膨大处理对红地球葡萄酚类物质及抗氧化活性的影响

刘金串，孟江飞，郭志君，耿万刚，乔 玲，张 昂，张振文,2，房玉林,2,*

(1.西北农林科技大学葡萄酒学院，陕西 杨凌 712100；2.陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心，陕西 杨凌 712100)

膨大处理对红地球葡萄酚类物质及抗氧化活性的影响

刘金串1，孟江飞1，郭志君1，耿万刚1，乔 玲1，张 昂1，张振文1,2，房玉林1,2,*

(1.西北农林科技大学葡萄酒学院，陕西 杨凌 712100；2.陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心，陕西 杨凌 712100)

以红地球葡萄为研究对象，对葡萄进行膨大处理后，定期采样，测定处理组和对照组的总酚、总黄酮、总黄烷醇以及铜离子还原力、铁氰化钾还原力、DPPH自由基清除率、金属螯合力、羟自由基(·OH)清除率，用DPS软件对处理组和对照组之间的差异及酚类物质与抗氧化活性之间的相关性进行分析。结果表明：膨大处理可增加红地球葡萄酚类物质含量并增强其抗氧化活性；膨大处理对红地球葡萄总酚、总黄酮、总黄烷醇、铜离子还原力、铁氰化钾还原力的影响较大，对DPPH自由基清除率、金属螯合力、·OH清除率的影响较小。铜离子还原力、铁氰化钾还原力与酚类物质(总酚、总黄酮、总黄烷醇)含量均呈极显著正相关；金属螯合力、DPPH自由基清除率与酚类物质含量均无显著相关性，·OH清除率与酚类物质含量呈极显著负相关。铜离子还原力与铁氰化钾还原力呈极显著正相关；与DPPH自由基清除率呈显著正相关。铜离子还原力与·OH清除率、铁氰化钾还原力与·OH清除率呈极显著负相关。

鲜食葡萄；膨大处理；酚类物质；抗氧化活性

红地球葡萄(Vitis vinifera cv. Red globe)，又称“美国红提”、“全球红”、“晚红”，属欧亚葡萄品种。由于该品种具有丰产、品质优良、耐储运等特点，在我国的栽培面积快速发展，已成为我国鲜食葡萄第二大主栽品种。近年来，随着我国鲜食葡萄产业的迅速发展，膨大剂在葡萄生产中的使用日益受到人们的关注。研究表明，膨大剂处理可以有效促进红地球果粒膨大，提高果实产量，但同时也会对葡萄的其他品质产生影响。前人关于膨大剂对葡萄影响的研究一般包括果实大小及果形、色泽、糖分、有机酸、成熟期等[1-3]，有关膨大剂对红地球葡萄酚类成分及抗氧化活性的研究至今还未发现。

酚类物质是指含有酚官能基团的物质，葡萄中含有丰富的酚类物质，它们是葡萄中重要的次生代谢产物，与葡萄的抗病性、采后生理、贮存、保鲜密切相关[4]。酚类物质因品种、栽培条件、气候条件等不同在葡萄中存在较大的差异[5]。大量研究表明，葡萄酚类物质具有显著的抗氧化、清除自由基的作用，因此具有预防多种疾病、延缓衰老、护肤美容等保健功能[6-9]。抗氧化能力是衡量果蔬营养及保健价值的重要指标之一[10]，葡萄的抗氧化活性与其所含的酚类物质，特别是类黄酮物质密切相关[11-12]。因此，研究膨大剂对葡萄酚类及抗氧化活性的影响具有重要的意义。

本实验选用红地球葡萄为研究对象，对其进行膨大处理，在果实成熟过程中定期取样，研究膨大剂处理对葡萄中酚类物质和抗氧化活性的影响，以期为生产高质量的鲜食葡萄提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

实验地点为陕西省泾阳县白王镇，实验材料为10年生红地球葡萄，株行距0.8m×2.5m。选取长势良好、一致的葡萄植株各10株，分为处理组和对照组。其中处理组为生产者实际生产中的常规膨大处理，对照组不经膨大处理，二者均采用常规土、肥、水管理。2010年7月2日(幼果期)，将奇宝(质量分数为20%的赤霉素制剂)和益果灵(质量分数为0.2%的噻苯隆制剂)按1:1混合后，稀释10000倍，对葡萄浸穗处理1次。2010年7月6日开始取样，选取生长方位、高度一致的果穗取样，每穗每次随机取果实2～3粒，每6d取1次，至葡萄采收，共10次。

1.2 试剂与仪器

p-DMACA、双氧水、氯化铝、亚硝酸钠、硫酸铜、醋酸铵、三氯乙酸、氯化铁、氯化亚铁、水杨酸 天津博迪化工有限公司；芦丁、没食子酸、儿茶素、铁氰化钾、新亚铜、Trolox、Ferrozine、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) 美国Sigma公司；其他所有试剂均为分析纯。

UV-2450型紫外-可见分光光度计 日本岛津公司；Sorvall RC 5C Plus 高速冷冻离心机 美国Kendro公司；HH·W21·600S数显式电热恒温水温箱 上海跃进医疗器械厂。

1.3 方法

1.3.1 酚类物质的提取

随机取30粒葡萄果实，每粒葡萄取约1/4(去掉种子)，加入液氮并迅速研成粉末，称取粉末5.00g，加30mL 80%的酸化甲醇-0.1% HCl(体积比8:2)溶液，25℃条件下超声波提取30min，8000×g离心15min。残渣再分别用30mL和20mL酸化甲醇在相同条件下提取，合并3次上清液，保存在－20℃冰箱中待测。

1.3.2 酚类物质测定

总酚含量测定：采用Folin-Ciocalteu法[13]，以没食子酸为标准样；总黄酮含量测定：采用AlCl3比色法[14]，以芦丁为标准样；总黄烷醇含量测定：采用DMACA法[15]，以儿茶素为标准样。各指标重复测量3次。

1.3.3 抗氧化活性测定

1.3.3.1 铜离子还原力

参照Apak等[10]的方法并略有改动。取0.1mL提取液，依次加入1mL 5mmol/L CuSO4、1mL 3.75mmol/L新亚铜试剂和1mL NH4Ac (1mmol/L，pH7.0)缓冲液，最后加入1mL蒸馏水，37℃反应30min，于450nm波长处测定吸光度。以Trolox作为标准品，重复3次。

1.3.3.2 铁氰化钾还原力

参照Jayaprakasha等[16]的方法并略有改动。取1mL提取液，加入2.5mL磷酸缓冲液(0.2mol/L，pH6.6)，加入2.5mL质量分数为1%铁氰化钾溶液，混匀，50℃水浴20min，快速冷却后加入2.5mL质量分数10%的三氯乙酸，6000r/min离心10min，取上清液2.5mL，依次加入2.5mL蒸馏水、0.5mL质量分数0.1%的三氯化铁，反应5min，于700nm波长处测吸光度，以吸光度(A700nm)表示还原能力大小，重复3次。

1.3.3.3 DPPH自由基清除能力

参照Brandwilliams等[17]的方法并略有改动。取100μL稀释5倍的提取液，加入3.9mL 6.25×10-5mol/L DPPH溶液，避光反应30min，于517nm波长处测吸光度(Ai)。同时测100μL甲醇和3.9mL DPPH混合液的吸光度(Ac)。计算如公式(1)，重复3次。

1.3.3.4 金属螯合力

参照杨少辉等[18]的方法并略有改动。将0.5mL提取液与 0.1mL 2mmol/L FeCl2混合，加入5.0mL蒸馏水，最后加入0.2mL 5mmol/L Ferrozine试剂，充分混匀。室温条件下反应20min后，在562nm波长处测吸光度(Ai)；同时用甲醇代替提取液测对照Ac。计算如公式(2)，重复3次。

1.3.3.5 ·OH清除能力

参照Sroka等[19]的方法并略有改动。取1mL提取液，依次加入3mL蒸馏水、100μL 0.02mol/L FeSO4溶液、45μL 0.15% H2O2、1mL 8mmol/L水杨酸，于37℃恒温水浴中放置30min，在510nm波长处测吸光度(Ai)；同时用甲醇代替提取液测对照Ac。计算如公式(3)，重复3次。

1.4 数据分析

采用Excel 2003处理数据，用软件DPS 7.55对数据进行分析。

2 结果与分析

2.1 膨大处理对红地球葡萄酚类物质的影响

2.1.1 膨大处理对红地球葡萄总酚含量的影响

图1 膨大处理对红地球葡萄总酚含量的影响Fig.1 Effect of enlargement treatment on the content of total polyphenols in red globe grapes

由图1可知，在红地球葡萄的成熟过程中，其总酚含量是逐渐下降的。膨大处理后的红地球葡萄除了在处理后32、45d两处总酚含量略低于未处理红地球葡萄，其他时间总酚含量均大于对照组样品，且在4、17、54、60d处存在显著差异(P＜0.05)，分别增加了36.60%、19.02%、14.99%、38.96%。总体来看，膨大处理可促使红地球葡萄总酚含量增加。

2.1.2 膨大处理对红地球葡萄总黄酮含量的影响

图2 膨大处理对红地球葡萄总黄酮含量的影响Fig.2 Effect of enlargement treatment on the content of total flavonoids in red globe grapes

由图2可知，红地球葡萄的总黄酮含量随着成熟过程的延长逐渐下降。经过膨大处理的红地球葡萄总黄酮整体大于未处理红地球葡萄，且在处理后4、10、17、32、38、45、60d处存在显著差异。总体来看，膨大处理可使红地球葡萄总黄酮含量增加。

2.1.3 膨大处理对红地球葡萄总黄烷醇含量的影响

图3 膨大处理对红地球葡萄总黄烷醇含量的影响Fig.3 Effect of enlargement treatment on the content of total flavanols in red globe grapes

由图3可知，在红地球葡萄的成熟过程中，其总黄烷醇含量也呈现下降的趋势。膨大处理对红地球葡萄中总黄烷醇含量的影响与总黄烷醇含量的变化一致，在处理后4、10、17、32、38、45、60d处存在显著差异。总体来看，膨大处理可使红地球葡萄总黄烷醇含量增加。

2.2 膨大处理对红地球葡萄抗氧化活性的影响

2.2.1 膨大处理对红地球葡萄铜离子还原力的影响

图4 膨大处理对红地球葡萄铜离子还原力的影响Fig.4 Effect of enlargement treatment on cupric ion reducing capacity of red globe grapes

由图4可知，在红地球葡萄的成熟过程中，其铜离子还原能力逐渐下降。在处理后32、45d，对照组的铜离子还原能力大于处理组，其他时间处理组样品均大于对照组，并且在4、10、17、38、54、60d处存在显著差异。总体来看，膨大处理可以增强红地球葡萄铜离子还原能力。

2.2.2 膨大处理对红地球葡萄铁氰化钾还原力的影响

图5 膨大处理对红地球葡萄铁氰化还原力的影响Fig.5 Effect of enlargement treatment on potassium ferricyanide reducing activity of red globe grapes

由图5可知，在红地球葡萄的成熟过程中，铁氰化钾还原力是逐渐下降的。在处理后32、45d对照组的铁氰化钾还原力大于处理组，其他时间处理组的铁氰化钾还原力均大于对照组，并且在4、10、17、38、54、60d存在显著差异。总体来看，膨大处理可使红地球铁葡萄氰化钾还原力增强。

2.2.3 膨大处理对红地球葡萄DPPH自由基清除能力的影响

由图6可知，在红地球葡萄的成熟过程中，DPPH自由基清除率无明显变化。且膨大处理对红地球葡萄DPPH自由基清除力的影响较小，大部分对照组和处理组样品之间的差异不显著。除了在处理后4、17、45d对照组样品的DPPH自由基清除率大于处理组，其他时间处理组样品均大于对照组，并且在24、65d处存在显著差异。总体来看，膨大处理可使红地球葡萄DPPH自由基清除率增强。

图6 膨大处理对红地球葡萄DPPH自由基清除率的影响Fig.6 Effect of enlargement treatment on DPPH scavenging capacity of red globe grapes

2.2.4 膨大处理对红地球葡萄金属螯合力的影响

图7 膨大处理对红地球葡萄金属螯合力的影响Fig.7 Effect of enlargement treatment on ferrous iron chelating capacity of red globe grapes

由图7可知，在红地球葡萄的成熟过程中，金属螯合率变化趋势也不明显。另外，与DPPH自由基清除力相似，膨大处理对金属螯合率的影响较小，大部分对照组和处理组样品之间的差异不显著。除了在处理后17、38d对照组样品的金属螯合率大于处理组，其他时间处理组均大于对照组，并且在45d与65d时存在显著差异。总体来看，膨大处理可使红地球葡萄金属螯合率增强。

2.2.5 膨大处理对红地球葡萄·OH清除能力的影响

图8 膨大处理对红地球葡萄·OH清除能力的影响Fig.8 Effect of enlargement treatment on hydroxyl radical scavenging activity of red globe grapes

由图8可知，在成熟过程中，红地球葡萄·OH清除能力变化趋势不明显。另外，膨大处理对·OH的影响也较小，大部分对照组和处理组样品之间的差异不显著。在处理后4、32、38、54d，对照组的·OH清除率大于处理组，其他时间处理组样品均大于对照组，并且在60d与65d时存在显著差异。总体来看，膨大处理可使红地球葡萄·OH清除率增强。

2.3 酚类物质与抗氧化活性的相关性分析

表1 酚类物质与抗氧化活性的相关性分析Table 1 Correlation coefficients between phenolic compounds and antioxidant capacity

从表1可以看出，铜离子还原力与总酚含量、总黄酮含量、总黄烷醇含量的相关系数分别为1.00、0.99、0.99，均呈极显著正相关。铁氰化钾还原力与总酚含量、总黄酮含量、总黄烷醇含量的相关系数分别为0.98、0.99、0.99，也均呈极显著正相关。金属螯合力与总酚含量、总黄酮含量、总黄烷醇含量的相关系数分别为0.05、0.08、0.11，无显著相关性。DPPH自由基清除率与总酚含量、总黄酮含量、总黄烷醇含量的相关系数分别为0.43、0.41、0.42，无显著相关性。·OH清除率与总酚含量、总黄酮含量、总黄烷醇含量的相关系数分别为－0.77、－0.76、－0.73，均呈极显著负相关。

表2 不同抗氧化活性之间的相关性分析Table 2 Correlation coefficients among different methods for quantifying antioxidant capacity

由表2可见，在铜离子还原力、铁氰化钾还原力、DPPH自由基清除率、金属螯合力、·OH清除率5种抗氧化活性中，铜离子还原力与铁氰化钾还原力的相关系数为0.98，呈极显著正相关；铜离子还原力与DPPH自由基清除率的相关系数为0.44，呈显著正相关。铜离子还原力与金属螯合力、铁氰化钾还原力与金属螯合力、铁氰化钾还原力与DPPH自由基清除率、金属螯合力与DPPH自由基清除率、金属螯合力与·OH清除率、DPPH自由基清除率与·OH清除率的相关系数分别为0.08、0.1、0.39、0.3、0.08、－0.38，无显著性差异。铜离子还原力与·OH清除率、铁氰化钾还原力与·OH清除率的相关系数分别为－0.77、－0.76，呈极显著负相关。

3 结 论

膨大剂的主要成分是植物生长调节剂，生产上常用的膨大剂为多为赤霉素(GA3)或GA3与其他激素的混合物。膨大剂的作用机理主要是促进细胞分裂和细胞延伸生长，由于外源植物生调节剂的施用会影响果实生长发育过程中内源激素的变化，因此使用膨大剂还会对果实的其他品质产生影响，但影响结果因生长调节剂的种类、浓度以及施用时间不同而有所差异。雷鸣等[20]在转熟期用1g/L的脱落酸(ABA)对红地球进行处理，可促进果实着色和改善风味。陈锦永等[21]在红地球葡萄果粒横径在15～16mm时，用40～60mg/L的GA3水溶液浸穗处理一次，可显著增大果粒，但对果穗其他性状，成熟期和可溶性固形物影响不大。何娟等[22]研究发现，花前5d与盛花后3d用50mg/kg的GA3对红地球各进行一次微喷处理，可显著增大果粒，提高果实的含糖量。刘耀光等[23]花后10～15d以10～20mg/kg氯吡苯脲(CPPU)对红地球进行浸穗处理，可使坐果率、单果质量、穗质量及果粒纵横径明显增加，而可溶性固形物含量略有下降。何进尚等[24]研究表明，膨大剂处理会使红地球葡萄整个生育期延长，成熟期较对照推迟。

本实验在幼果期使用GA3与噻苯隆的混合剂对红地球葡萄进行浸穗处理1次，发现膨大处理对红地球葡萄酚类物质及抗氧化活性都有一定的影响。总体来看，膨大处理可增加红地球葡萄酚类物质并增强其抗氧化活性，这有助于红地球葡萄品质的提高。另外，膨大处理对红地球葡萄总酚含量、总黄酮含量、总黄烷醇含量、铜离子还原力、铁氰化钾还原力的影响比较大(总体差异显著)，而对金属螯合力、DPPH自由基清除率、·OH清除率的影响较小(总体差异不显著)。对以上指标进行相关性分析表明，铜离子还原力、铁氰化钾还原力与酚类物质相关性较好；金属螯合力、DPPH自由基清除率与酚类物质相关性较差；·OH清除率与酚类物质呈极显著负相关。

在实际生产中，应全面考虑膨大处理对葡萄品质的影响，在此实验基础上选择最佳的处理方式，力争从各方面提高红地球葡萄的品质。

[1] 郁松林, 肖年湘, 王春飞. 植物生长调节剂对葡萄果实品质调控的研究进展[J]. 石河子大学学报, 2008, 26(4): 439-443.

[2] 郭正兵, 高大响, 解振强. 几种膨大剂对葡萄产量和品质的影响[J].江苏农业科学, 2006(5): 91-92.

[3] 董秋洪, 杨天仪, 施莉莉, 等. 膨大剂对玫瑰香果粒膨大及其品质的影响[J]. 中外葡萄与葡萄酒, 2003(5): 25-28.

[4] 丁燕, 赵新节. 酚类物质的结构与性质及其与葡萄及葡萄酒的关系[J]. 中外葡萄与葡萄酒, 2003(1): 13-17.

[5] OJEDA H, ANDARY C, KRAEVA E, et al. Influence of pre-and postveraison water deficit and content of skin phenolic compounds during berry growth ofVitis viniferacv. Shiraz[J]. American Journal of Enology and Viticulture, 2002, 53(4): 261-267.

[6] 吕禹泽, 宋钰, 吴国宏, 等. 葡萄多酚的抗氧化活性[J]. 食品科学, 2006, 27(12): 213-216.

[7] 杜金华, 夏秀梅. 酚类物质在红葡萄洒中的作用[J]. 中外葡萄与葡萄酒, 2001(2): 48-51.

[8] da SILVA J M R, DARMON N, FEMANDEZ Y, et al. Oxygen free radical scavenger capacity in aqueous models of differrnt procyanidins from grape seeds[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1991, 39(5): 1549-1550.

[9] 高维民, 张会临. 山葡萄多酚对血管内皮细胞损伤的保护作用[J]. 中国公共卫生, 2006, 22(6): 715 -716.

[10] APAK R, GUCULU K G, OZYUREK M, et al. Novel total antioxidant capacity index for dietary polyphenols and vitamins C and E, using their cupric iron reducing capability in the presence of neocuproine: CUPRAC method[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2004, 52(26): 7970-7981.

[11] 李杨昕, 张元湖, 田淑芬, 等. 玫瑰香葡萄生长期酚类物质含量及抗氧化活性的变化[J]. 园艺学报, 2007, 34(5): 1093-1097.

[12] VERZELLONI E, TAGLIAZUCCHI D, CONTE A. Relationship between the antioxidant properties and the phenolic and flavonoid content in traditional balsamic vinegar[J]. Food Chemistry, 2007, 105(2): 564-571.

[13] SIGLETON V L, ROSSI J A. Colorimetry of total phenols with phosphomolybdic phosphotungstic acid reagets[J]. American Journal of Enology and Viticulture, 1965, 16: 144-158.

[14] PEINADO J, LERMA N L, MORENO J, et al. Antioxidant activity of different phenolics fractions isolated in must from Pedro Ximenez grapes at different stages of the off-vine drying process[J]. Food Chemistry, 2009, 114(3): 1050-1055.

[15] LI Yuguang, TANNER G, LARKIN P, et al. The DMACA-HCl protocol and the threshold proanthocyanidin content for bloat safety in forage legumes[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 1996, 70(1): 89-101.

[16] JAYAPRAKASHA G K, GIRENNAVAR B, PATIL B S. Radical scavenging activities of Rio Red grapefruits and Sour orange fruit extracts in differentin vitromodel systems[J]. Bioresource Technology, 2008, 99 (10): 4484-4494.

[17] BRANDWILLIAMS W, CUVELIER M E, BERSET C. Use of a freeradical method to evaluate antioxidant activity[J]. LWT Food Science and Technology, 1995, 28(1): 25-30.

[18] 杨少辉, 宋英今, 王洁华, 等. 雪莲果体外抗氧化和自由基清除能力[J]. 食品科学, 2010, 31(17): 166-169.

[19] SROKA Z, CISOWSKI W. Hydrogen peroxide scavenging, antioxidant and anti-radical activity of some phenolic acids[J]. Food and Chemical Toxicology, 2003, 41(6): 753-758.

[20] 雷鸣, 吴江, 程建辉, 等. ABA与NAA对红地球葡萄果实性状的影响[J]. 浙江农业科学, 2008(2): 153-155.

[21] 陈锦永, 方金豹, 顾红, 等. 环剥和GA3处理对红地球葡萄果实性状的影响[J]. 果树学报, 2005, 22(6): 610-614.

[22] 何娟, 郑强卿, 宋晓艳, 等. 赤霉素处理对红地球葡萄商品性状构成因素及内源激素的影响[J]. 石河子大学学报, 2010, 27(6): 33-36.

[23] 刘耀光, 曹慧. CPPU对红地球葡萄果实主要经济性状的影响[J]. 山西果树, 2007(2): 3-4.

[24] 何进尚, 王锦秀. 喷施膨大剂对红地球葡萄的影响研究[J]. 安徽农学通报, 2009(7): 148-149.

Effect of Enlargement Treatment on Phenolic Content and Antioxidant Activities of Red Globe Grape

LIU Jin-chuan1，MENG Jiang-fei1，GUO Zhi-jun1，GENG Wan-gang1，QIAO Ling1，ZHANG Ang1，ZHANG Zhen-wen1,2，FANG Yu-lin1,2,*
(1. College of Enology, Northwest A&F University, Yangling 712100, China；2. Shaanxi Engineering Research Center for Viti-vinicalture, Yangling 712100, China)

The effect of enlargement treatment on total phenols and antioxidant activities of red globe grapes were determined in this study. The phenolic compounds and antioxidant activities were investigated during the berry growth and maturation after enlargement treatments. The difference between the treatment and the control, the correlation coefficients between phenolic compositions and antioxidant capacity, as well as the correlation coefficients among different methods for quantifying antioxidant capacity were analyzed based on DPS. The results showed that the content of total phenols and antioxidant activities of red globe grapes could be increased by enlargement treatments. The effect of enlargement treatment on total polyphenols, total flavonoids, total flavanols, cupric reducing power, potassium ferricyanide reducing power were higher than on DPPH radical scavenging capacity, ferrous ion chelating capacity and hydroxyl radical scavenging activity. The phenolic compounds had a significant positive correlation with cupric reducing power and potassium ferricyanide reducing power, but a significant negative correlation with hydroxyl radical scavenging activity. Both DPPH radical scavenging capacity and ferrous ion chelating capacity had no positive correlation with phenolic compounds. A significant positive correlation between cupric reducing power and potassium ferricyanide reducing power, and positive correlation between cupric reducing power and DPPH radical scavenging capacity were observed. The potassium ferricyanide reducing power and cupric reducing power had a significant negative correlation with hydroxyl radical scavenging activity.

table grape；enlargement treatment；phenolic compounds；antioxidant activity

2011-03-03

国家现代农业(葡萄)产业技术体系项目(nycytx-30-2p-04)；国家林业局“948”项目(2009-04-09)；西安市科技创新支撑计划项目(NC10003)；农业部杨凌苗木繁殖基地项目

刘金串(1983—)，女，硕士研究生，研究方向为葡萄与葡萄酒学。E-mail：wondefuL_2006@yahoo.com.cn

*通信作者：房玉林(1973—)，男，副教授，博士，研究方向为葡萄的种质资源与利用。E-mail：fangyuLin@nwsuaf.edu.cn

S663.1

A

1002-6630(2012)05-0007-06