正交实验优选姜炭炮制工艺的研究

刘光明

广东省新兴中药学校，广东 新兴 527400

姜炭为姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的干燥根茎经炒炭形成的炮制品。其性热，辛味消失，守而不走，长于止血温经，其温经作用弱于炮姜，是中医治疗出血证的常用药物，可用于各种虚寒性出血且出血较急、量较多者［1]。《中国药典》2010年版一部炮制通则附录ⅡD项及《全国中药炮制规范》中姜炭的炮制方法均为传统炒炭法。该法为手工操作，器具敝开，原药气味散失大，所用“武火”、“中火”、“文火”等“火候”无客观的温度参考，完全依靠个人经验判断，各地姜炭的炮制程度及内在质量也存在较大的差异，这些因素都直接影响姜炭的成品质量及临床疗效。因此，优选姜炭炮制新工艺有重要的意义。但目前均没有关于研究姜炭炮制新工艺的系统报道。本研究以浸出物含量、凝血时间为指标，结合成品性状，对姜炭的炮制工艺进行优选，对提高炮姜炭成品质量有重要的意义，并为制定姜炭饮片质量标准提供依据。

1 仪器与材料

1.1 药材

干姜，购自云浮市大森林药房 (产地：广东;批号：20110812)，经广东省新兴中药学校彭瑞松副主任中药师鉴定为姜科植物姜Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块根。

1.2 仪器

箱形电阻炉，型号Sxz-4-10，佛山电炉厂制造;便携式温度计，WREU一892型，上海浦江电表厂生产;BP211D型电子天平，德国Sartorius公司;101-1型数显鼓风干燥箱，广州红星仪器有限公司;内径0.9-1.1mm毛细管，华西医科大学仪器修造厂;秒表;手术剪;毫米尺等。

1.3 动物

KM系小鼠，18～22g，购自广州中医药大学实验动物中心。

2 方法和结果

2.1 姜炭的炮制

表1 姜炭炮制正交设计因素水平表

表2 姜炭炮制结果

以姜炭的传统炮制工艺为参照［2]，对炮制过程中的温度、时间及加热方式3项影响炭药饮片质量的主要因素进行考察。前2因素各选取3水平，后1因素选取2水平，按L9(3)4正交表进行实验设计，并按正交表所示条件对干姜进行炮制。炮制过程中准确记录加热温度、时间、成品性状，并计算成品得率。结果显示样品5炭品的外观性状符合《中国药典》2010年版一部姜炭外观质量标准 (表面黑色，内部棕褐色)。炭品得率最高为样品1，其依次为样品2、样品3、样品7、最少为样品9。结果见表l、表2。

炭品得率%=成品炭量/样品量×100%。

2.2 浸出物测定

精密称取各样品姜炭粉4g，每样品各取3份，按《中国药典》2010年版一部附录XA浸出物测定法［3]，水溶性浸出物测定法项下冷浸法进行测定［2]，计算各样品中水溶性浸出物的含量。结果表明干姜经制炭后，除样品5的水浸出物含量略有升高外，其余样品浸出物含量均不同程度地降低，结果见表3。各姜炭组水溶性浸出物与干姜组水溶性浸出物经统计学比较 P＞0.05，无明显差异。

表3 各样品姜灰水溶性浸出物含量测定结果表 (n=10)

2.3 凝血时间的测定

2.3.1 药液的制备

称取样品 1至样品 10各 100g，加水 500ml，浸泡30min，武火煮沸改文火煎30min，双层纱布过滤，药渣分别加水300 ml、200ml，煎煮30、20min，过滤，合并滤液，于水浴上浓缩至100ml，冰箱冷藏备用。每ml供试品相当于姜炭样品1 g。

2.3.2 对小鼠断尾出血时间的影响［4]

表4 姜炭水煎剂对小鼠断尾凝血时间的影响 (±SD，n=10)

表4 姜炭水煎剂对小鼠断尾凝血时间的影响 (±SD，n=10)

注：与对照组比较，*P＜0.01。

样品 剂量 (ml/20g) 给药途径 出血时间 (s)1 ig 213.6 ±34.7 2 1 ig 212.6 ±37.1 1 3 ig 231.6 ±36.3 4 1 ig 219.6 ±32.5 1 5 ig 176.7 ±27.3*6 1 ig 182.3 ±35.2*1 7 ig 191.5 ±40.1*8 1 ig 221.2 ±25.9 1 ig 234.6 ±36.2 10 1 ig 261.3 ±36.8对照组9 1 ig 380.6 ±60.5-

取18～22g健康KM小鼠110只，雌雄各半，随机分为11组，以1ml/20g剂量，每日灌胃给药1次，连续3 d，对照组给等量的蒸馏水，末次给药后60 min将小鼠固定，在距尾尖8mm处标记，用手术刀片从标记处迅速横断，待血液自行溢出时开始计时，每隔30 s用滤纸将流出的血滴吸去，直至出血自然停止 (滤纸吸时无血)为止，即为出血时间(室温20℃ ～25℃条件下进行)。结果发现样品5、样品6、样品7对小鼠的出血时间有明显的缩短作用，其中出血时间最少为样品5组炭品176.7±27.3 s。具体结果见表4。

2.3.3 对小鼠凝血时间的影响［5]

取18～22g健康KM小鼠110只，雌雄各半，随机分为11组，以1ml/20g剂量，每日灌胃给药1次，连续3 d，对照组给等量的蒸馏水，末次给药后60 min用眼科弯镊迅速摘去小鼠一侧眼球，于载玻片两端各滴一滴血，血滴直径约5 mm，秒表计时，每隔20 s用清洁大头针自血滴边缘向里轻轻挑动一次，观察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝止，所历时间即为凝血时间 (室温20℃ ～25℃条件下进行)。结果发现各样品对小鼠的凝血时间均有一定的缩短作用，其中用时最短为80.1±14.2 s(样品5组炭品)，其次分别为样品9、样品6….用时最长为对照组，具体结果见表5。

表5 炮姜炭水煎剂对小鼠凝血时间的影响 (±SD，n=10)

表5 炮姜炭水煎剂对小鼠凝血时间的影响 (±SD，n=10)

注：与对照组比较，*P＜0.01。

样品 剂量 (ml/20g) 给药途径 凝血时间 (s)1 ig 90.6 ±11.6 2 1 ig 96.4 ±10.6 1 3 ig 95.1 ±12.4 4 1 ig 92.1 ±13.5 1 5 ig 80.1 ±14.2*6 1 ig 83.8 ±11.3*1 7 ig 84.6 ±12.5*8 1 ig 87.2 ±16.1 1 ig 117.2 ±11.5 ig 83.1 ±14.6*10 1 ig 86.2 ±12.3对照组9 1-

3 讨论

3.1 通过正交实验优选姜炭炮制工艺的研究，结果发现样品5组炭品外观性状最符合《中国药典》2010年版一部姜炭外观质量标准，水溶性浸出物、鞣质含量均最高，其凝血、止血时间最短。统计学表明，样品5组与对照组均有较大差异性 P＜0.01。因此，姜炭炮制最佳工艺应选为A2B2C2即250℃、加热15 min(烘法)。

3.2 该炮制工艺操作简便，劳动强度低，对环境污染少，成品质量高，较好解决了炮制工作中影响姜炭饮片质量存在的主要问题，规范了炮姜炭炮制的时间、温度和炮制方式，可规范化生产并能为制定炮姜炭饮片质量标准提供依据。

［1]崔国静，刘芳.干姜、炮姜与炮姜炭［J].传统中医药，2011，4：52～52.

［2]张镜潮，何镜华，蓝水中.实用中药炮制［M].第1版.广州：广东科技出版社，1993：204.

［3]中国药典 ［S].一部.2010：附录56-57.

［4]李仪奎.中药药理实验方法学［M].第1版.上海：上海科学技术出版社，1991：496.

［5]陈奇.中药药理研究方法学［M].第1版.北京：人民卫生出版社，1993：275.