丙氨酸氨基转氨酶活性在不同保存条件下的稳定性分析

李岩 王宏 苑雪峰

丙氨酸氨基转氨酶活性在不同保存条件下的稳定性分析

李岩 王宏 苑雪峰

目的探讨血标本存放温度、时间及血细胞与血浆分离保存对丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测结果的影响。方法采集抗凝血标本立即离心检测ALT初始值，然后分离血浆分别在25℃、4℃、-20℃、-80℃条件下保存，分别检测不同时间ALT活性。结果在所有保存条件下血标本中ALT活性随保存时间延长而下降，4℃保存时可以稳定一周，分离血浆冰冻保存-80℃比-20℃更加稳定，靠近血细胞层血浆ALT下降率低于血浆表层。结论ALT活性的稳定性与血标本存放的温度有着密切的关系，认识血标本ALT活性在贮存过程中的变化规律，有助于确保血液检测的准确性。

丙氨酸氨基转移酶(ALT);保存条件;稳定性

丙氨酸氨基转移酶是肝脏功能诊断的重要指标之一，已被卫生部指定为采供血机构对供血者初筛和血液复检的常规检验项目［1～2］。一般情况下，ALT检测的最佳时间应该是采集血样后立即检测。但在各血液中心(血站)的实际工作中，ALT的复检通常要在采集的血样保存一段时间后才能进行，在这期间由于保存方式、时间、温度等因素的影响，ALT的测定值将会有不同程度的变化。本文旨在探讨不同保存条件下ALT最适检测时限，以减少检测结果误差，确保血液安全。

1 材料与方法

1.1 标本来源 随机选择经过健康询问，自述无继往病史，ALT快速检验合格的健康献血者40人，各采集EDTA抗凝血8 ml，无明显溶血脂血。

1.2 仪器与试剂 ECOM-F6124型半自动生化分析仪(倍肯公司);-80℃ 冰箱;-20℃冰箱;普通离心机等;ALT试剂盒(液体)(上海科华东菱诊断用品有限公司，批号20110921);

1.3 方法 采用半自动生化分析仪的单波长速率法分别检测0 h(初始值)、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、10 dALT 值，冰冻血浆检测时间为 1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、10 d、1 m。

实验选择其中10份标本，在采集后立刻离心并检测ALT初始值，然后分离上层血浆分别放置在25℃、4℃、-20℃、-80℃条件下保存。

2 结果

2.1 实验数据见表1。

2.2 图1所示各种温度下ALT活性随时间延长而呈下降趋势。

2.3 采用单因素方差分析各温度组内保存时间对ALT活性的影响的显著性，其方差分析结果见表2。

表1 不同温度、不同时间下分离保存的血浆ALT检测结果(n=10)(U/L)

表2 温度组内保存时间对ALT活性的影响(n=10)

由上表可见，在保存8 d时间内，25℃和-20℃时保存时间对ALT活性的影响显著，而4℃和-80℃时在测定的时间内ALT无显著性变化，建议短期保存血浆采用4℃，在一周内ALT活性是比较稳定的。如果要长期冰冻保存血样则选择-80℃要比-20℃更加稳定。

2.4 采用t检验分析在保存时间相同的情况下不同保存温度时 ALT活性的差异。统计学分析结果见表3，4。

表3 25℃和4℃保存时间相同时ALT活性的差异的分析(n=10)

由上表可见，在24 h内，二者ALT活性无明显差异，从第2天开始出现显著性差异，25℃保存2 d后，血浆ALT检测的准确性将受到影响。

表4 -20℃和-80℃保存时间相同时ALT活性的差异的分析(n=10)

由上表可见，从第5天开始，二者ALT活性开始出现显著性差异，-20℃保存5 d后，血浆ALT检测的准确性将受到影响。

3 讨论

在整个保存过程中，ALT活性的整体趋势是下降的，这是符合酶的活性衰减规律的［3］。因为酶是催化生物体内化学反应的一类特殊蛋白质，离开人体后的酶将逐渐失去活性。由上述实验证明［4］，不同温度下不同时间ALT活性平均下降率是不同的，可以看出4℃保存血标本是最稳定的。因为4℃时，细菌是最不容易繁殖的，虽然ALT也应该下降，但由于水分蒸发等因素存在，ALT的测定值在一周内还是比较稳定的。25℃也是较接近室温，这种情况最适合细菌繁殖并产生大量的代谢物，导致红细胞破裂溶血，由于红细胞内ALT活性是血浆的7倍，所以溶血会导致血浆ALT检测结果升高。另外可以看出，在长期保存血浆时，ALT活性在-80℃比-20℃条件下稳定，所以如果冰冻保存选择-80℃。

同国内有关文献报道相比，本文增添了分离血浆保存和冰冻保存及血液标本自然沉降情况下来更加全面地分析ALT活性的变化。为了使实验与日常工作相一致，从而更具有知道意义，所有的血样管都使用普通塑料软管，血样为EDTA抗凝的全血标本。除-80℃外，其他温度均用水银温度计进行温度监测。而且尽量模拟血站日常工作的模式来进行检测ALT［5］，应用半自动生化分析仪也使实验数据的重复性和准确性都得到提高。

尽管如此，在实验过程中难免出现误差和错误。首先，应用半自动生化分析仪有利也有弊，由于不能大量批量地检测，使得实验数据较少，整个实验过程耗时过长。第二，由于每份标本的血浆数量有限，所以每次测量时不能多次测量取平均值，这将给数据带来一定误差。第三，ALT活性受到多种人为和非人为因素影响，如试剂的可靠和稳定性、仪器的校准、参数的设置、生理病理等因素，本实验尽量对上述种种因素加以控制，但难免出现纰漏。

总之，随着血浆ALT成为输血前检验的一项重要指标，ALT的检测技术的研究越来越多。本文主要研究在不同保存条件下血浆丙氨酸氨基转移酶测定值的变化，通过试验来初步摸索保存血样的最佳方式，从而提高对ALT检测的准确性与稳定性。

4 结论

ALT活性的稳定性与血标本存放的温度与血浆是否分离保存有着密切的关系。对于ALT检测而言，4℃存放标本是最理想的保存方式，在25℃存放标本最好不要超过24 h［6］。如果分离血浆保存，则采用-80℃冷冻最稳定［7］。认识血标本ALT值在贮存过程中的变化规律，有助于确保血液检测的准确性。相信经本研究较系统的检测、对比得出的结论，为血站检验科在日常工作中标本放置与保存提供有价值的参考，避免由于ALT检测的不规范而造成的血液检测不合格，尽量减少由此引起的血液报废，同时对进一步研究影响ALT改变的根本原因提供依据，对血液中心(血站)的ALT检测提供更多的研究及参考价值。

［1］ K.M.Williams，A.E.Williams，L.M.Kline，and R.Y.Dono.Stability of serum alanine aminotrnsferase activity.Transfusion，1987，27(5):431．

［2］ Mosley JW，Goodwin RF.Slability of serum glutamic pyruvic transaminase activity on storge.Am J Clin Pathol，1965，44:591．

［3］ 周爱儒.生物化学，2004:59．

［4］ 刘朋来，等.ALT活性在不同贮存温度下的稳定性分析.中国输血杂志，2004，17(4):282．

［5］ 周新，涂植光.临床生物化学和生物化学检验.第3版．人民卫生出版社，2003:165-167．

［6］ 马清光，陈佩宏，等.红细胞代谢对ALT底物NADH内源性消耗的影响.现代检验医学杂志，2004，19(3)．

［7］ 林婴，等.ALT值的影响和对献血者检测ALT的意义.中国输血杂志，1999，12(1)．

Stability of serum alanine aminotransferase activity in vary storge conditions

LI Yan，WANG Hong，YUAN Xue-feng.Changchun blood center，Changchun 130031，China

ObjectiveIn this study the authors discuss the effects of temperature，time and separated serum on serum alanine aminotransferase activity(ALT)levels.MethodsAnticoagulant samples were collected by venipuncture to centrifuging.Serum was tested immediately for baseline ALT levels and aliquots were stored at 25℃，4℃，-20℃，-80℃ for detecting ALT levels respectively.Results［2］A gradual loss of activity over time under all store conditions was observed.ALT levels were stability for one week when storing at 4℃.The degradation of ALT activity was greater at-20℃than at-80℃.The percentage of ALT levels decline in sample drawn distal to the red cells exceeded tuose drawn distal to the red cells.ConclusionThe relationship of Stability of serum alanine aminotransferase activity and temperature.It is useful for insuring the detect veracity to recognize the rule of the change of serum alanine aminotransferase activity．

Aminotransferase activity(ALT);Storge condition;Stability

130031长春市中心血站

1.4 统计学方法 ALT测定值与初始值比较，计算出变化百分率，求其平均值。将整个实验的450个数据用均数±标准差(±s)表示，按实验组别列出表1。组间均值的差异采用t检验，组内均值差异采用单因素方差分析。