腌制姜中涕灭威及其代谢产物残留量的检测方法研究

2012-10-30王勇李琴济宁出入境检验检疫局山东济宁272000

山东畜牧兽医 2012年1期

王勇李琴（济宁出入境检验检疫局山东济宁 272000）

王勇李琴（济宁出入境检验检疫局山东济宁 272000）

本研究建立了腌制姜样品中涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜农药残留的检测方法。样品用乙腈提取，以弗罗里硅土固相柱净化，用丙酮+乙腈(4+1)洗脱液洗脱，以多反应监测(MRM)对涕灭威及其代谢产物残留量进行检测。用外标法定量分析，标准曲线的相关系数为0.9990~0.9992，平均回收率为82.4%~86.9%。结果表明，本方法杂质干扰少，操作简便，基线降低，回收率与灵敏度高。

弗罗里硅土固相柱腌制姜液相色谱-质谱/质谱仪

涕灭威及其代谢产物系氨基甲酸酯类农药，由于高效、经济而被广泛应用于蔬菜生产过程，对生态环境造成严重的污染。食物中农药残留量过高而引发的中毒事件频繁发生。越来越多的科研人员关注农副产品中氨基甲酸酯类农药残留检测方法的研究，建立高效、快速、灵敏的多品种农残检测方法成为迫切需要解决的课题[1]。

本文在现有标准基础上，通过对样品的前处理条件的改变和色谱条件优化，采用反应监测(MRM)的高效液相色谱仪对蔬菜中涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜农药残留进行检测，目的在为蔬菜、农产品中氨基甲酸酯类农药残留的检测探索出一种高效、准确、灵敏且可操作性较强的分析方法。

1 材料与方法

1.1 试剂

甲醇、甲酸和丙酮(HPLC级)，乙腈(LC级)；无水硫酸钠：650℃灼烧4h，贮存于燥器中，冷却后备用；弗罗里硅土：650℃烘烤4h(使用前于140℃烘2h，5%水脱活)；0.1%甲酸溶液；0.22μm有机相微孔滤膜。涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜标准溶液(均为100mg/L，农业部环境保护科研监测所)。

1.2 标准溶液配制

将上述标准溶液分别用甲醇稀释成10mg/L标准储备液，使用时再用甲醇稀释成1mg/L混标使用液。

1.3 仪器和设备液相色谱-质谱/质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)源；均质器；天平，感量为0.01g；振荡提取器；旋转蒸发仪；旋涡混匀器；固相萃取装置；氮吹仪。

1.4 色谱、质谱条件

1.4.1 色谱条件 Hypersil GOLD-1.9μm，50mm×2.1mm (i.d)色谱柱；柱温30℃；进样体积10μl。梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱条件

1.4.2 质谱条件离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多重反应监测；电喷雾电压4500V；鞘气压力30Arb；清扫气压力0；辅助气压力10Arb；离子源温度350℃；涕灭威及其代谢物的采集参数见表2。

表2 涕灭威及其代谢物的采集参数

1.5 样品处理

1.5.1 固相萃取小柱制备称取0.5g弗罗里硅土填入固相萃取空柱上，用5ml丙酮+乙腈(4+1)淋洗，弃淋洗液。小柱待用。

1.5.2 提取称取5g试样(精确至0.01g)于50ml离心管中，加入20ml乙腈，均质2min，振荡提取20min，上清液过无水硫酸钠收集到分液漏斗中，残渣再加入20ml乙腈，重复上述操作1次，合并2次滤液，加入20ml用乙腈饱和正己烷，振荡10min，静止分层，弃正己烷层，乙腈层于40℃下旋转蒸发浓缩至干，用2ml丙酮+乙腈(4+1)溶解，待净化。

1.5.3 净化将提取液全部转移至活化好的弗罗里硅土柱中，用5ml丙酮+乙腈(4+1)洗脱，收集全部流出液，氮气吹干后，用1ml乙腈-0.1%甲酸水溶液(10+90)定容，过0.22mm微孔滤膜，上液相色谱-质谱/质谱仪，待测定。

2 结果与讨论

2.1 样品前处理的优化

采用自制弗罗里硅土(florish)柱对提取物进行净化。用不同比例的丙酮+乙腈的淋洗液进行测试，本实验室比较了丙酮、乙腈、甲醇、乙酸乙酯作洗脱剂，单用乙酸乙酯、甲醇、丙酮作洗脱剂，色素会被洗脱液洗脱，处理液呈绿色。而用乙腈作洗脱液，色素残留在柱子上，但有一部分极性农残组分留在柱上，不能完全洗脱。用丙酮+乙腈按4+1，1+1，9+1比例进行洗脱测试，得出丙酮+乙腈为4+1时，既能完全洗脱所测试的组分，也能让色素绝大部分留在柱上，达到去除干扰的目的。目前所采用的SN/T2441-2010标准采用NH2SPE小柱[2]，洗脱液为甲醇—二氯甲烷(1+99)，其回收率在72%~76%之间，而本试验通过更换固相萃取柱和洗脱液使样品的回收率有所提高。

2.2 仪器条件的优化

2.2.1 质谱条件的优化首先对涕灭威及其代谢物进行质谱条件的优化，选择ESI+作为电离模式，在多反应监测(MRM)模式下对标准物质先进行一级质谱分析(Q1扫描)，得到分子离子峰，选取相应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析(Q2扫描)，得到碎片离子信息。然后，再对得到的质谱参数进行优化，得到相应的碰撞能量。

2.2.2 色谱条件的优化取涕灭威及其代谢物的混合标准使用液，进样10μl，使用水-乙腈为流动相，调节各组分的比例和流速对色谱条件进行优化。结果表明，在流动相流速为300μl/min，乙腈-水梯度为5~95时涕灭威及其代谢物有较好的峰形和响应值。