鸡大肠杆菌的分离鉴定

李本科 （山东省滨州市畜牧兽医局 256600）



鸡大肠杆菌的分离鉴定

李本科 （山东省滨州市畜牧兽医局 256600）

本研究用菌采自滨州市某鸡场疑似大肠杆菌病死鸡的心血，肝脏，肾脏。进行病原菌的分离，鉴定，生化试验动物试验和药敏试验，结果显示，引起该鸡场发病的病原菌为大肠杆菌，该菌株有较强的致病性，对阿米卡星、链霉素、庆大霉素敏感，对环丙沙星，诺氟沙星，卡那霉素中度敏感，而红霉素、青霉素、氨苄西林，头孢唑啉，头孢噻吩和复方新诺明对分离菌有耐药性。表明该鸡场出现了耐药的致病性大肠杆菌，在以后的肉鸡生产中应慎用抗生素，在使用药物治疗大肠杆菌病时，应根据药敏试验结果，选择敏感药物，且应注意交替用药，按疗程投药。

大肠杆菌 分离鉴定 致病性 生化试验 药敏实验

鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌的某些血清型引起的鸡的传染病。作为各种动物体内的常驻菌，大肠杆菌在自然环境中几乎无处不在，由其引起的大肠杆菌病流行分布极为广泛和普遍，给养鸡业带来巨大的经济损失。本病一年四季均有发生，没有明确的季节性，尤其冬季和春季多发，该病症状一般均呈典型经过。幼雏多发脐带炎，突然死亡。大部分鸡只体温升高、精神委顿、羽毛蓬乱、呼吸困难和食欲废绝。黄、白、绿稀便交替出现。急性型往往发病后一周内即死亡，亚急性或慢性型多发于成年蛋鸡，患病的鸡精神不振，食欲减少，饮水量增加，逐渐消瘦和下痢，但死亡率不高。除此之外，常见气囊炎的发生，表现程度不一的呼吸道症状。有的鸡关节肿大呈跛行和胸卧姿势。还有出现眼球炎及母鸡卵巢炎、输卵管炎等。剖检可见气囊壁浑浊增厚，肝脏肿大变绿，表面有纤维素样物质覆盖，肠黏膜出血及产蛋母鸡卵巢变性成瘤块状[1]。为了控制该大肠杆菌对鸡群的危害，笔者对送检的疑似大肠杆菌病料进行了分离鉴定，并通过药敏实验确定了敏感性药物，为有效防治大肠杆菌病提供了依据。

1 材料和方法

1.1 病料来源 滨州市某养鸡场疑似感染大肠杆菌所致死亡鸡4只。

1.2 细菌分离 无菌采取其肝脏，心血和肺脏的组织，分别划线接种到马丁平板，麦康凯平板，37 ℃培养20h。

1.3 细菌形态学观察 取在麦康凯琼脂平板上培养20h的新鲜菌落，涂片进行革兰氏染色镜检。

1.4 生化试验 糖发酵及生化反应按常规进行[2]。

1.5 致病力测定 （1）菌液制备：将麦康凯平板上的分离菌落用马丁肉汤洗下，4℃保存备用。（2）动物试验：未免疫过的健康鸡随机分为A、B两组，每组5只。A组为试验组，B组为对照组。A组颈部皮下接种马丁肉汤菌液，每只0.5ml；B组颈部皮下接种相同剂量的灭菌马丁肉汤，隔离饲养。

1.6 药敏试验 按K-B纸片扩散法将被检细菌涂布接种于普通琼脂平板上，间隔一定距离贴上各种药敏试纸，于37℃培养24h，结果判断依据《纸片法抗菌药物敏感试验操作标准(第四版)》进行。

2 结果

2.1 病鸡及病死鸡的病理剖检变化 病鸡肝脏肿大、质脆，有点状坏死灶，表面覆盖有黄白色的纤维素性渗出物；脾脏肿大，肺充血、淤血，肾脏肿大，有尿酸盐沉积；十二指肠有出血性肠炎变化。

2.2 细菌培养 在营养琼脂平板上37 ℃培养18 h后，形成中等大小，圆形微凸起，表面光滑湿润，浅灰白色半透明菌落。在麦康凯琼脂平板上，形成中等大小，表面光滑湿润的粉红色菌落。

2.3 细菌形态学观察 挑取病死鸡肝、肾在马丁平板和麦康凯平板上的菌落分别涂片革兰氏染色镜检，均可见两端钝圆，多数散在排列的革兰氏阴性短杆菌。

2.4 生化试验结果 生化试验结果显示，此次分离的大肠杆菌对甘露醇、麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖、蕈糖、果糖产酸产气，MR、棉子糖、山梨醇、鸟氨酸结果阳性，VP、卫矛醇、肌醇、硝酸盐、酒石酸盐、水杨素、精氨酸水解酶、侧金盏酰、阿拉伯醇、血清菊糖、鸟氨酸精氨酸脱羧酶、丙氨酸盐、ONPG、乙酰胺结果阴性，符合大肠杆菌的生化特征。

2.5 动物试验 A组3只36h内死亡，2只1周后耐过，剖检可见肝脏肿大，有出血点和坏死点，肠严重膨气且内容物稀薄，心包淤血，肺出血，脾脏肿大。肾脏肿大，有尿酸盐沉积；十二指肠有出血性肠炎变化。采取A组死鸡的心血、肝和肾脏接种在普通琼脂平板和麦康凯平板，37℃培养20h，长出与分离的病料相似的菌落。革兰氏染色及生化鉴定表明此菌与接种细菌为同种细菌。表明该菌对鸡具有较强的致病力。B组饲养7d后没有明显的临床变化，剖检未见病变。

2.6 药敏试验 结果见附表。

由附表可见，此次分离的大肠杆菌对阿米卡星、链霉素、庆大霉素敏感，对环丙沙星，诺氟沙星，卡那霉素中度敏感，而红霉素、青霉素、氨苄西林，头孢唑啉，头孢噻吩和复方新诺明对分离菌产生耐药性。

附表 药敏试验结果 (mm)

抗菌药物名称代号抑菌圈直径结果 红霉素E8R 青霉素P9R 头孢唑啉CZ10R 环丙沙星CIP16M 诺氟沙星NOR14M 阿米卡星AN20S 链霉素S18S 庆大霉素GM21S 氨苄西林AM8R 头孢噻吩CF12R 卡那霉素K15M 复方新诺明SXT10R

注：R代表耐药，M代表中度敏感，S代表敏感

3 讨论

（1）近十几年，为了控制大肠杆菌及某些细菌感染，在饲料添加剂及治疗中盲目使用一些抗菌药物，导致耐药菌株越来越多并日趋严重。而且大肠杆菌可通过菌毛将其抗药性质粒传递给其他大肠杆菌，所以大肠杆菌的抗药性形成较快，环境中大肠杆菌耐药性菌株越来越多[3]。药敏试验结果可以看出，曾对大肠杆菌比较敏感的环丙沙星、诺氟沙星、痢特灵、头孢唑啉钠等随着不断的应用均产生了不同程度的抗药性。所以，在使用药物治疗大肠杆菌病时，应根据药敏试验结果，选择敏感药物，且应注意交替用药，按疗程投药，才能收到较好的治疗效果。（2）大肠杆菌是条件性致病菌，大肠杆菌病的发生和流行与气候环境条件及饲养管理水平等许多应激因素密切相关，特别是鸡舍的卫生状况很差，粪便污染，潮湿拥挤，空气不流通，过冷过热都能明显地促使本病发生。有些鸡场和鸡群由于这些原因而导致的大肠杆菌病发病率高达50%以上。因此防制该病的关键在于加强饲养管理，做好各个环节的卫生消毒，消除各种发病诱因。日常要提供全价优质饲料，并足量补充维生素和电解质；夏季还要注意防暑，应添加饲料添加剂，如碳酸氢钠、杆菌肽锌、维生素C等；通过消毒创造一个没有致病微生物生存和繁殖的良好的养殖环境。杀灭和抑制已经产生的致病微生物，减少其对动物的感染机会。（3）做好免疫工作。由于各地大肠杆菌的血清型存在差异，有效而通用的菌苗尚未出现，因此筛选地区性免疫原性优良的大肠杆菌菌株制作菌苗的疫苗进行免疫效果较好。

[1] 陈怀套, 许东仁. 兽医病理学[M]. 北京: 中国农业出版社, 2005.

[2] 塞弗. 禽病学(第11版)[M]. 北京: 中国农业出版社, 2005.

[3] 中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集，某大型鸡场的病原性大肠杆菌常见血清型及其稳定性[D]. 2002,10.

（2011–09–29）

S852.61+2

A

1007-1733(2012)01-0017-02