60min药后90min药后120min对照--0 43±0 190 38±0 160 77±0 281 14±0 411 51±0 51消炎利胆片8片/kg0 46±0 150 44±0 150 89±0 251 28±0 341 69±0 42利胆止痛片1 00 49±0 120 43±0 180 99±0 22∗1 48±0 33∗1 91±0 41∗利胆止痛片0 50 42±0 150 43±0 150 82±0 261 28±0 301 74±0 43利胆止痛片0 250 41±0 180 38±0 130 79±0 271 22±0 411 63±0 53

注：与对照组比较，*P<0.05

表4 利胆止痛片对大鼠胆汁中总胆红素的影响( ±s )

表4 利胆止痛片对大鼠胆汁中总胆红素的影响( ±s )

组别剂量(g/kg)总胆红素(TBI)/(umol/L)给药前药后30min药后60min药后90min药后120min对照--6 42±1 296 41±1 877 38±2 978 80±2 999 82±2 10消炎利胆片8片/kg5 28±1 505 49±1 916 76±2 507 71±2 609 25±2 83利胆止痛片1 05 73±1 196 03±1 257 22±1 867 64±2 158 53±3 28利胆止痛片0 55 21±1 156 11±1 877 01±2 358 49±3 268 82±3 79利胆止痛片0 255 73±1 306 68±1 898 18±2 459 38±2 649 65±3 23

从表3结果可见，利胆止痛片各剂量组给药后各时段胆汁流量有不同程度地增加，呈现明显的剂量依赖关系，其中高剂量组给药后60～90 min累计胆汁流量明显高于对照组(P<0.05)，提示利胆止痛片有一定的利胆作用；另从表4结果可见，利胆止痛片各剂量组给药后各时段胆汁中总胆红素无明显改变，表明利胆止痛片对胆汁成分可能无明显影响(见表7)。

2.3 利胆止痛片对四氯化碳所致慢性肝损伤大鼠的作用 四氯化碳造模8周后，大鼠体重明显低于正常对照组(P<0.05)，表明造模因素对其体重增长产生明显影响，利胆止痛片各剂量组用药后2周、4周体重仍明显低于正常对照组，但其增长速度较模型组有所加快，到给药4周时已明显高于模型对照组，表明利胆止痛片对四氯化碳肝损伤大鼠的体重恢复正常增长有一定的促进作用(见表5)。

表5 利胆止痛片对四氯化碳致慢性肝损伤大鼠体重的影响( ±s )

表5 利胆止痛片对四氯化碳致慢性肝损伤大鼠体重的影响( ±s )

组别剂量(g/kg)体重(g)造模前造模8周给药2周给药4周正常对照--136±10548±43581±47624±49模型对照--134±11472±51#469±57#473±62#消炎利胆片8片/kg136±11503±28#529±30#∗555±34#∗利胆止痛片1 0132±11491±28#504±31#522±34#∗利胆止痛片0 5136±8490±55#511±59#524±65#∗利胆止痛片0 25135±8509±54#521±44#∗542±38#∗

注：正常对照组n=10，其余n=15。正常对照组比较#P<0.05，与模型对照组比较，*P<0.05。

表6 利胆止痛片对四氯化碳致慢性肝损伤大鼠血清生化的影响( ±s )

表6 利胆止痛片对四氯化碳致慢性肝损伤大鼠血清生化的影响( ±s )

组别剂量(g/kg)AST(u/L)ALT(u/L)给药前给药4周后给药前给药4周后正常对照--191±35136±2718±522±8模型对照-- 287±52# 403±50# 92±41# 202±70#消炎利胆片8片/kg 302±72# 352±88#∗ 85±64# 123±55#∗利胆止痛片1 0 286±84# 326±78#∗ 89±44# 126±43#∗利胆止痛片0 5 271±58# 337±73#∗ 76±54# 177±61#利胆止痛片0 25 304±54# 345±53#∗ 73±39# 197±57#

注：除正常对照组n=10，其余n=15。与正常对照组比较，#P<0.05，与模型对照组比较，*P<0.05

表7 利胆止痛片对四氯化碳致慢性肝损伤大鼠肝系数及SOD和MDA的影响( ±s )

表7 利胆止痛片对四氯化碳致慢性肝损伤大鼠肝系数及SOD和MDA的影响( ±s )

组别剂量(g/kg)肝系数(g/100g体重)肝脏MDA(nmol/mg)肝脏SOD(u/mL)正常对照--2 53±0 202 99±0 51118 7±12 0模型对照--5 08±0 57#4 92±2 15#85 0±22 8#消炎利胆片8片/kg5 41±0 39#3 68±1 2871 3±21 0利胆止痛片1 05 23±0 61#3 10±1 87∗103 6±28 4∗利胆止痛片0 55 23±0 58#3 05±0 93∗91 1±20 6利胆止痛片0 255 03±0 87#3 62±2 3797 6±31 1

注：除正常对照组n=10，其余n=15。与正常对照组比较，#P<0.05；与模型对照组比较，*P<0.05

从表7结果可见，四氯化碳造模后，肝系数增大1倍以上，利胆止痛片各剂量组用药4周虽然对肝系数无明显影响，但中、高剂量组明显降低肝组织MDA水平，高剂量组并能明显提高肝组织SOD水平，提示利胆止痛片对肝脂质过氧化也有一定的保护作用。

2.4 利胆止痛片对化学致痛和光热致痛的影响

2.4.1 利胆止痛片对醋酸所致小鼠扭体反应的作用 从表8结果可见，利胆止痛片各剂量组扭体反应潜伏期略有延长，但与对照组均无统计学差异(P>0.05)，扭体反应次数较对照组有不同程度减少，其中高剂量组与对照组存在统计学差异(P<0.05)，提示利胆止痛片较高剂量有一定的镇痛作用；此外，阳性药物消炎利胆片也能明显降低扭体反应次数，但对扭体反应潜伏期无明显延长作用(见表8)。

表8 利胆止痛片对醋酸所致小鼠扭体反应的影响( ±s )

表8 利胆止痛片对醋酸所致小鼠扭体反应的影响( ±s )

组别剂量(g/kg)动物数(只)扭体反应潜伏期(sec )扭体次数(次/15min)对照-10192±2444±12消炎利胆片12片/kg10194±3134±5∗阿司匹林0 210 238±43∗23±7∗利胆止痛片1 510211±45 34±10∗利胆止痛片0 7510207±5138±15利胆止痛片0 37510200±3535±16

注：与对照组比较，*P<0.05

2.4.2 利胆止痛片对光热致痛法所致小鼠痛阈值的作用 从表9结果可见，利胆止痛片中剂量组给药后各时段小鼠甩尾痛域值较给药前或对照组都有明显提高(P<0.05)，最大提高约40%，高剂量组给药后各时段小鼠甩尾痛域值较给药前也有明显提高(P<0.05)，提示利胆止痛片对光热致痛小鼠有镇痛作用。阳性对照药消炎利胆片镇痛作用较弱(见表9)。

表9 利胆止痛片对小鼠光热致痛法痛阈值的影响( ±s ,n=11)

表9 利胆止痛片对小鼠光热致痛法痛阈值的影响( ±s ,n=11)

组别剂量(g/kg)不同时间痛阈值(sec)药前药后30min药后60min药后120min对照--6 9±2 27 6±1 97 1±1 17 4±2 2消炎利胆片12片/kg7 5±2 87 7±2 38 1±2 79 1±2 5阿司匹林0 27 0±2 08 4±3 38 2±2 39 4±3 2利胆止痛片1 56 0±2 08 2±1 4#8 7±2 1#8 9±1 3#利胆止痛片0 757 2±1 69 7±2 2#∗8 7±1 6#∗10 1±3 5#∗利胆止痛片0 3756 9±3 07 5±2 97 0±2 67 3±1 8

注：与给药前比较,#P<0.05；与对照组比较,*P<0.05

3 结论

利胆止痛片1.4、0.7、0.35 g(浸膏)/kg剂量灌胃给药可明显抑制化脓性胆道感染家兔的体温以及白细胞的升高，改善血清中ALT、AST、TB、TC等生化指标，并能明显减轻胆囊病变程度；1.0、0.5、0.25 g(浸膏)/kg剂量能不同程度地增加在体插管法大鼠胆汁流量，并对四氯化碳肝损伤大鼠的体重增长、血清生化ALT、AST指标、肝脂质过氧化SOD、MDA指标产生有益的影响，提示利胆止痛片有一定的保肝利胆作用；此外，利胆止痛片1.5、0.75、0.375 g(浸膏)/kg剂量能使醋酸所致小鼠扭体反应潜伏期略有延长，扭体次数明显减少，中、高剂量并能提高给药后30～120 min时段光热测痛法小鼠甩尾痛阈值，提示具有镇痛作用。

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