富硒灵芝对动脉粥样硬化大鼠抗氧化作用的影响*

河北省蔚县人民医院 陈利明 苑留云陈海英杨红兵师 正(张家口075700)

动脉粥样硬化 (AS)是多种危险因素引发的一种慢性、进行性病理过程。近年大量研究证实，氧化应激(OS)与AS的发病关系密切，在AS发生发展中发挥了重要作用。［1］研究拟从抗氧化应激角度探讨富硒灵芝防治AS的作用机制。

1 实验材料

1.1 实验动物 成年健康雄性SD大鼠50只，体质量180～200 g，由河北省实验动物中心提供，动物合格证号:708056。

1.2 实验药物及试剂 富硒灵芝:在液体培养基中加入亚硒酸钠培养出富硒灵芝 (含硒量为4.32 mg/g)，［2］课题组实验室培养，80℃烘干，超微粉碎备用。血脂康:北大维信生物科技有限公司，国药准字:Z10950029，实验时配置成0.02 g/mL的水溶液。SOD、MDA、GSH-PX试剂盒:均由南京建成生物工程研究所提供。

2 实验方法

2.1 大鼠动脉粥样硬化模型的建立［3］50只大鼠除10只正常饲料饲养外，其余40只大鼠以促动脉粥样硬化饲料、普通饮水饲养9周。促动脉粥样硬化饲料在正常饲料基础上加入2%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、维生素D3粉剂 (1.25×106U/kg饲料)、3%猪油，实验开始予每只大鼠30万U/kg体质量的维生素D3右下肢肌肉注射，此后每3周重复给予上述剂量维生素D3右下肢肌肉注射。

2.2 分组与给药 50只大鼠饲养于18℃ ～22℃明暗各12 h的清洁级动物实验室内，喂养1周后，分为5组。正常对照组、模型对照组均灌服生理盐水;富硒灵芝低、高剂量组分别灌服富硒灵芝 (含药量分别为0.02 g/mL、0.08 g/mL);血脂康对照组灌服血脂康 (0.02 g/mL)。每日1次，给药体积为1 mL/100 g。连续9周，第9周末各组大鼠末次给药后禁食禁水12 h，10%水合氯醛4 mL/kg腹腔注射麻醉后腹主动脉取血。

2.3 检测方法 SOD、MDA、GSH-PX检测:采用黄嘌呤氧化酶法测定血清SOD的含量，硫代巴比妥酸 (TBA)法测定血清MDA的含量，DTNB法测定血清GSH-PX活性。

2.4 统计学分析 采用SPSS 12.0统计软件进行数据的输入和计算，其数据用(±s)来表示，多组均数比较，用单因素方差分析法 (One-way ANOVA)，当P＜0.05时差异有显著性。

3 结果

与正常对照组比较，模型对照组SOD含量、GSH-PX活性均显著降低 (P＜0.01)，MDA含量显著升高 (P＜0.01);与模型对照组比较，各治疗组均可显著升高SOD含量，降低MDA含量 (P＜0.05或P＜0.01)，各治疗组间比较，差异无显著性 (P＞0.05)。富硒灵芝高、低剂量组又可升高GSH-PX活性 (P＜0.01)。结果见表1。

表1 各组大鼠血清SOD、MDA含量，GSH-PX活性的比较(±s)

表1 各组大鼠血清SOD、MDA含量，GSH-PX活性的比较(±s)

注:与正常对照组相比，#P＜0.01;与模型对照组相比，★P＜0.05，★★P＜0.01

组 别 n SOD(U/mL) MDA(nmol/mL)GSH-PX(U/mL)10 142.52±14.90 4.39±0.51 1 669.4±170.75模型对照组 10 114.84±8.32# 7.79±0.80# 1 193.4±134.27#低剂量组 10 123.68±12.44★ 6.91±0.82★ 1 383.9±141.46★★高剂量组 10 125.89±9.04★★ 6.52±0.67★★ 1 405.3±183.23★★血脂康组 10 129.94±14.77★★6.34 ±0.86★★正常对照组1 205.4±99.18

4 讨论

灵芝是一种珍贵的药用真菌，具有养心安神、补气益血、补肺平喘、滋补强壮、扶正固本等功效。灵芝含有多种有效成分，多糖类是其主要有效成分之一。灵芝多糖具有多方面的生物活性和药理作用，能有效调节高血脂动物血脂水平。［4-5］硒是人体必需的微量元素，具有保护肌体免受氧化损害的功能。硒通过增强谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX的活性，催化氧化型谷胱苷肽 (GSSG)还原为还原型谷胱苷肽 (GSH)，使生物膜和细胞免遭自由基的损害而减轻脂质过氧化反应。人体的硒主要来源于食物，从营养学和生化代谢角度考虑，生物源有机硒以其吸收利用率高、毒副作用小等特点优越于无机硒。灵芝对某些微量元素特别是硒具有高度的富集作用，并把无机硒转化为有机硒，利于人体摄入。本实验采用的富硒灵芝是灵芝在加硒深层培养中，对无机硒进行生物转化而成为富含生物有机硒的灵芝。

根据损伤反应学说，AS首先由高血脂使动脉的内膜受到损伤引起，AS的发生和发展，与血清 TC、TG等水平有关。LDL是AS发生发展的主要脂类危险因素，而高密度脂蛋白 (HDL)被认为是一种抗AS的脂蛋白，其作用机制是充当逆向转运胆固醇的载体，在限制动脉胆固醇的沉积和清除胆固醇上起着重要作用。实验已经证明富硒灵芝能有效调节AS大鼠脂质代谢异常，并具有保护血管内皮细胞的作用。［5］正常情况下肌体内存在着氧化-抗氧化系统，当人体内氧自由基大量产生，或者清除自由基的酶系统作用减弱时，自由基会攻击脂类、糖、蛋白质及核酸等生物大分子，从而引起各种疾病。SOD是肌体重要的内源性自由基清除剂，通过歧化方式清除超氧化物，它的活性反映机体对抗自由基损伤的抵抗能力;MDA是氧自由基与生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化。GSH-PX可以降低氧自由基，提高氧化酶活性并抑制脂质过氧化物形成。

本实验结果显示，与模型对照组相比，各治疗组均可升高AS大鼠血清SOD含量，降低MDA含量。富硒灵芝高、低剂量组又可升高GSH-PX活性。表明富硒灵芝对动脉粥样硬化大鼠具有很好的抗氧化损伤作用。

［1］Aviram M.Atherosclerosis:cell biology and lipoproteins-oxidative stress and paraoxonases regulate atherogenesis［J］.Curr Opin Lipidol，2010，21(2):163-164

［2］牛丽颖，石玉娥，刘振国，等.人工富硒灵芝菌丝中微量元素及氨基酸含量分析［J］.中国食用菌，1998，17(6):31-32

［3］温进坤，韩梅，杜玮南，等.一种快速建立大鼠动脉粥样硬化模型的实验方法［J］.中国老年学杂志，2001，21(1):50-52

［4］罗少洪，陈伟强，黄韬，等.灵芝多糖对高血脂大鼠血脂水平的影响［J］.广东药学院学报，2005，21(5):589-590

［5］陈利明，杨红兵，苑留云，等.富硒灵芝对动脉粥样硬化大鼠血脂代谢及内皮细胞损伤的影响［J］.河北中医药学报，2012;27(1):10-11