金龙丸质量标准研究

胡 畔 ，李瑛，笔雪艳，张清波

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;2.黑龙江省食品药品检验检测所，黑龙江 哈尔滨 150001)

金龙丸是由制川乌、制草乌、马钱子粉、地龙、甘草、天南星(制)、穿山龙、麻黄细粉组成的医院制剂，具有通络散结、祛风除湿的功效，用于风寒湿痹、关节疼痛。原标准收载于1990年版《黑龙江省医院制剂规范》。为更好地控制产品质量，笔者对金龙丸的质量控制方法进行了试验研究，增加了处方中甘草、麻黄的专属性鉴别，制订了处方中制川乌、制草乌所含双酯型生物碱-乌头碱的限量，增加了处方中马钱子粉所含士的宁的含量测定，为金龙丸的质量控制建立了科学方法，现报道如下。

1 仪器与试药

安捷伦HP1100型高效液相色谱仪。金龙丸(哈尔滨骨伤科医院，批号分别为20100801，20100802，20100803);乙腈为色谱纯，其他试剂、试药均为分析纯;士的宁对照品(批号为110705-200306，中国药品生物制品检定所)。

2 方法与结果

2.1 鉴别

甘草的显微鉴别:取本品，置显微镜下观察，可见纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维(甘草)。见图1。

图1 甘草显微鉴别图

麻黄的薄层色谱鉴别:取本品10 g，剪碎，加浓氨试液2 mL，再加三氯甲烷50 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，取上清液作为对照品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取不含麻黄的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备不含麻黄的阴性对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20∶5 ∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，且阴性对照品溶液无干扰。见图2。

2.2 乌头碱限量检查(薄层色谱法)

图2 麻黄薄层色谱图

取本品1丸，剪碎，加氨试液2 mL润湿，加乙醚20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取乌头碱对照品加无水乙醇制成每 1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取不含制川乌、制草乌的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备成不含制川乌和制草乌的阴性对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯 -乙醇(32∶18∶5)为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品溶液的斑点，或不出现斑点。见图3。

2.3 含量测定

图3 乌头碱薄层色谱图

2.3.1 色谱条件

色谱柱:Agilent C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流动相:乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH至2.8，21∶79);检测波长:260 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:室温。理论板数按士的宁峰计算应不低于5 000。

2.3.2 溶液制备

取士的宁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含50μg的溶液，即得对照品溶液。取本品5 g，剪碎，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入浓氨试液2 mL和三氯甲烷50 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用三氯甲烷补足减失的质量，摇匀，用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取不含马钱子粉的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液

2.3.3 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，得到金龙丸的色谱分离图，理论塔板数为5 000。高效液相色谱图见图4。

2.3.4 方法学考察

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液 10μL，重复进样5次。结果士的宁峰面积积分值的 RSD为 0.8%(n=5)，表明仪器精密度良好。

线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液 2，5，10，15，20 μL，注入液相色谱仪，以峰面积 Y为纵坐标、进样量 X为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=3 420X+0.160，r=0.999(n=5)。结果表明，士的宁进样量在0.094 769～0.947 69μg之间与峰面积呈良好线性关系。

图4 高效液相色谱图

重复性试验:取同一批样品(批号为20100801)，按供试品溶液制备方法平行制备5份溶液，按上述色谱条件测定。结果金龙丸中士的宁的含量均值为0.458 7 mg/g，RSD为2.8%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一批供试品溶液，分别于 0，5，10，15，20 h时依法测定。结果金龙丸中士的宁含量的 RSD为2.8%(n=5)，表明供试品溶液在20 h内稳定。

加样回收试验:称取已知含量的同一批样品约2.5 g，精密称定，共6份，精密加入士的宁对照品溶液(0.234 24 mg/g)5 mL，按供试品溶液制备项下方法操作，按上述色谱条件测定。结果见表1。

表1 士的宁加样回收试验结果(n=6)

2.3.5 样品含量测定

取金龙丸3批样品，按2.3.2项下方法及2.3.1项下色谱条件测定，根据所测得峰面积计算士的宁的含量，结果分别为1.11，1.12，1.21 mg/丸。

3 讨论

采用正己烷-乙酸乙酯-乙醇(32∶18∶5)、甲苯-乙酸乙酯 -二乙胺(14∶1∶1)、正己烷 -乙酸乙酯-甲醇(6.4∶3.6∶1)3种系统，结果后两种展开系统均未取得良好的展开效果，故确定正己烷-乙酸乙酯-乙醇(32∶18∶5)作为本检查的展开剂。

参照2010年版《中国药典(一部)》中马钱子[1]47及风湿马钱片[1]584中色谱条件，采用乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH至2.8，21∶79)及甲醇 -水 -醋酸 -三乙胺(65∶200∶2.4∶0.3)为流动相，结果以前者峰形较好，后者存在峰拖尾现象，因此选择作为本品马钱子中士的宁含量测定的流动相。

取处方中马钱子粉、地龙、甘草、天南星(制)、穿山龙、麻黄各2 g，按供试品的制备方法制备各药材溶液按乌头碱测定法进行测定。结果在药材马钱子中在与乌头碱对照品相应位置处，也出现了相同颜色的斑点。因为本方法为乌头碱的限量检查，所以按本品处方中以制川乌、制草乌中所含乌头碱的总量计，颜色不得深于对照品溶液的斑点即可。

根据本品处方量折算，参照2010年版《中国药典(一部)》马钱子粉[1]48含量测定项下士的宁的含量为0.78%～0.82%，本品中士的宁的含量应为“每丸含士的宁1.15～1.22 mg”，为了保证药物的安全性，确定本品的含量限度上限为“1.22 mg/丸”;同时考虑大生产过程中损耗对样品中士的宁含量测定的影响，将样品的下限下浮20%，确定本品的含量限度下限为“0.92 mg/丸”。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:47，584，48.