类风湿关节炎患者血清炎性因子、ANCA水平与血管内皮损伤标志物的相关性分析

王艳娇 李琳芸 彭长华 江 涛 王昌富

类风湿关节炎（RA）是一种以慢性进行性关节病变为主的全身性自身免疫性疾病。血管内皮损伤是RA关节外病变之一，但常为临床所忽视。血管内皮损伤是心脑血管疾病发生发展的重要机制，近年来研究显示，RA患者具有较高的心血管疾病发病率与死亡率［1，2］。故关注RA患者血管内皮损伤对于有效预防心血管疾病有重要意义。有研究报道［3，4］，RA患者体内长期慢性炎症反应及自身抗体可能参与血管内皮损伤。因此本研究检测分析活动期和缓解期RA患者炎性细胞因子、中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、血管内皮损伤标志物血清水平变化，以及炎性因子白细胞介素－6（IL－6）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）与血管内皮损伤标志物－血管性血友病因子（vWF）、可溶性细胞黏附分子－1（sICAM－1），血管内皮黏附分子－1（sVCAM－1）之间的相关性，进一步论证RA患者血管内皮损伤的机制。

1 资料与方法

1.1 检测对象

RA组106例，其中男16例，女90例，平均年龄50.6岁，为华中科技大学同济医学院附属荆州医院2010年8月～2011年7月门诊和住院病人，符合美国风湿病学会1987年RA诊断标准［5］，并排除高血压、糖尿病及其它心血管疾病和风湿性疾病，其中处于活动期83例（RA活动组），缓解期23例（RA缓解组）。另选55例体检健康人群作为对照组，其中男8例，女47例，平均年龄51.2岁，与RA组年龄及性别组成均具有可比性。

1.2 标本采集

抽取受试者清晨空腹静脉血3ml，分离血清于－70℃保存备用。

1.3 检测方法

采用ELISA检测炎性因子IL－1β、IL－6、IL－17、TNF－α 及 血 管 损 伤 标 志 物 vWF、sICAM－1、sVCAM－1水平，试剂均为上海西塘生物科技有限公司提供的进口分装试剂盒，采用酶免疫分析处理系统（BEPⅢ型，SIEMENS公司）；IIF法检测 ANCA，试剂盒由德国欧蒙医学实验诊断股份公司提供，用荧光显微镜（BX51TRF，OLYMPUS公司）观察结果。

检验操作按照厂家提供的说明书进行。ANCA有两种荧光模型，胞浆型（cANCA）和核周型（pANCA）。cANCA细胞核无特异性荧光，均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中。pANCA位于中性粒细胞核周，显示光滑的带状荧光。

1.4 统计学处理

检测结果采用SPSS11.5和ELISA回归／拟和模型软件进行统计学分析。用回归／拟和模型对标准品相对应的浓度和所检测的吸光度进行拟和优度和相关系数检验，选择拟合优度最大的模型绘制标准曲线，并计算测试样品相应的浓度。数据用均数和全距表示，计量资料的组间比较用 Wilcoxon Mann－Whitney检验，对各组检测结果的相关性采用Spearman相关性分析，阳性率的比较用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 RA组和正常对照组各指标检测结果

RA 活动组IL－6、TNF－α、vWF、sICAM－1、sVCAM－1水平及ANCA阳性率均高于对照组；RA缓解组IL－6、vWF水平低于RA活动组，vWF、sV－CAM－1水平高于对照组。见表1。

2.2 RA患者血清炎性因子与血管内皮损伤标志物水平的相关性分析

RA活动组的IL－6与sVCAM－1呈显著正相关，IL－1β与 vWF、sICAM－1 呈 显 著 负 相 关，IL－17与vWF、sVCAM－1呈显著正相关；在RA缓解组内，IL－1β与vWF呈显著负相关。见表2。

表1 各组炎性因子及血管内皮损伤标志物指标检测结果

表2 RA患者炎性因子与血管内皮损伤相关性（r）

2.3 RA患者ANCA阳性组与ANCA阴性组各血管内皮损伤标志物水平比较

ANCA阳性组vWF水平高于ANCA阴性组，见表3。

表3 RA患者ANCA阳性组与ANCA阴性组血管内皮损伤标志物水平

3 讨 论

血管内皮损伤的发生是一个缓慢的亚临床状态，因缺乏明显的临床症状，所以在临床诊疗中常常被忽视。血管内皮细胞损伤后常释放其独特内容物vWF，并伴有ICAM－1、VCAM－1表达的增加，因此vWF、sICAM－1、sVCAM－1血清浓度升高可作为血管内皮细胞损伤的标志［6］。与其它方法如血管造影术、血流扩张术、激光多普勒流量技术等［7］比较，其操作简单方便，创伤性较小，标本便于保存，因此临床应用较多。长期随访结果显示，高水平vWF与RA患者后期罹患心血管疾病相关［8］，本文结果显示RA患者的血管内皮损伤血清标志物vWF、sICAM－1、sVCAM－1水平均高于对照组（P＜0.05），其中RA活动组患者vWF水平高于缓解组（P＜0.05），RA缓解组vWF、sVCAM－1水平显著高于对照组（P＜0.01），提示RA患者存在血管内皮损伤，并与RA活动性有关。

RA患者体内多种炎性细胞因子的过度表达，可能参与血管内皮细胞损伤。炎性细胞因子损伤血管内皮的具体机制不明确，可能是这些炎性因子直接作用于血管内皮细胞，诱导血管内皮细胞高表达黏附分子，导致大量白细胞的黏附，诱发白细胞活化与“呼吸爆发”，产生大量氧自由基和过氧化氢等损伤内皮细胞［9］。本文检测结果显示，RA患者炎性因子IL－6、TNF－α均明显高于对照组（P＜0.05），且活动期IL－6水平高于缓解期（P＜0.05）。进一步分析显示，RA 患者炎性因子IL－6、IL－1β、IL－17与血管内皮损伤标志物vWF、sVCAM－1、sICAM－1有不同程度的相关性，提示RA患者炎性细胞因子可能参与血管内皮细胞损伤。

ANCA是以中性粒细胞主要颗粒成分和单核细胞溶酶体为靶抗原的自身抗体，可能通过直接作用于中性粒细胞，使之出现脱颗粒反应，产生氧自由基、细胞因子和释放蛋白酶，导致血管内皮细胞损伤［10］；ANCA还是刺激单核细胞产生促炎症细胞因子的强力诱导剂，后者通过募集和激活白细胞，促进白细胞与血管内皮细胞的黏附［11］。本研究显示RA患者活动组ANCA阳性率为32.5%，明显高于对照组（P＜0.01），可见RA患者具有较高ANCA阳性率。且ANCA阳性RA患者组的vWF水平显著高于ANCA阴性组（P＜0.01），进一步证实RA患者ANCA阳性与血管内皮损伤有关。

综上所述，RA患者存在血管内皮损伤，患者血清中高水平炎性因子及自身抗体（如ANCA）可能参与血管内皮细胞损伤的发生。因此对于具有高水平炎性因子以及ANCA阳性的RA患者，尤其是活动期患者，应积极采取措施降低炎症反应及自身抗体水平，及早预防RA患者远期心血管疾病的发生。

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