禽大肠杆菌和沙门氏菌混感的诊断与药敏试验

2012-10-25张荣武山东省陵县畜牧局253500

山东畜牧兽医 2012年7期

张荣武（山东省陵县畜牧局 253500）

张荣武（山东省陵县畜牧局 253500）

利用采自莱芜市某发病鸡场的病料，研究其致病原因并进行药敏试验。通过运用细菌分离培养鉴定、生化试验来鉴别分离自发病鸡群的致病菌。对采自发病鸡群的细菌进行药物敏感性试验。结果显示，分离自发病鸡群的细菌有2种，分别为大肠杆菌与沙门氏菌。大肠杆菌对头孢曲松与头孢噻肟中度敏感；沙门氏菌对头孢曲松、丁胺卡那中度敏感；对头孢噻肟、庆大霉素、安普霉素、强力霉素敏感。

大肠杆菌沙门氏菌药敏试验

2011年11月，莱芜某海蓝褐鸡场爆发疾病，患病鸡多为15日龄，死亡率30%。患病鸡精神沉郁，呆立，垂头缩颈，两翅下垂，羽毛松乱，食欲减少，饮欲增加。剖检发现肝脏表面有纤维素渗出，肝脏上面有针尖大小坏死灶，气囊浑浊，肾脏苍白。经药物多次治疗无效，为进一步确定该疾病的病原菌笔者进行了实验室分离诊断。通过对分离菌的鉴定确定了病原。

1 材料及方法

1.1 主要试剂 MH培养基、伊红美蓝培养基、麦康凯琼脂、SS琼脂、生化试剂管均购自杭州天和微生物试剂有限公司。药敏纸片购于北京天坛药业生物技术开发公司。

1.2 分离及初步鉴定用无菌接种环取病死鸡的肝脏、心脏病料，划线接种于麦康凯琼脂平板，37℃培养18~ 24h，在麦康凯琼脂平板上挑取红色菌落接种于伊红美蓝平板，挑取无色透明菌落接种于SS平板进行鉴别培养，37℃培养18~24h。挑取伊红美蓝平板疑似大肠杆菌的菌落接种于营养琼脂平板上面标号SD-1，挑取SS平板上面疑似沙门氏菌的菌落接种于营养琼脂平板上面标号SD-2。分别挑取纯培养，革兰氏染色，观察细菌形状和染色特性。

1.3 生化反应鉴定将分离疑似沙门氏菌菌株接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、卫矛醇、尿素、硫化氢，并进行枸橼酸盐利用、吲哚试验和V-P试验等生化试验，置于37℃温箱培养，每日观察。将符合大肠杆菌形态特征的细菌接种于蔗糖、水杨酸、D－木糖、硫化氢、卫矛醇、乳糖、麦芽糖、L－阿拉伯糖、甘露醇、间－肌醇、尿素酶、七叶苷水解、葡萄糖、山梨醇、吲哚、M－R、V－P、枸橼酸盐利用、明胶液化等 19项生化实验。

1.4 分离菌药物敏感性试验用接种环于营养琼脂培养基上挑取分离纯化的大肠杆菌菌落4~5个，接种于3~5mlLB液体培养基中。37℃培养12h，用生理盐水稀释至与0.5麦氏标准比浊管浊度相同的浓度。在15min内，用贴无菌棉签蘸取菌液，并在管壁上挤去多余的菌液后均匀涂布于M-H琼脂平板上，待干。用镊子蘸取95%乙醇并通过火焰，待烧干后再蘸取乙醇重复上述操作，共3次。待冷却后，用此无菌镊子夹取不同药敏纸片，按一定间隔在平板的不同区域，即两纸片间距不小于24mm，纸片距平板边缘不小于15mm，37℃温箱培养24h观察结果。沙门氏菌药敏试验同大肠杆菌。用大肠杆菌ATCC25922作为质控菌。试验选取药敏片：阿莫西林、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟、丁胺卡那、庆大霉素、安普霉素、强力霉素、环丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩诺沙星、红霉素。

2 试验结果

2.1 分离鉴定试验结果分离菌在麦康凯培养基上存在2种菌落，一种菌落为鲜桃红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑湿润。另一种菌落为圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明中间呈黑色、边缘整齐、中等大小的菌落。标号为的菌落在伊红美蓝培养基上生长为紫黑色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽。标号为SD-2的菌落在SS培养基上形成无色透明，圆形、微凸、光滑湿润、边缘整齐菌落。SD-1革兰氏染色镜检发现细菌呈阴性杆菌，SD-2革兰氏染色阴性短小杆菌。初步判定SD-1为大肠杆菌，SD-2为沙门氏菌。

2.2 分离菌SD-1菌鉴定结果如表1所示根据《伯杰氏手册》上面关于大肠杆菌鉴定，可以确定SD-1该株细菌为大肠杆菌。

表1 SD-1生化特性

2.3 分离菌SD-2菌鉴定结果如表2所示根据《伯杰氏手册》上面关于沙门氏菌鉴定，可以确定SD-2该株细菌为沙门氏菌。

表2 SD-2生化特性

2.4 药敏试验结果由表3可知该次试验分离的大肠杆菌对于阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、安普霉素、环丙沙星、恩诺沙星、磷霉素、氟苯尼考高度耐药，对于强力霉素、红霉素、丁胺卡那耐药，对于头孢曲松、头孢噻肟中度敏感。沙门氏菌高度耐受的药物有阿莫西林、环丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩诺沙星、红霉素。沙门氏菌对于氨苄西林耐药，对于头孢曲松、丁胺卡那中度敏感，对于头孢噻肟、庆大霉素、安普霉素、强力霉素敏感。