地龙酒炙前后水煎液气味的吹扫捕集-GC-MS-嗅闻联用研究

张 萌 徐 硕 高 志 宋焕禄 王 璇 蔡少青

1.北京大学药学院，北京 100191；2.北京工商大学食品学院，北京 100048

广地龙为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum（E.Perrier）的干燥体，具有清热定惊、通络、平喘、利尿等功效[1]，为中药常用药物。近年来的研究主要关注其抗凝血、溶栓和改善血液循环作用[2]。地龙在临床多以水煎液形式使用，然而浓烈的腥臭味常常让服用者难以忍受。一般认为酒炙这种传统的炮制方法具有矫臭解腥的作用[3-4]，而且酒炙地龙较生地龙具有更优的活血通络作用[5]，但目前对于上述矫臭解腥的原理以及药理作用的物质基础并不明确，且对地龙气味成分的分析研究还未见报道。顶空法（静态顶空）是一种以分析置于密封容器中的样品上方的蒸汽组成为基础的气相色谱法，它能真实地反映样品的气味组成，揭示人们所嗅到的气味本质。吹扫捕集法（动态顶空）是利用高纯惰性气体连续通过待测样品并携带挥发性有机物进入捕集装置的色谱法。同静态顶空相比，吹扫捕集技术能够分析高分子量的挥发性和半挥发性的化合物，不需要使用溶剂萃取[6-7]。该技术具有样品前处理简单、灵敏度高、操作简便、可实现在线测定以及富集倍数高的特点，其与气相色谱（GC）-质谱法（MS）联用在挥发性物质的分析中应用广泛[8-10]。

本文采用吹扫捕集-GC-MS-嗅闻联用技术，对地龙水煎液进行了气味成分研究，并比较了地龙酒炙前后气味成分的变化，以期找到改善地龙水煎液腥臭味的方法。本实验还加入了嗅觉检测器，在气相色谱柱末端安装分流口，分流样品到质谱仪和嗅觉检测器，使得对气味成分的分析更加直观。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 6890N GC系统、Agilent 5975c inert XL MS检测器、Gerstel TDS/TDU/ALEX气泵、Gerstel TDS3热脱附系统、TDSA2热脱附自动进样器、三口吹扫捕集玻璃容器、水浴循环系统（国华2004-21超级恒温水浴）、Gerstel thermo extractor、Gerstel Tenax TA 吸附管。

1.2 试药

地龙生品（批号：6173）于2007年8月购自北京市同仁堂药材公司，经北京大学药学院蔡少青教授鉴定为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum（E.Perrier）的干燥体。商品酒地龙（批号：6167）于2007年8月购自山东济南同仁堂药店，地龙酒炙品（批号：YH1）为生品6167的自制酒炙品。以上药材凭证标本均保存于北京大学药学院生药标本室。

2 方法与结果

2.1 样品的提取及吹扫捕集

将地龙药材剪成约0.5 cm长的小段，称取10 g样品，加水100 mL，加热回流提取，保持沸腾1 h，用纱布过滤。

吹扫捕集：量取上述滤液30 mL，置于吹扫捕集瓶中密封，接循环水，50℃水浴平衡20 min。将捕集管插入瓶的一端，另一端插入氮气管，50℃吹扫1 h。之后将捕集管连在氮吹仪上，吹干捕集管内的水分。

2.2 仪器条件

热脱附条件：将Tenax吸附管放入热脱附系统TDSA2，自动进样。

脱附条件：初始温度35℃，保持0.5 min，延迟2 min，以60℃/min升温到230℃，保持1 min，传输线温度300℃。

冷进样系统条件：初始温度为-100℃，平衡0.2 min，以10℃/min升温到 300℃，保持 0.5 min。

GC 条件：HB-5 毛细管柱，30 m×250 μm×0.25 μm；升温程序：35℃保持2 min，以5℃/min的升温速度升至200℃，再以10℃/min的速度升至270℃，保持5 min。不分流进样。

MS条件：EI源；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；扫描范围：m/z 30～400；扫描方式：全图谱扫描；溶剂延迟：2 min。

2.3 样品分析结果

每份样品平行测定两次，3个样品的总离子流色谱图（TIC）分别见图1、2、3。地龙的气味成分在 25 min 内出现。地龙水煎液中最主要的峰为8.5 min左右的己醛，此成分具有青草味道。

从TIC图可看出，同一份药材的生品与酒炙品差异并不显著。酒炙品的多数色谱峰的峰面积要高于生品。地龙酒炙后气相成分主要的变化是在TIC图的9.5 min出现的糠醛峰明显增高。商品酒地龙的色谱峰均较低，可能跟放置较久有关。将3份样品的6次测定结果进行统计，提取出6次检测中全部检测到且匹配度大于0.90的色谱峰。结果共有32个成分符合上述要求，其中包含12个气味成分，具体见表1。

实验表明地龙生品、地龙酒炙品和商品酒地龙热水煎液的气味无明显差别，酒炙后气味成分含量无明显降低。酒炙地龙水煎液在放置2 h后能明显降低腥臭味。

图1 地龙生品的TIC图

3 讨论

笔者曾设计单盲实验，请实验室12位同学分别对地龙酒炙前后的药材和水煎液的气味进行了评价，结果如下：①药材：12人中有12人认为酒炙品腥味较大；②水煎液：12人中有10人认为酒炙品腥臭程度较大，1人认为生品腥臭程度较大，1人认为腥臭程度无明显差别。受试者均反映两者气味有细微差别。水煎液放置2 h后12人全部反映酒炙品腥臭程度小于生品。

图2 地龙酒炙品的TIC图

图3 商品酒地龙的TIC图

表1 地龙酒炙前后水煎液共有挥发性成分

这一结果证明了酒炙并不能立刻使地龙药材或水煎液的腥臭味降低，反而会在短时间内使腥臭味加重，而此实验中地龙酒炙品色谱峰峰面积高于生品的结果也得到相同结论。推测原因为酒炙可促进地龙中气味成分的挥发，水煎后气味快速挥发，使得腥臭味加重，但放置一段时间后由于大部分气味成分已散发出去，因此水煎液腥臭味降低。

另外，本实验的结果表明酒炙后地龙水煎液的气味成分并无明显减少，相反多数挥发性成分的量有所增高，其中增高较明显的为糠醛，有类似杏仁油气味，但因该化合物含量很低，实验中并未闻到其气味。

本文采用吹扫捕集-GC-MS-嗅闻联用的方法对地龙水煎液进行了分析。结果表明，酒炙前后水煎液中主要含有32个共有成分，其中12个为气味成分，可作为控制地龙臭味的参考依据，为进一步研究动物药去臭方法奠定了基础。中药的气味研究目前尚处于空白状况，本研究试图建立一种适用于具腥臭味中药的分析方法，以期对中药矫臭解腥方法的研究提供帮助。

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