恩施道地药材黄连的质量标准研究

李亚杰，龙 澜，杨永康 ，李红英，程新华，覃大吉

(1.湖北省农业科技创新中心鄂西综合实验站，湖北恩施445000;2.湖北恩华生物开发有限公司，湖北恩施445000)

黄连为毛茛科植物黄连(Coptis Chinensis Franch.)的干燥根茎.性味苦、寒，归心、脾、胃肝、胆、大肠经.功能清热燥湿，泻火解毒，用于胃肠湿热，泻痢呕吐，热盛火炽，高热烦躁，还用于痈疽疔毒，皮肤湿疮，耳目肿痛.四川、云南、湖北等地多有野生，人工栽培亦由来已久，湖北黄连产区主要集中于恩施州，为我国黄连主产区之一.

1 药材名称

黄连始载于《神农本草经》，列为上品.《名医别录》载“黄连生巫阳川谷机蜀郡、泰山.二月、八月采［1］.《本草纲目》载［2］:“今岁吴、蜀皆有，惟以雅州、眉州者为良.药物之兴废不同如此.大抵有两种:一种根粗无毛有珠，如鹰爪形而坚实，色深黄;一种无珠多毛而中虚，黄色稍淡.各有所宜.”据产地、药物形状及性味来看，《本草纲目》所载前一种即今之“味连”.原植物为黄连Coptis Chinensis Franch.，后一种即今之“雅连”，原植物为三角叶黄连C.deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao..恩施地区早年为巴蜀(四川)之地，所产药材多为川药［3］.恩施黄连其形如鸡爪、即为前文之味连，又名鸡爪连、川连.

2 植物来源

本品为多年生草本，高15～25 cm.根状茎，黄色，常分枝，呈簇状或者束状，并密生多数须根.叶基生，叶片卵状三角形，尖纸质(老叶略带革质)，花3～8朵，白绿色或黄色，苞片披针形.聚合蓇葖果6～12枚，每个蓇葖果有种子8～12粒，种子长椭圆形，褐色或黑褐色.花期2～3月，果期4～6月.由于生物碱的含量与生长年限有一定的关系，连最适宜的采收期为5年左右［4］.恩施主要生长在海拔500～2000 m间的山地林中或山谷阴处，分布于利川、恩施、巴东、咸丰、鹤峰、宣恩等县市，利川最具代表性，利川黄连产量占我国黄连总产量的近50%［5］.本研究采集的恩施太山庙、利川福宝山、重庆石柱的黄连经湖北省农科院中药材研究所由金文专家鉴定均为味连，为毛茛科植物黄连Coptis Chinensis Franch的干燥根茎.

3 药材性状

恩施黄连根茎多分枝积聚成簇，形如鸡爪，或单枝弯曲，粗细不一，长3～6 cm，以长4 cm左右居多，直径0.3～0.7 cm.节密生，有不规则的结节突起和众多硬须根残基，形如连珠，部分节间平滑，习称“过桥”，上部有棕色鳞叶残基.表面黄褐色，外皮脱落处呈黄棕色.质坚实而硬，折断面不整齐，呈红黄色，外皮深有红点，内层色浅有菊花纹，中央偶有空心，无臭，味极苦［6］.见图1.

4 水分测定

按照2010版《中国药典》(附录Ⅸ H第一法)进行测定［7］.

5 总灰分测定

按照2010版《中国药典》(附录Ⅸ K)进行测定.

6 浸出物测定

用稀乙醇作溶剂，按照醇溶性浸出物测定法(附录ⅩA)项下的热浸法进行测定.

图1 恩施地区黄连药材图Fig.1 The figure of rhizoma coptidis produced in Enshi

7 有效成分含量测定

黄连的根茎含多种生物碱，主要为小檗碱，其次为黄连碱、甲基黄连碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱及木兰花碱等［8］，因其盐酸小檗碱含量最高，通常采用盐酸小檗碱作为指标性成分，这里采用HPLC法建立了黄连药材中小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀的含量测定方法.

7.1 仪器与试药

戴安液相3000;KQ－250D型超声波清洗器;盐酸小檗碱、表小檗碱、巴马汀、小檗碱对照品(上海源叶生物科技有限公司)，色谱乙腈，去离子水，磷酸二氢钾、十二烷基磺酸钠.超声波，其他玻璃仪器等;

7.2 方法与结果

7.2.1 色谱条件 色谱柱:依利特 C18(4.6*200 mm，5 μm);流动相:乙腈 ∶磷酸缓冲盐=35∶65(V/V)，磷酸缓冲盐的配置:0.05M磷酸二氢钾溶液，磷酸调pH=3.0，加1.5g/十二烷基磺酸钠入1000mL去离子水中，过滤，即可.检测波长:345 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:25℃.表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱对照品和黄连样品HPLC色谱图见图1～2.

图2 1－表小檗碱、2－黄连碱、3－巴马汀、4－盐酸小檗碱对照品Fig 2 The reference substance of 1－ epiberberine、2－ Coptisine、3－ palmatine、4－berberine hydrochloride

图3 黄连样品Fig 3 The sample of coptis chinensis franch

7.2.2 对照品溶液的制备 取表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱对照品适量，用甲醇分别配置成含表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱、80、60、80、100 μg/mL 的对照品溶液.

7.2.3 供试品的制备 精确称取黄连药材(粉碎过4号筛)0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密称定，分别精密加入甲醇 ∶盐酸(100∶1)50 mL、超声波提取30 min，精密移取续滤液1 mL，置10容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，过滤备用.

7.2.4 线性关系的考察 取对照品溶液，按照 7.2.1 色谱条件，分别进样 2、5、10、20.0、40.0 μL，以峰面积(A)对浓度(C)回归分析，得表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱标准曲线回归方程:A=4.45x+0.06，相关系数 r=0.99999、A=3.92x+0.04，相关系数 r=0.99998、A=6.48x+0.87，相关系数 r=0.99998、A=9.02x+0.64，相关系数r=0.99999.结果表明，表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱在此条件下呈良好的线性关系.

7.2.5 精密度试验 按照7.2.1色谱条件连续进同一供试品溶液5次，测定表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱峰面积的RSD为2.24%.

7.2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按每2 h测定一次，供试品中表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱面积的RSD为1.24%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定.

7.2.7 重复性试验 取黄连药材5份，按照7.2.3的方法平行制备5份供试品，依法测定，计算表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱保留时间和峰面积的RSD分别为0.98%，1.45%;表明该方法的重复性较好.

7.2.8 加样回收率试验 取已知含量的黄连样品约0.2 g，精密称取3份，分别加入等量的对照品，按照7.2.3的方法进行处理，计算回收率，结果见表1.

表1 表小檗碱、巴马汀、黄连碱、盐酸小檗碱加样回收率实验Tab.1 The average recovery of epiberberine，palmatine，coptisine，and berberine hydrochloride

7.2.9 样品的测定 取供试品，进样20 μL，在345 nm处检测黄连样品的HPLC色谱图，测得各地黄连中表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱的含量，详见表2.

表2 各地黄连中水分、总灰分、浸出物及主要有效成分的含量/%Tab.2 The contents of moisture，total ashes，ethanol extracts，and main effective component from different species of coptis/%

8 讨论

各地黄连中表小檗碱、黄连碱、巴马汀、盐酸小檗碱的含量测定结果表明，恩施各地黄连有效成分含量均符合药典要求，尤其是盐酸小檗碱的含量远高于其他成分以及药典，恩施各地黄连与重庆石柱黄连比较差异不显著，可能与地域相近有关.此外，水分、总灰分、以及浸出物测定的结果对黄连的质量评价均具有一定的参考价值.由于药材收集制约因素，本研究团队只收集了恩施太山庙和利川福宝山两个具有代表性的产地，今后研究中应加以克服.

［1］ 唐慎微(宋)，尚志钧，郑金生，等.证类本草［M］.北京:机械工业出版社，1993:187.

［2］ 李时珍(明).本草纲目(下册)［M］.北京:人民卫生出版社，1982:771.

［3］ 张万福，詹亚华，尹文仲，等.恩施道地药材的历史背景及传统品牌地位评价［J］.中国中药杂志，2005，31(1):20－23.

［4］ 刘杰书.恩施黄连栽培环境和最佳采收期的研究［J］.湖北民族学院学报:医学版，2000，17(4):24－25.

［5］ 郭志刚，赵 琳，孙瑞强，等.利川黄连小檗碱含量［J］.中国医学科学院学报，2004，26(6):618－621.

［6］ 方志先，廖朝林.湖北恩施药用植物志(上册)［M］.武汉:湖北科技出版社，2006:291－293.

［7］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(第一部)［S］.北京:中医医药科技出版社，2010:285－286.

［8］ 李彩虹，周克元.黄连活性成分的作用及机制研究进展［J］.时珍国医国药，2010，21(2):466－468.