自拟固肠促长散对小白鼠的亚急性毒性试验

高光平，张艳英，高桂生，张东林，史秋梅

(河北科技师范学院动物科技学院，河北省预防兽医学重点实验室，河北秦皇岛，066600)

仔猪腹泻是一种典型的多因素性疾病，常会导致饲料报酬率低［1］，仔猪成活率下降，生长缓慢，生长发育停滞(僵猪)，甚至死亡，1～3月龄仔猪多发，有的规模化猪场仔猪腹泻发病率高达50%以上，死亡率15%～20%，是引起仔猪生长受阻和高死亡率的重要原因，每年给养猪业带来的直接经济损失上亿元。

长期使用抗生素易产生耐药性细菌及药物在畜禽产品中残留，并通过食物链影响人类健康，对人类生存造成威胁［2，3］，因此许多国家禁止或限制一些抗生素在动物养殖中的应用。很多中药兼有营养与药用两种属性，不但可以促进畜禽生长，改善产品品质，还能抑制病原菌，增强机体免疫功能，提高抗病力，从而达到促进生长，防病治病的目的。安全性试验是开发研制新药不可缺少的环节，为了检验中草药制剂的安全性，做亚急性毒性试验是必要的［4～8］。

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．1．1 实验动物 56只昆明系小白鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g。

1．1．2 药物与试剂 自拟防治猪腹泻、促进增长的纯中药制剂(暂定名:固肠促长散)，由黄芩、白术、甘草等药物组成;谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、总胆红素测定试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1．1．3 实验设备 TU-1901系列紫外/可见分光光度计，BCC-1000D半自动血球计数仪，BX51显微镜等。

1．2 实验方法

固肠促长散开水冲泡20 min，过滤，低温浓缩成10 g/L的中药液。56只小白鼠随机分成4组，每组14只。1，2，3 组分别为中药液的高、中、低剂量组，分别以 0．3，0．2，0．1 mL/只剂量灌胃，每组灌胃体积均为0．3 mL，第4组为对照组，灌生理盐水0．3 mL。各组连续灌胃14 d，每天1次，停药后再持续观察14 d。

1．3 观察指标

1．3．1 临床观察 每天观察小白鼠的一般状况，每周测定体质量变化情况。

1．3．2 血常规检查 于停药后第l天和第14天，各组随机抽取7只，剪断眼球采血，质量浓度为38 g/L的柠檬酸钠抗凝(V抗凝剂∶V血=1∶4)，立即测定血液生理指标。

1．3．3 血清生化指标测定 于停药后第l天和第14天，每组随机取7只，剪断眼球采血，分离血清，分别测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、总胆红素含量。

1．3．4 小白鼠剖检 于停药后第l天每组随机抽取7只，停药后第14天对剩余所有小白鼠剖检，眼观脏器组织病变情况，并摘取肺脏、脾脏、肾脏、胸腺、肝脏，浸泡于体积分数为0．1的甲醛溶液中固定，HE染色，40倍镜组织学观察。

1．4 数据处理

各项测定结果数据均以平均值±标准差表示，各种数据间差异显著性比较采用DPS V3．01专业版软件进行统计学检验和方差分析。

2 结果与分析

2．1 各组小白鼠临床表现

各组小白鼠在灌胃给药后，临床观察无异常表现。各试验组在给药第7天、第14天和停药后第7天、第14天时的体质量增加幅度与对照组相比无显著差异(p＞0．05)(表1)。

表1 各组小白鼠灌药前后的平均体质量 g

2．2 各组小白鼠血常规变化

试验组小白鼠的红细胞总数、白细胞总数、血红蛋白含量、血小板数在停药后第l天及停药后第14天与对照组相比无显著差异(p＞0．05)(表2)。

表2 各组小白鼠血常规的变化

2．3 各组小白鼠血清生化值变化

3个试验组小白鼠的血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、黄嘌呤氧化酶、总胆红素含量在停药后第l天及停药后第14天与对照组相比无显著差异(p＞0．05)(表3)。

2．4 各组小白鼠病理学变化

在停药后第l天和第14天，剖检各组小白鼠，其心、肝、脾、肺、肾、胃和肠的形态、颜色、质地均正常;HE染色，40倍镜组织学观察，各个组织、器官均未见异常。

3 结 论

3．1 固肠促长散对小白鼠体质量的影响

在整个试验期内，固肠促长散不同剂量组和对照组小白鼠的体质量增加差异不显著。

3．2 固肠促长散对小白鼠血常规、血清生化指标的影响

固肠促长散的高、中、低等3个灌胃剂量均高于推荐的临床给药剂量(1 mL/kg)，给药时间14 d，也大大长于临床推荐的给药时间(3～5 d)，连续给药14 d后和停药后14 d，各剂量组小白鼠的血常规、血清生化值与对照组相比均未发生显著性变化。

3．3 固肠促长散对小白鼠内脏器官的影响

剖检观察各组小白鼠胸腺、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃脏和肠道均正常，组织学检查也未见异常。

以上结果表明，固肠促长散按照推荐的给药剂量和给药疗程无亚急性毒性，固肠促长散对小白鼠的生长和各项生理指标无显著影响，临床应用安全。

表3 各组血清生化值的变化

［1］宣长和．猪病学［M］．北京:中国农业出版社，2003．

［2］计成，郭巨恩，杨瑛，等．在畜牧生产中使用抗生素添加剂引发的问题［J］．中国农业科技导报，2001，3(1):55-58．

［3］侯雁，那小平．绿色饲料天然无残留动物生长促进剂的生产技术研究［J］．畜禽业，2001(6):45．

［4］尹章汉，许四元，樊柏林，等．消食口服液食用安全性研究［J］．湖北预防医学杂志，2000，11(4):23-24．

［5］金宏，许建平，孙志良，等．兽用地锦草注射液的安全性试验研究［J］．湖南农业科学，1999(5):48．

［6］关建红，薛征，任晋斌．莶草水煎剂小鼠急性毒性及亚急性毒性的试验研究［J］．中国试验方剂学杂志，2007，13(11):50．

［7］农业部兽药审评委员会办公室．兽药试验技术规范汇编［M］．北京:中国农业科学技术出版社，2001．

［8］中华人民共和国卫生部医政司．全国临床检验操作规程［M］．北京:人民卫生出版社，2006．