生脉丹咀嚼片对大鼠急性心肌缺血的影响△

邓奕,曹亮,丁岗,2,3,王振中.2.3,萧伟,2,3*

(1.江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001；2.中药制药过程新技术国家重点实验室,江苏 连云港 222001；3.江苏省企业院士工作站,江苏 连云港 222001)

生脉丹咀嚼片对大鼠急性心肌缺血的影响△

邓奕1,曹亮1,丁岗1,2,3,王振中1.2.3,萧伟1,2,3*

(1.江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001；2.中药制药过程新技术国家重点实验室,江苏 连云港 222001；3.江苏省企业院士工作站,江苏 连云港 222001)

目的观察生脉丹咀嚼片对冠脉结扎及垂体后叶素致大鼠心肌缺血模型的影响。方法给予生脉丹咀嚼片7 d后，采用结扎左冠状动脉复制大鼠急性心肌梗死模型，TTC染色后计算梗死心肌占心室的百分比；采用垂体后叶素注射致大鼠急性心肌缺血模型，观察给予生脉丹咀嚼片7 d后对造模后心电图ST、T波的影响。结果生脉丹咀嚼片各剂量组均可以不同程度地降低心肌梗死范围，差异具有统计学(P<0.05)；生脉丹咀嚼片各剂量组能减少大鼠心电图的T波和ST段在给予垂体后叶素30 s内的上抬幅度，和模型组比较具有统计学差异(P<0.05，P<0.01)。结论生脉丹咀嚼片对大鼠急性心肌缺血具有一定的保护作用。

生脉丹咀嚼片；心肌缺血；心肌梗死；心电图ST

冠心病心绞痛相当于中医胸痹心痛的范畴，早在《内经·素问》中就有对此病的描述、预后分析及治疗的记载。张仲景《金匮要略》列专篇对其论述，并创立了治疗心绞痛的治疗体系。近年来的研究提示中医药在治疗冠心病心绞痛方面具有速效、疗效稳定、毒副作用小等优点，在中成药的研究开发等方面亦进行了大量的工作，为冠心病的防治做出了突出的贡献。然而，当前的国内中成药市场上中成药的功能比较单一，或者以活血化瘀止痛为主，或者以芳香开窍急救为主；或者以益气、养阴培本为主；尚缺乏针对气阴两虚、瘀阻心脉型胸痹的药物。而我们在临床实践中观察到，胸痹心痛(冠心病心绞痛)往往由多种危险因素长期作用于人体后发生，多发于40岁以上的中老年人，其证往往虚实夹杂，本虚标实。单纯实证或虚证非常少见。根据这一临床实际，我们以古典名方“生脉散”和“丹参散”为基础，结合临床病症特点和多年诊治冠心病的经验，配伍组合为生脉丹咀嚼片，既针对患者气阴不足的本虚，又充分考虑病发时瘀血痹阻的标实，经过数年临床实践，证实生脉丹咀嚼片疗效较单用益气养阴或活血化瘀治法为优。

生脉丹咀嚼片由红参、麦冬、五味子和丹参等药物组成，具有益气养阴、活血化瘀、通脉止痛的功能。对单味药的研究文献表明，人参具有抗缺氧和保护心脏的作用，麦冬具有改善急性心肌缺血、心脏血流动力学的作用，五味子能显著提高耐缺氧能力，并具有增强抗氧化酶活性的作用，丹参对心血管系统的影响可表现为扩张冠脉、改善微循环等，并能缩小实验动物心肌梗死面积[1-2]。

我们通过一系列药效模型，验证了生脉丹复方制剂在实验性心肌缺血模型中的药效作用，本文主要采用结扎冠状动脉致心肌缺血及垂体后叶素致心肌缺血的方法，研究生脉丹咀嚼片对大鼠急性心肌缺血的影响。

1 材料

1.1 药品与试剂

生脉丹咀嚼片为薄膜衣片，为异型片，除去包衣后，显淡棕色，味酸甜，微苦，口服给药，每片含浸膏0.338 g，1 g浸膏含3.7 g饮片，拟临床人日用量为11.25 g 饮片·(60 kg)-1(江苏康缘药业股份有限公司，批号：20050310)；垂体后叶素注射液(南京新百药业有限公司，批号：030902)；硝酸异山梨酯片(南京白敬宇制药厂，批号：20040301)；丹参片(上海雷允上药业有限公司，批号：0404031)；水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司，批号：20040420)；0.9%氯化钠注射液(南京小营制药厂，批号：2005052505)；其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器

RM-6000八道生理记录仪及附件(日本NIHON KOHDEN公司)；8s型PowerLab生命信息处理系统和Chart v5.2软件(澳大利亚ADInstruments公司)；DH140人工呼吸器(浙江医科大学医学仪器实验厂)；LDZ5-2型离心机(北京医用离心机厂)；KHW-501型恒温水槽(江苏省昆山市淀山湖检测仪器厂)；JA1003上皿电子天平(上海精科电子天平厂)；MELLTER-AE240电子天平(奥赛斯国际贸易上海有限公司)；DGF30/23-ⅢA型电热鼓风干燥箱(南京实验仪器厂)。

1.3 动物

清洁级SD大鼠，雄性，体重180～220 g，由南京军区南京总医院提供，生产许可证：SCXK(苏)2003-0004，使用许可证号：SYXK(苏)2003-0029。

2 方法

2.1 对大鼠冠脉结扎的影响

SD大鼠60只，随机分为6组，每组10只。即正常对照组，模型组，阳性药组和生脉丹咀嚼片小、中、大剂量组。阳性药组灌胃给予丹参片1.0 g饮片·kg-1，生脉丹咀嚼片小、中、大剂量组分别灌胃给予生脉丹咀嚼片0.5 g饮片·kg-1、1.0 g饮片·kg-1、2.0 g饮片·kg-1，给药容积为10 mL·kg-1，正常对照组和模型组灌胃给予等容积蒸馏水，连续给药7 d。

给药7 d后1 h，水合氯醛(350 mg·kg-1)腹腔注射麻醉，仰卧固定于手术台，气管插管连接到呼吸机，进行人工呼吸。胸部去毛、消毒，沿左锁骨中线纵行切开皮肤约2 cm，自左侧4～5肋间钝性分离肌肉，打开胸腔，剪开心包，轻压右侧胸廓，挤出心脏。在动脉圆锥与左心耳之间用5/0缝合线结扎左冠状动脉(LAD)后，迅速将心脏送回胸腔，立即缝合胸壁[1]，停止人工呼吸。结扎LAD 24 h后，脱颈椎处死大鼠，同时开胸取心脏，再沿冠状沟去除心房组织，称心室湿重。平行房室沟将心室横切5片，放置于37 ℃的0.5%TTC磷酸盐缓冲液中染色。分离心肌中梗死区(不染色者)并称量其湿重。计算梗死心肌占心室的百分比[3-5]。

2.2 对垂体后叶素致心肌损伤的影响

挑选心电图合格的SD大鼠60只，随机分为6组，每组10只。即正常对照组，模型组，阳性药组和生脉丹咀嚼片小、中、大剂量组。阳性药组灌胃给予硝酸异山梨酯片5 mg·kg-1，生脉丹咀嚼片小、中、大剂量组分别灌胃给予生脉丹咀嚼片0.5 g饮片·kg-1(临床等效剂量1/2倍)、1.0 g饮片·kg-1(临床等效剂量)、2.0 g饮片·kg-1(临床等效剂量2倍)，给药容积为10 mL·kg-1，正常对照组和模型组灌胃给予等容积蒸馏水，连续给药7 d。

第7日给药1 h后，水合氯醛麻醉(350 mg·kg-1，腹腔注射)，测定一段时间正常心电图舌静脉给予垂体后叶素(0.5 U·kg-1)，5～10 s内给完，测定给药后5 s、10 s、20 s、30 s、1 min、5 min、10 min时的心电图，观察药物对给予垂体后叶素后心电图ST、T波的影响[5-6]。

2.3 统计方法

3 结果

3.1 生脉丹咀嚼片对大鼠冠脉结扎的影响

正常对照组大鼠心肌无梗死，模型组大鼠出现明显的心肌梗死，生脉丹咀嚼片各剂量组均可以不同程度地降低心肌梗死范围，具有统计学差异(P<0.05)。表明生脉丹咀嚼片对大鼠心肌缺血具有一定的保护作用。结果见表1。

表1 生脉丹咀嚼片对大鼠冠脉结扎心肌梗死范围的影响

注：与模型组比较，*P<0.05

3.2 生脉丹咀嚼片对垂体后叶素致心肌损伤的影响

模型组大鼠心电图的T波和ST段在给予垂体后叶素30 s内显著上抬，出现第一期心电图的变化，30 s后出现T波低平、双向、倒置P-R及Q-T间期延长等第二期心电图变化；给药各组动物心电图的T波和ST段在给予垂体后叶素30 s内也呈上升趋势，但和模型组比较，上抬幅度显著降低，具有统计学差异(P<0.05，P<0.01)。结果见表2、3。

表2 生脉丹咀嚼片对垂体后叶素致心肌损伤大鼠心电图ST段的影响 /mv

注：与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；下同。

表3 生脉丹咀嚼片对垂体后叶素致心肌损伤大鼠心电图T波的影响 /mv

4 讨论

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是心血管疾病的重要死亡病因，也是临床猝死的常见症状之一。心肌梗死大多是在冠状动脉长期和急剧病变的基础上，冠状动脉的血流急剧减少或中断，使相应的心肌出现严重而持久的急性缺血，最终导致心肌的缺血性坏死[7]。本文采用大鼠冠脉结扎建立急性心肌梗死模型，经过TTC染色后计算梗死心肌占心室的百分比，从数据中可以得出模型组大鼠出现明显的心肌梗死，生脉丹咀嚼片高、中、低剂量组均能较好地保护心肌组织，减少心肌缺血模型大鼠心肌梗死范围。

冠脉痉挛是导致心肌急性缺血的主要原因之一，垂体后叶素(Pit)包含加压素和催产素，可作用于加压素V1受体，促使全身血管(包括冠脉) 收缩，冠脉流量减少，心电图改变，与临床上变异性心绞痛的发病过程十分相似，是诱导大鼠急性心肌缺血的经典模型[8]。Pit通过诱发冠状动脉痉挛而致急性心肌缺血，出现异常心电图改变，主要反映在ST段、T波异常以及出现心律失常。正常大鼠注射Pit后心电图变化(Ⅱ导联) 分为两期，第1期：注射Pit后即刻至30 s，T 波升高、ST段抬高0.l mv以上；第2期：注射后30 s至数分钟，T波低平、双向、倒置，心率变慢，P-R及Q-T间期延长[9]。能防止或减轻第1期或第2期心电图变化的药物，可以认为对该模型有效。

本试验中给予Pit后，模型组大鼠心电图的T波和ST段在给予垂体后叶素30 s内显著上抬，出现第1期心电图的变化，30 s后出现第2期心电图变化；给药各组动物心电图的T波和ST段在给予垂体后叶素30 s内也呈上升趋势，但和模型组比较，上抬幅度显著降低，说明生脉丹咀嚼片对垂体后叶素导致的大鼠心肌缺血有一定的改善作用。

本实验从缺血面积、心电图方面证实了生脉丹咀嚼片对大鼠心肌缺血模型具有确切的保护作用，其效果明显，值得进一步开发应用。

[1] 施息军.简述生脉饮在西医临床中的运用[J].镇江医学院学报，1998，8(4)：588-589.

[2] 杨英.丹参提取物对麻醉大鼠血流动力学的影响[J].中华医护杂志，2007，4(4)：292-293.

[3] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].第二版.北京：人民卫生出版社，2002：1201-1203.

[4] 刘凤云，王守宝，海平，等.藏药唐古特青兰对冠脉结扎大鼠急性心肌缺血的保护作用[J].青海医学院学报,2011，32(1)：35-39.

[5] 赵强.心肌肽素对大鼠急性心肌缺血的保护作用[J].内蒙古民族大学学报(自然科学版)，2010，25(2)：197-199.

[6] 李艳，李明，高伟，等.沙丁胺醇对急性心肌缺血模型大鼠心电图及血清心肌酶谱的影响[J].陕西医学杂志,2011，40(12)：1578-1580.

[7] 陈修，陈维洲，曾贵云，等.心血管药理学[M].北京：人民卫生出版社，1997：397-406.

[8] Arndldo Pinelli，Silvio Trivulzio，Livio Tomasoni，et al.Cardiac necrosis markers associated with low nitric oxide levels in the plasma of rabbits after treatment with vasopressin：protective effects of nitroglycerin administration[J].Pharmacol Res，2002，45(6)：427.

[9] 吴伟康，侯 灿，罗汉川，等.垂体后叶素心肌缺血模型再探[J].中国病理生理杂志，1993，9(2)：124.

EffectofShengmaidanChewableTabletsonBloodLipidandHemorheologyinHyperlipedemiaModelRats

DENG Yi1，CAO Liang1，DING Gang1,2,3，WANG Zhen-zhong1,2,3，XIAO Wei1,2,3

(1.JiangsuKanionPharmarceutical，Ltd.，Lianyungang222001，China；2.StateKeyLaboratoryofPharmaceuticalProcessNew-techforChineseMedicine，Lianyungang222001，China；3.EnterprisesAcademicianWorkstationsinJiangsuProvince，Lianyungang222001，China)

Objective：To observe the cardioprotective effect of Shengmaidan Chewable tablets on rats with acute myocardial ischemia induced.MethodsThe acute myocardial ischemia model was induced by ligation of left anterior descending coronary artery at the distal one third segment in opened chest rats.The infarct area showed by TTC stain after ligation.The Ⅱ-lead electrocardiogram examined the myocardial injury model induced by pituitrin.ResultsCompared with model group，all groups using different dosage Shengmaidan Chewable tablets could reduce the area of myocardial infarction(P<0.05).Furthermore，three dosage of Shengmaidan Chewable tablets lowered the elevation of S-T segment and the amplitude of T wave in the electrocardiograms of rats.ConclusionShengmaidan Chewable tablets has obvious protective effect against acute myocardial ischemia in rats.

Shengmaidan Chewable tablets；Myocardial ischemia；Pituitrin；Coronary artery ligation

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中药治疗心脑血管疾病有效成分组(群)的创新药物孵化基地(2011ZX09401-014)

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萧伟，E-mail：qly099@hotmail.com

2012-05-15)