白芨多糖对大鼠乙酸性胃溃疡治疗作用及机制的探讨*
2012-10-17武桂娟赵伟丽孙世晓
武桂娟 赵伟丽 赵 楠 孙世晓
（黑龙江中医药大学附属第一医院·哈尔滨 150040）
我们在前期研究表明，白芨多糖对大鼠应激性溃疡具有较好疗效［2］，但对大鼠乙酸性溃疡治疗作用及机制尚不清楚。故本实验通过建立大鼠慢性乙酸性实验性胃溃疡模型，观察白芨多糖对胃溃疡的抑制作用，并通过检测血清SOD活性、MDA含量、NO活性、ET—1含量，以及溃疡周围胃粘膜EGF和EGFR的表达探讨白芨多糖对胃溃疡的治疗机制。
1 材料和方法
1.1 材料
实验动物：雄性清洁级wistar大鼠，体重200±20g，购于黑龙江中医药大学实验动物中心，动物合格证号：SCXK黑2008-004。实验药品：白芨多糖由本实验室通过水浸醇提方法获得，经测定多糖含量达50%。盐酸雷尼替丁由中诺药业公司生产，批号：10118012，加蒸馏水配成2.83mg/ml低温避光储存备用。试剂：用于检测SOD、MDA、NO、ET-1的试剂盒购于南京建成生物工程研究所；大鼠EGF定量检测试剂盒购于尚柏生物医学技术（北京）有限公司；兔抗大鼠EGF多克隆抗体、兔抗人鼠EGFR多克隆抗体、SABC试剂盒、DAB显色剂购于武汉博士德生物工程有限公司。仪器：游标卡尺，上海精密仪器仪表有限公司；组织匀浆器，江苏耀华玻璃仪器厂；MRl812高速冷冻离心机，法国Jouan公司；电热鼓风干燥箱，天津泰斯特仪器有限公司；恒温水浴锅，上海跃进医疗仪器厂；722分光光度计，上海光谱仪器有限公司；显微镜测微尺，上海光学仪器厂；RM2015切片机，德国莱卡；医学图像分析管理系统，麦克奥迪图像技术有限公司。
1.2 方法
按完全随机方法将大鼠分为6组，每组10只，分别为正常组、模型组、白芨多糖高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组。除正常组外，其余按文献报道方法制备大鼠乙酸性溃疡模型。造模后第三天给药，各组每天灌胃1次，2ml/只，连续治疗14天。其中正常组、模型组给予生理盐水；白芨多糖高、中、低剂量为60mg/kg、30mg/kg、15mg/kg；阳性对照组给予盐酸雷尼替丁28.35mg/kg。末次给药后，禁食（不禁水）24小时，用过量乙醚处死大鼠，观察比较溃疡情况，采集标本并检测分析各项相关指标：①用游标卡尺测定溃疡指数（UI），首先观察溃疡灶个数，然后分别用游标卡尺测量出溃疡的长径和宽径，将两者相乘并求其总和作为UI；②计算溃疡抑制百分率，公式为溃疡抑制百分率=（模型组UI一给药组UI）/模型组UI×100%；③按试剂盒要求测定血清SOD、MDA、NO；④用双抗体夹心ABC-ELISA方法检测ET-1；⑤用免疫组化方法检测胃粘膜中EGF和EGFR。各组数据以均数±标准差表示，用SPSS11.5软件进行统计学分析。
2 结果
2.1 白芨多糖对乙酸胃溃疡大鼠UI及溃疡抑制百分率影响见表1
表1 各组人鼠UI及溃疡抑制百分率的比较（±S）
表1 各组人鼠UI及溃疡抑制百分率的比较（±S）
注：与正常组比较：*P 组别 n UI（治疗14天后）溃疡抑制率（%）正常组 10 — —模型组 10 10.74±3.16* —60mg/kg组 10 1.82±0.23# 86.64 30mg/kg组 10 2.16±0.37# 76.65 15mg/k8组 10 3.51±1.02# 70.42雷尼替丁组 10 2.65±1.33# 76.85 从表1可见，模型组UI与正常组相比存在显著性差异，P<0.01；白芨多糖低、中、高剂量组UI与模型组比较均具有显著性差异，P<0.01；雷尼替丁组UI与模型组相比具有显著性差异，P<0.01；白芨多糖高、中、低剂量对溃疡的抑制率分别为86.64%、76.65%和70.42%。 表2 各组大鼠血清SOD、MDA、N0、ET—1变化的比较（±S） 表2 各组大鼠血清SOD、MDA、N0、ET—1变化的比较（±S） 注：与正常组比较：*P ET—1(pg/ml)正常组 10109.28±32.54 11.434±3.02 60.21±12.08 22.49±9.12模型组 10 62.46±29.26* 18.52±2.11* 32.56±7.22* 64.89±10.21*60mg/kg组 10 89.67±32.02# 12.22±2.13# 51.64±5.42# 26.48±6.14#30mg/kg组 10 78.24±19.34# 13.27±1.64# 39.92±10.51# 28.12±10.20#15mg/kg组 10 70.47±21.56# 13.42±2.36# 42.40±8.66# 28.02±9.15#雷尼替丁组 10 80.48±26.10# 12.36±2.20# 39.85±10.12# 29.93±11.14#组别 n SOD（U/ml）MDA(nmol/ml)NO(μmol/L) 由表2可见，与正常组相比，模型组大鼠血清SOD、MDA、N0、ET—1有显著改变，二者纪统计学处理存在显著性差异，P<0.01。各治疗组SOD、MDA、N0、ET—1与模型组相比有明显变化，经统计学处理具有显著性差异，P<0.01。 表3 各组大鼠EGF和EGFR表达的比较（±S） 表3 各组大鼠EGF和EGFR表达的比较（±S） 注：与正常组比较：*P EGFR阳性面积（%）正常组 10 5.08±1.09 7.89±0.95模型组 10 16.25±9.36* 17.40±5.36*60mg/kg组 10 25.35+10.11# 24.32±10.21#30mg/kg组 10 23.43±9.46# 22.59±8.12#15mg/kg组 10 21.47±9.62# 21.01±6.33#雷尼替丁组 10 22.15±10.12# 22.37±9.05#组别 n EGF阳性面积（%） 由表3可见，模型组EGF和EGFR与正常组相比有明显变化，经统计处理P<0.01，各治疗组EGF和EGFR与模型组相比有明显变化，经统计处理P<0.01。 有研究表明［3、4］，胃粘膜在化学物质、缺血等刺激下，可产生大量氧自由基导致粘膜损伤，氧自由基对胃粘膜损害可能为脂质过氧化损害与共价键结合性损害。自由基清除剂别嘌岭能促进溃疡愈合，明显降低溃疡的复发率［5、6］。因此，提高体内氧自由基清除系统活性对治疗溃疡病具有重要意义。SOD是机体重要的抗氧化酶，可以清除自由基，MDA是脂质过氧化反应的中间产物，本实验观察了白芨多糖对乙酸性胃溃疡大鼠血清SOD活性、MDA含量的影响，结果表明，白芨多糖高、中、低剂量能显著升高乙酸性胃溃疡大鼠血清SOD活性，升降低MDA含量，说明白芨多糖的治疗作用与提高体内氧自由基清除系统活性有关。 研究表明，NO作为内源性血管舒张因子在消化系统有着广泛的调节作用，对胃粘膜有明显保护作用［7、8、9］。ET—1是强烈的内源性缩血管物质，可明显降低胃粘膜血流量，是胃粘膜损伤的始动因子［10、11］。本实验观察了白芨多糖对乙酸性胃溃疡大鼠血清NO活性、ET—1含量的影响，结果表明，白芨多糖高、中、低剂量能显著升高乙酸性胃溃疡大鼠血清NO活性，并降低ET—1含量，说明白芨多糖的治疗作用与改善粘膜血流发挥胃粘膜的保护作用有关。 EGF具有抑制胃酸分泌、促进上皮增殖及营养胃粘膜作用，与EGFR结合在保护胃粘膜免受损伤因子破坏、维持胃粘膜完整性方面具有重要意义［12、13、14］。本实验观察了白芨多糖对乙酸性胃溃疡大鼠溃疡周围胃粘膜EGF和EGFR表达的影响，结果表明，白芨多糖高、中、低剂量能使乙酸性胃溃疡大鼠胃粘膜EGF和EGFR表达上调，从而起到促进溃疡愈合的作用。 白芨多糖高、中、低剂量对溃疡的抑制率分别达到86.64%、76.65%和70.42%，说明白芨多糖对大鼠乙酸性胃溃疡有明显治疗作用，其治疗机制与增强胃粘膜抗氧化能力，抑制自由基生成，促进溃疡局部胃粘膜上皮细胞增生，加强损伤组织修复有关。 ［1］孙凤蓬，宋于刚，朱新生，等.冰乙酸性大鼠胃溃疡模型的建立及溃疡胃窦粘膜的光镜和透射电镜观察.世界华人消化杂志，2001，9（2）；135～138 ［2］武桂娟，苏晓悦，夏学丽，等.白芨多糖对大鼠应激性胃溃疡影响的实验观察.中医药信息，2011，28（3）：43～45 ［3］张澄田.消化性溃疡发病机理的某些新进展.实用中西医结合杂志，1994，7（1）：35 ［4］施华秀，任建林.氧自由基与胃黏膜损伤，世界华人消化杂志，2005，13（21）：2582～2585 ［5］Colpaert EE，Timmermans JP，Lefebvre RA.Immunohistochemical localization of the antioxidant enzymes biliverdin reductase and heme oxygenase-2 in human and pig gastric fundus.Free Radic Med 2002，32：630 ～ 637 ［6］Othman AI，E1-Missiry MA，Amer MA.The protective action of melatonin on indomethacin induced gastric and testicular oxidative stress in rats.Redox Rep 2001，6：173～177 ［7］Denizbasi A，Yegen C，Ozturk M，et al.Role of nirtic oxide in gastric injury byhmeorrhagic shock in rats.Phamacology，2000，61（2）：106 ［8］Ma L，Wallace JL，Endothelial nitric oxide synthase modulates gastric ulcer healing in rats.Am J Physiol Gasortintest Liver Physiol，2000，279（2）：341 ～ 346 ［9］Kwiecien S，Bzrozowski T，Konturek PCh et al.The role of reactive oxygen specieS in action ofnitric oxidedonors on stress-induced gastric mueosal lesions.Physiol Pharmacol，2002，53（4pt2）：761 ～ 773 ［10］Lazaratos S，Kaxhimura H，Nakahara A，et al.Gastric ulcer induced by submucosal injection of ET-1：Role of potent vasoconstriction and intraluminal acid.Am J Physiol，1993，265：6491 ［11］MasudaE，Kawano S，Michida T，etal.Plasma and gastric mucosal endothelin—1 concentrations in patients with peptic ulcer，Dig DiS Sci，1997，42（2）：314 ［12］许春娣.表皮生长因子在消化性溃疡愈合中的作用.国外医学·儿科学分册，1997，24（3）：123～126 ［13］聂昭华，郑文尧.消化性溃疡患者Hp、胃粘膜炎症和血清胃液EGF变量的关系.华人消化杂志，1998，6（7）：600～602 ［14］Johnson L R，Guthrie P D.Stinulation of rat oxyntic gland mucosal growth factor.Am J Physiol，1988，238：452.2 白芨多糖对乙酸胃溃疡大鼠血清SOD、MDA、NO、ET—1的影响见表2
2.3 白芨多糖对乙酸胃溃疡大鼠EGF和EGFR表达的影响见表3
3 讨论
