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高效液相色谱法测定盐酸川芎嗪注射液的含量

2012-10-22江苏省泰州市食品药品检验所225300帅玲

首都食品与医药 2012年12期
关键词:专属性量瓶川芎嗪

江苏省泰州市食品药品检验所(225300)帅玲

盐酸川芎嗪注射液(Ligustrazine Hydrochloride Injection)临床用于闭塞性脑血管疾病。现行大多采用紫外吸收系数法测定其含量,专属性差。本文采用高效液相色谱法测定含量,操作简便,专属性强。

1 仪器与试药

Waters 2695高效液相色谱仪,Waters2996二极管阵列检测器;岛津UV-2550紫外分光光度计;盐酸川芎嗪对照品(中国药品生物制品检定所,批号110817-200305);盐酸川芎嗪注射液(上海现代哈森药业有限公司,规格:2ml∶40mg,批号:11032912);水为娃哈哈纯化水,甲醇为色谱纯。

附表1 回收率试验结果(n=6)

附表2 样品含量测定结果(标示量/%)

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:waters symmetry C18柱(150mm×4.6mm,3.5μm);流动相:甲醇-水(40∶60)(用三乙胺调pH值至7.0);流速0.8ml/min;柱温:35℃;检测波长:280nm;进样量:20μl。

2.2 溶液的制备 对照品溶液:精密称取盐酸川芎嗪对照品19.51mg,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀;精密量取5ml,置50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。供试品溶液:精密量取样品1ml(约相当于盐酸川芎嗪20mg),置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,置50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。取注射用水作为空白溶液。

2.3 专属性考察 分别取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液,按“2.1”项下色谱条件试验。结果空白溶液无干扰,且盐酸川芎嗪峰与相连峰的分离度符合规定,理论板数按盐酸川芎嗪计算约为10000。

2.4 标准曲线的制备 精密量取对照品储备液1,2,3,4,5ml,分别置20ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。按照“2.1”项下色谱条件试验,记录色谱图。以峰面积(A)对质量浓度(C)进行线性回归,方程为A=51996C+11096(r=1.000)。结果表明,盐酸川芎嗪质量浓度在9.755~48.78mg/L范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度与重复性实验 取对照品溶液(19.51mg/L),重复进样5次,测定峰面积RSD为0.25%(n=5);取供试品,平行制备5份供试品溶液,分别测定。盐酸川芎嗪的平均含量为102.5%,结果RSD为0.40%(n=5),表明本方法重复性良好。

2.6 稳定性试验 取供试品,分别于0、6、12、18、24h进样20μl,记录峰面积,RSD分别为0.42%,表明其在24h内稳定。

2.7 回收率试验 精密量取已测知含量的样品1ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为供试品储备液;精密量取供试品储备液5ml置50ml量瓶,共6份,分别精密加入对照品储备液4.0,4.0,5.0,5.0,6.0,6.0ml,加水稀释至刻度,按样品含量测定项下方法测定,计算回收率(见附表1)。

2.8 样品含量测定 取对照品溶液与样品溶液各20μl,按“2.1”项下色谱条件测定,记录盐酸川芎嗪峰面积,按外标法计算含量,并与紫外-可见分光光度法测定结果作比较(见附表2)。

3 讨论

在试验中,参照文献[1][2]中的流动相,采用甲醇-水(40∶60)(用三乙胺调pH值至7.0)为流动相时,出峰时间适宜,峰形较好。利用Waters 2996检测器对供试品溶液和对照品溶液在200~350nm进行3D图谱扫描,结果在280nm处有最大吸收,据此选择280nm为测定波长。结果显示,高效液相法专属性强,测定结果准确,而紫外-可见分光光度法吸收系数法专属性差,且易受外界干扰。

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