尖锐湿疣组织中p-Stat3和COX-2的表达*

尹光文，李孝辉，张恒坡，李旭阳

郑州大学第一附属医院皮肤科 郑州 450052

信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)是JAK-STAT信号通路中的一种关键性转录因子，其酪氨酸位点被异常激活后形成p-Stat3(其磷酸化形式)，该信号通路的异常激活在肿瘤的发生发展中起重要作用。环氧化酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)是前列腺素合成的限速酶，在正常组织中多不表达，但在一些细胞因子、癌基因及促肿瘤剂等刺激下表达上调，参与肿瘤的发生和发展[1]。尖锐湿疣(condylomata acuminatum，CA)是由人乳头状瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染所致的皮肤黏膜增生性病变，临床上具有增生快、易复发的特点。目前，p-Stat3和COX-2的表达异常与CA的关系鲜见报道。作者采用免疫组化SP法检测人CA和正常包皮组织中p-Stat3和COX-2蛋白的表达情况，探讨它们在CA发病中的可能作用。

1 材料与方法

1.1 标本来源 43例CA患者均为郑州大学第一附属医院皮肤性病科门诊病例，具有典型皮损特征，并经组织病理学证实，其中男31例，女12例;年龄17 ～55(31.4 ±7.3)岁;病程20 ～108(54.7 ±13.6)d。取材前均未接受免疫治疗，且无其他系统疾病。以32例泌尿外科门诊手术切除的正常成年男性包皮作为对照。所有标本取材后均置于40 g/L多聚甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续4 μm厚切片。

1.2 CA和正常包皮组织中p-Stat3和COX-2蛋白的检测 采用免疫组化SP法。p-Stat3兔抗人多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，COX-2单克隆抗体、二抗、SP9001试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术服务有限公司。操作按试剂盒步骤进行，p-Stat3一抗按100倍稀释，COX-2一抗按20倍稀释。所有切片染色均采用相同条件，阳性对照为已知p-Stat3和COX-2蛋白染色阳性的组织切片，以PBS代替一抗作空白对照。

1.3 结果判定 p-Stat3蛋白阳性显色为细胞核内出现淡黄色至棕褐色颗粒，COX-2蛋白阳性显色为细胞膜和胞膜附近的胞质出现淡黄色至棕褐色颗粒。参照文献[2]评分方法，根据阳性细胞百分比和着色强度进行评分。阳性细胞百分比＜10%为0分，10% ～为1分，26% ～为2分，51% ～75%为3分，＞75%为4分。着色强度:不着色为0分，着淡黄色为1分，着黄色为2分，着棕褐色为3分。上述两项分值的乘积为最后得分:0分为阴性(－)，1～4分为弱阳性(+)，6～8分为阳性(⧺)，9～12分为强阳性(⧻)。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0进行分析，应用两独立样本秩和检验比较2种组织中p-Stat3和COX-2蛋白表达水平的差异，应用Pearson列联系数分析CA组织中2种蛋白表达的关联性，检验水准α =0.05。

2 结果

2.1 CA和正常包皮组织中p-Stat3和COX-2蛋白的表达 见图1、表1。p-Stat3蛋白主要表达于棘细胞层和颗粒层角质形成细胞的胞核中，正常包皮组织中p-Stat3无表达。COX-2蛋白主要表达于棘细胞层的中上部和颗粒层，正常包皮组织中仅有少量表达。

图1 CA(A)和正常包皮组织(B)中p-STAT3和COX-2蛋白的表达

表1 CA和正常包皮组织中p-STAT3和COX-2蛋白的表达

2.2 CA组织中p-Stat3和COX-2蛋白表达的关联性 见表2。43例CA组织中p-Stat3与COX-2表达呈正关联。

表2 CA组织中p-STAT3和COX-2蛋白表达的关联性分析

3 讨论

STAT3是一种核转录因子，作为白细胞介素6信号传递中的急性反应因子被发现并纯化[3]。在一些细胞因子、生长因子的刺激下，STAT3可通过酪氨酸激酶或丝氨酸激酶的活化，成为p-Stat3，并形成二聚体转移入细胞核，调控靶基因的转录，在分子水平上影响细胞的增殖和凋亡[4]。作者的研究结果显示，CA组织中p-Stat3蛋白的表达水平高于正常对照组织。推测HPV可能是通过JAK-STAT信号转导通路使STAT3活化，活化的STAT3(p-Stat3)表达增加，诱导抗凋亡基因、细胞周期控制基因及血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶9的高表达[5]，从而增强细胞的分裂增殖能力，抑制细胞凋亡，促进血管形成，进而促进CA的发生发展。

Rodrigues等[6]报道COX-2一旦被诱导即可催化花生四烯酸氧化，形成前列腺素和高反应活性的副产物，通过与受体偶联的G蛋白作用，激活下游的磷脂酶C及蛋白激酶C途径或钙信号系统，从而促进肿瘤的发生。该研究结果显示，CA组织中COX-2的表达水平高于正常对照组织。推测可能是HPV通过基因整合使原癌基因激活和(或)抑癌基因失活，使COX-2的mRNA转录增加，这与郭颖等[7]报道的一致;也可能是HPV感染引起细胞增殖旺盛，导致局部相对缺氧，刺激COX-2的合成增加。COX-2的过表达可刺激细胞生长、抑制细胞凋亡、刺激新生血管形成和抑制局部免疫功能等，从而影响细胞增殖[8]，促进CA的发生发展。

该研究结果显示CA组织中p-Stat3和COX-2蛋白的表达呈正关联，表明COX-2蛋白的表达也可能与JAK-STAT信号通路异常激活有关。

总之，p-Stat3和COX-2蛋白在CA组织中的过表达及相关性结果提示，二者的共同作用可能促进了CA组织过度增殖和凋亡异常，在CA发病中起重要作用。

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