反相高效液相色谱法测定长春西汀注射液的含量

吴朝晖 ，李 根 ，周 静

(1.福建医科大学附属第一医院，福建 福州 350004;2.四川省成都市妇幼保健院，四川 成都 610041;3.四川大学华西药学院，四川 成都 610041)

长春西汀属吲哚类生物碱，为脑血管扩张药，能抑制磷酸二酯酶活性，增加血管平滑肌松弛信使CGMP的作用而选择性地增加脑血流量，还能抑制血小板凝集，降低人体血液黏度，增加红细胞变形力，改善血液流动性和微循环，促进脑组织摄取葡萄糖，增加脑耗氧量，改善脑代谢等[1]。其注射液为单方制剂(2 mL∶10 mg)，高效液相色谱含量测定方法一般以甲醇-碳酸铵-乙醚体系为流动相，分离效果不十分理想[2]。本研究中，笔者建立以甲醇-碳酸铵-四氢呋喃体系为流动相的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法，测定长春西汀注射液中长春西汀的含量，分离效果更佳，重现性好，可用于该制剂的质量控制，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵、紫外检测器(美国安捷伦公司);电子天平(瑞士Mettler Toledo公司)。长春西汀注射液(市售品，批号110301，110302，110303);长春西汀对照品(中国药品生物制品检定所，批号为RS31/031，纯度为99.7%);黄体酮(内标，中国药品生物制品检定所，批号为200307);甲醇、四氢呋喃为色谱纯(Merck)，水为Milli-Q去离子水;碳酸铵(天津博迪化工，分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);柱温:25℃;流动相:甲醇-13 mmol/L碳酸铵水溶液-四氢呋喃(100∶16∶5);流速:1.0 mL/min;检测波长:274 nm;进样量:20μL。按上述色谱条件试验，色谱图见图1。长春西汀保留时间7.23 min，内标保留时间11.31 min;长春西汀与内标分离度大于1.5，分离效果良好，理论板数按长春西汀计算为6 580。

2.2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

精密量取本品2 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用流动相稀释制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得供试品溶液。称取40℃真空干燥至恒重的长春西汀对照品约20 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并用流动相稀释至刻度，作为对照品溶液。取黄体酮约80 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并用流动相稀释至刻度，作为内标溶液。称取处方中不含长春西汀的辅料粉末，按对照品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:分别取对照品溶液 1.0，1.5，2.5，3.5，5.0 mL，置50 mL容量瓶中，各精密加入内标液2 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀。取上述溶液20μL，按上述条件进样。以进样量 Y(μg)为横坐标、峰面积 X为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y=2.045 1X+3.720 6，r=0.999 1(n=5)。结果表明，长春西汀质量浓度在0.2～1.0 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取对照品溶液20μL，连续进样5次，记录峰面积。结果的 RSD=0.6%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取样品(批号为110302)6份，按含量测定项下方法测定。以百分含量计算，长春西汀的 RSD为0.9%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取重复性试验项下的其中一份供试品溶液，放置 0，1，2，3，4，5，8 h，分别按拟订定的色谱条件测定。结果峰面积基本不变，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

加样回收试验:精密称取长春西汀对照品适量，按高、中、低3种质量浓度分别制成回收样品9份，按拟订的色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 长春西汀加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取3批长春西汀注射液，分别精密量取2 mL，置25 mL量瓶中，各精密加入内标溶液2 mL，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样20μL，每样进样3次，测定峰面积，按内标法计算含量。结果批号分为110301，110302，110303的样品中长春西汀含量分别为99.67%，100.27%，99.81%。

3 讨论

文献报道的长春西汀含量测定方法有高氯酸滴定法和高效液相色谱法[3-4]。高氯酸滴定法较为烦琐，准确度较差。而之前报道的高效液相色谱法一般选用甲醇-碳酸铵-乙醚体系为流动相，分离效果不是十分理想，主峰保留时间较长，而且与部分杂质无法实现基线分离。本试验在总结文献报道方法的基础上进行优化和创新，采用甲醇-碳酸铵-四氢呋喃流动相体系测定长春西汀注射液中长春西汀的含量，通过调整四氢呋喃比例将主峰保留时间控制在合适的位置，而且实现了主峰与杂质的完全分离。

对长春西汀对照品溶液在200～300 nm波长范围内进行紫外光谱扫描。结果表明，长春西汀在274 nm波长处有最大吸收，故选择274 nm为检测波长。本法简便、准确、快速、专属性强、是长春西汀注射液含量测定的较好方法。

[1]盛华明，向左娟，叶君婷，等.新型胺烷基酯类取代的顺式反式长春西汀衍生物的合成[J].中国天然药物，2011，9(1):51-57.

[2]戚 颖.HPLC法测定长春西汀注射液的含量[J].适宜诊疗技术，2002，20(6):2-3.

[3]于曼娜.HPLC法测定注射用长春西汀苯甲醇的含量[J].海峡药学，2008，20(7):74.

[4]王 祥.高效液相色谱法测定长春西汀(片)的含量及其有关物质的研究[J].药物分析杂志，1995，15(4):23-25.