利用LC/MS/MS方法检测人参芦头中人参皂苷Rg1和Re的含量*

2012-10-10吴睿凡赵松岩刘运嘉吴晓霞聂颖兰

中国中医基础医学杂志 2012年10期

吴睿凡，赵松岩，刘运嘉，吴晓霞，彭娟，闫寒，聂颖兰，郭娜，范斌△

(1.新疆医科大学，乌鲁木齐 830011;2.沈阳药科大学，沈阳 110016;3.沈阳市药品不良反应和医疗器械不良事件监测中心，沈阳 110013;4.中国中医科学院医学实验中心，北京 100700)

人参为五加科植物，人参 Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎，性甘微苦、微温，归脾、肺、心、肾经，有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津养血、安神益智之功效。临床多用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、气血亏虚、久病虚赢等病证的治疗［1］。人参中的人参皂苷为重要的活性成分，现代对人参皂苷的含量测定有许多方法，主要采用高效液相色谱法、高效液相色谱－蒸发光散射检测等［2～5］，但人参皂苷 Rg1和 Re较难完全分离。其次，目前对于人参芦头成分含量的研究较少。本文建立的检测人参芦头中人参皂苷Rg1和Re含量的LC/MS/MS方法，在2 min内2种皂苷全部出峰，方法快速灵敏。

1 材料

1.1 药物及试剂

Re、Rg1均购于中国药品生物制品检定所，人参产地吉林(批号0090410)，由中国中医科学院中药研究所何希荣主任医师鉴定为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根。正丁醇(分析纯)、乙腈(色谱纯)、甲酸(色谱纯)均购于北京迪科马科技有限公司。

1.2 仪器

Agilent 6410 QQQLC-MS分析系统(美国Agilent RRLC液相色谱仪;Agilent 6410 QQQ三重四级杆质谱检测器;Masshunter工作站)，赛多利斯arium61316/611VF超纯水处理器、赛多利斯 BT25S分析天平和多功能提取罐。

2 人参芦头中人参皂苷Rg1和Re的测定方法学考察及含量测定

2.1 色谱条件

液相条件:Agilent ZORBAX C18 SB(2.1×50mm 1.8-Micron);流动相:A:水(0.05%FA)，B:乙腈;A∶B=70∶30(V/V)，梯度洗脱:0min～2 min，B:60%;2min～3 min，B:100%，流速为 0.35 mL·min－1;柱温:40 ℃ 。

质谱条件:正离子模式，MRM，Re m/z 969.6→789.5，Rg1m/z 823.5→643.5。利用以上色谱条件分析得到 Re和 Rg1的混合对照品的总离子流图(TIC)(图1)和各自的提取离子流图(EIC)(图2)及各成分在人参芦头中的TIC图(图3)。

2.2 供试品溶液的制备

图1 人参Re和Rg1对照品的TIC和EIC图

图2 人参芦头样品中Re和Rg1的TIC和EIC图

取本品粉末0.1 g过40目筛精密称定，精密加入水饱和的正丁醇5ml密塞，放置过夜，超声(功率250W，频率50kHz)处理30min，2次合并滤液，精密量取滤液0.5ml，氮气吹干，残渣加甲醇1ml超声溶解，0.22um微孔滤膜，即得。

2.3 线性关系

精密称取Re和Rg1对照品，Re的浓度依次为1.5、3.0、6.0、12.0、24、48ng/mL;Rg1的浓度分别为3.5、7.0、14、28、56、112ng/mL，按 2.1 的色谱条件进样分析。以峰面积Y对浓度X进行回归处理得到Re和Rg1的回归方程分别为 Y=55.2216X－50.6413(r=0.9996)和Y=91.3617X+17.8616(r=0.9992)，说明 Re和 Rg1分别在1.5～48 ng/mL和3.5～112 ng/mL范围内线性关系良好。

2.4 精密度

按2.3制得的对照品溶液连续进样6次，记录各组分的峰面积，计算6次的标准偏差(RSD)，得到人参皂苷Re和人参皂苷Rg1峰面积的RSD分别为4.1%和3.9%。

2.5 方法的重复性

按2.2平行制备6份样品，按2.1的色谱条件进样分析，记录人参皂苷Re和人参皂苷Rg1的峰面积，计算6份平行样品间的相对标准偏差(RSD)分别为4.9%和4.2%，表明方法重复性良好。

2.6 加样回收率

取上述已测知含量的样品粉末6分，各约0.1 g精密称定，精密加入混合对照品溶液，按2.2项制备样品，2.1项的液质条件进样分析。计算加样回收率，公式为加样回收率 =(加样后测定值－原样测定值)/加样量 ×100%，并求得标准偏差。求得回收率平均值(n=6)分别为95.8%、96.7%，RSD分别为4.9%和4.2%。