TAFI基因启动子区－2345 2G／1G多态性与脑梗死的关系

陈煜森 曾志良 林智君 冼文川 钟望涛 赵 斌 许志恩

1）广东医学院附属医院神经内科 湛江 524001 2）广东东莞市太平人民医院 东莞 523900

脑梗死是最常见的脑卒中类型，其发病机制复杂，孪生子女、家族研究表明脑梗死是一种复杂的多因子疾病，有明显的家族遗传倾向，其发病与多种基因和环境因素相关［1－2］。脑梗死的亚型不同，遗传学对其发病影响的程度不同，动脉粥样硬化性脑梗死的遗传组成部分要强于心源性卒中，提示侧重于动脉粥样硬化性脑梗死的遗传学研究可能会更有效［3－4］。凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）在凝血和纤溶系统中起着重要作用，从而参与动脉血栓形成［5－7］，因此，TAFI基因可能是脑梗死发病相关的候选基因。最近有研究表明，TAFI基因编码区多态性与脑梗死发病相关［8］，而其启动子区多态性对TAFI抗原表达具有调控作用，我们推测TAFI基因启动区多态性亦可能与脑梗死的发病相关。为证实这个推测，我们研究中国汉族人群凝血酶激活的纤溶抑制物基因启动子区－2345 2G／1G与动脉粥样硬化性脑梗死发病的关系。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1研究对象病例组225例，男145例，女80例；年龄38～80岁，平均（67.60±10.61）岁，均为2006－08－2007－11我院神经内科住院的脑梗死病人，病程1周内，均为汉族人，所有病例均经临床及CT和（或）MRI确诊（依照第4届全国脑血管病学术会议诊断标准）。排除心脏源性栓塞、动脉炎、血液病等其他原因引起的脑梗死。

对照组184例，男107例，女77例，平均年龄（66.11±11.02）岁，为我院健康体检者，均为汉族人，无脑卒中史，并经临床检查和（或）影像学检查排除脑卒中。排除感染、发热及炎症性疾病、肝肾功能不全、血液病、自身免疫性疾病等。详细记录入选者的脑血管病危险因素，包括高血压、糖尿病、吸烟、血脂等。所有标本的收集均经本人或家属同意。

1.2基因组全血DNA提取用QIAGEN酶法提取全血DNA。

1.3等位基因特导性聚合酶链反应分析（AS－PCR）TAFI－2345 2G／1G多态性，引物设计参考 Mireille Henry［9］，引物序列见表1。

表1 扩增TAFI－2345 2G／1G多态性位点的引物序列

1.4统计学方法采用SPSS 11.5统计分析软件和遗传学数理统计方法进行统计分析，采用基因计数计算各组基因型频率和等位基因频率，Hardy－Weinburg平衡吻合度和基因频率、基因型统计分析采用χ2检验或Fisher确切概率法。检验水准α＝0.05。

2 结果

2.1 TAFI－2345 2G／1G位点的电泳图TAFI－2345 2G／1G的AS－PCR结果：所有标本中均产生内参404bp，1G／1G基因型：同一标本中如含上游引物a1的PCR产物中有293bp产物，而含上游引物a2的PCR产物中没有；2G／2G基因型：同一标本中如含上游引物a1的PCR产物中没有293bp产物，而含上游引物a2的PCR产物中存在；2G／1G基因型：同一标本中如含上游引物a1的PCR产物中存在293bp产物，而含上游引物a2的PCR产物中亦存在，见图1（1、2为同一标本B1，3、4为同一标本B2，5、6为同一标本B3，7、8为同一标本B4）。为验证AS－PCR方法的可靠性，选取B3和B4标本送上海生工进行测序，结果见图2和图3，测序结果与ASPCR结果吻合。

图1 TAFI－2345 2G／1G位点 AS－PCR电泳图

图2 B4标本测序分型结果为2G／2G基因型

图3 B3标本测序分型结果为2G／1G基因型

2.2 Hardy－Weinburg平衡检验病例组与对照组人群的TAFI－2345 2G／1G基因型分布经χ2检验均符合 Hardy－Weinburg平衡，TAFI－2345 2G／1G态性位点的基因型分布在所研究的人群中已达到遗传平衡。见表2。

2.3 TAFI－2345 2G／1G基因型及等位基因频率分析见表3，TAFI－2345 2G／1G 在 病 例 组 的 1G 等 位 基 因 频 率 为42.9%，对照组为50.8%，2组间差异有统计学意义（P＝0.024）；病例组 1G／1G 基因型频率为 15.1%，对 照 组为24.5%，2组间差异有统计学意义（P＝0.017）。

2.4多元Logistic回归分析以脑梗死为因变量，脑梗死危险因素为自变量进行Logistic回归分析，见表4。TAFI－2345 1G／1G基因型与脑梗死的发病独立相关（OR0.445，95%CI0.252～0.822，P＝0.009），是脑梗死的独立发病因素。

表2 基因型分布的Hardy－Weinburg平衡吻合度检验

表3 TAFI－2345 2G／1G、基因型及等位基因频率分布

表4 本研究人群中多元Logistic回归分析结果

3 讨论

凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）基因又称CPB2基因，位于染色体13q 14.11，含有11个外显子，其编码的蛋白质是一种酶原，激活后能减弱纤维蛋白溶解，在血液凝固和纤维蛋白溶解的平衡中发挥纽带作用。普通人群中血浆TAFI抗原水平的个体差异很大，可达10倍之多，可能受遗传控制［9－10］。血浆TAFI水平的变异可能与脑血管病有关，有研究表明血浆TAFI水平升高能显著增加急性脑梗死发生的危险性，提示TAFI也许可作为急性脑梗死发生的危险性预测因子［11］。Boffa等［12］学者在人类肝癌细胞的研究中发现TAFI基因启动子区－53至－40的区域有一个假设的C／EBP结合点，这个位点消除C／EBP结合点的突变使TAFI启动子活性降低80%。TAFI基因启动子区多态性与TAFI抗原水平密切相关，－438A／G可以解释41%的遗传可能性［9］。Franco等［13］研究认为－438A／G多态性位点非常靠近转录因子结合的位置，位于VBP转录因子结合位置的下游区1bp，其多态性可能会通过影响特异转录因子的结合或者改变染色质在TAFI基因座位上的结构，从而改变启动子的转录活性，影响抗原水平［14］。因此TAFI基因启动子区多态性可能与脑梗死的发病相关，Ladenvall等［15］分析了TAFI基因不同功能区共11个SNP，在单位点分析中没有发现SNP与缺血性脑血管病有关联，其中启动子区仅选择－438A／G进行分析，目前为止未见启动子区其他位点多态性与脑梗死相关报道，本研究旨在探讨TAFI基因启动子区－2345 2G／1G多态性与急性动脉粥样硬化性脑梗死的关系。

Henry等［9］研究显示 TAFI－2345 2G／1G多态性可以解释20%的遗传可能性。Frère等［11］的研究提示在非洲人群中TAFI－2345 2G／1G与TAFI水平相关。本研究发现，病例组TAFI－2345 1G／1G基因型2组间比较差异有统计学意义，经多元Logistic回归分析，差异仍有统计学意义，提示1G／1G基因型对脑梗死有保护作用，是脑梗死的独立遗传因素。病例组1G等位基因频率低于对照组，而2G等位基因的频率则高于对照组，提示2G等位基因是脑梗死的危险因素，而1G等位基因则有保护作用。由此可见，对于中国汉族人，TAFI－2345 2G／1G多态性与动脉粥样硬化性脑梗死相关联。目前未见有关TAFI－2345 2G／1G多态性与脑梗死的报道，二者的关系还有待深入研究与明确。

本研究是国内外首次对中国人群中TAFI基因启动子区单核苷酸多态性与急性脑梗死关系进行研究，需大规模多中心研究进一步证实，如同时将测定活化的TAFI抗原水平、多个多态性位点与动脉粥样硬化性脑梗死结合起来一同研究分析，更能反映相互关系。

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