猪圆环病毒2型疫苗免疫对母猪繁殖性能及仔猪母源抗体水平的影响

张 毅，李 郁，刘 文，孙 裴，魏建忠＊

（1.安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥230036；2.合肥华杰畜禽养殖有限公司，安徽合肥230031）

猪圆环病毒病是断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）以及繁殖障碍等猪圆环病毒相关疾病（Porcine circovirus associated disease，PCVAD）的总称。研究表明猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV－2）是引起PCVAD的主要病原体［1］。由于猪群感染 PCV－2后，机体免疫功能受到损害，造成并发或继发感染的现象相当严重，给养猪业造成巨大的经济损失。2007年PCV－2疫苗在国外上市以来，疫苗免疫接种已成为预防PCV－2感染的重要手段，大量田间试验表明，PCV－2疫苗可诱导母猪产生高滴度的PCV－2抗体，能够提高母猪的繁殖性能，并且可为仔猪提供良好的免疫保护［2－4］。2010年PCV－2疫苗首次在我国推广使用，部分养殖企业对疫苗免疫效果了解不足，且国内没有较全面的PCV－2疫苗免疫接种母猪田间试验的相关报道。本研究通过对母猪免疫PCV－2疫苗，旨在了解母猪在接种PCV－2疫苗前后生产性能的差异及仔猪母源抗体的变化规律，为防控PCV－2的感染，制定科学的免疫程序，尤其是仔猪首免日龄的确定提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验时间及地点 2010年8月至2011年11月，合肥某猪场。

1.1.2 试验用动物与分组 免疫生产母猪640头，于其中选取同期分娩的4头不同胎次的经产母猪（编号分别为A、B、C、D），及其所产的仔猪随机抽取5头（编号分别为 A1－5，B1－5，C1－5，D1－5）。

1.1.3 主要试剂 2×Taq Master Mix、DNA Marker DL 2 000为北京天根生化科技有限公司产品；蛋白酶K、SDS、Tris、TE缓冲液均为上海生工生物工程技术服务有限公司产品；PCV－2－ELISA抗体检测试剂盒为深圳康百得生物科技有限公司产品；其他试剂均为国产分析纯；PCV－2阳性血清为安徽农业大学动物科技学院动物传染病研究室保存。

1.1.4 PCV－2特异性引物 参照文献［5］设计引物，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，预期目的片段大小为630 bp。引物序列为P1：5′－GGTTACACGGATATTGTAGTCC－3′（22nt）；P2：5′－CGTTACCGCAG AGAAACAC－3′（21nt）

1.2 方法

1.2.1 疫苗及免疫方案 疫苗：猪圆环病毒2型油佐剂灭活疫苗，批号：L369579。

免疫方案：2010年8月初首免，间隔3周后加强免疫1次，产前4周进行跟胎免疫。免疫接种方式为耳根后肌肉注射，2 mL／头。

1.2.2 血清中PCV－2核酸的提取 参照文献［6］进行。

1.2.3 PCV－2特异性基因片段的扩增 反应体系总体积为25μL，其中包括2×Taq Master Mix 12.5μL，上下游引物各0.5μL，双蒸水6.5μL，DNA模板5μL；反应条件为94℃5 min；94℃45 s，54℃1 min，72℃1 min，35个循环；72℃ 延伸10 min。

1.2.4 血清中PCV－2抗体的ELISA检测 按照PCV－2－ELISA抗体检测试剂盒说明进行操作。

1.2.5 仔猪PCV－2母源抗体及核酸的检测 试验母猪（A、B、C、D）在产前1周，经前腔静脉采血并分离血清，检测PCV－2抗体。

试验母猪所产仔猪（A1－5，B1－5，C1－5，D1－5）分别在哺乳前、10、20、30、40、50、60日龄时，经前腔静脉采血并分离血清，检测PCV－2抗体及其核酸。

1.2.6 试验母猪PCV－2疫苗免疫接种前后生产性能比较 收集试验母猪免疫接种PCV－2疫苗前（2009年7月至2010年7月，618头）的生产数据，以及试验母猪免疫接种PCV－2疫苗后（2010年11月至2011年11月，640头）的生产数据，包括窝产仔数、窝产活仔数、窝产死胎数、窝产木乃伊胎数、窝产弱仔数、初生重、返情率等。

1.2.7 数据处理 采用 EXCEL及SPSS 13.0软件进行数据统计分析处理。

2 结果

2.1 仔猪PCV－2母源抗体消长情况

试验母猪产前1周PCV－2抗体水平分别为0.635、1.837、2.090、1.528。4个组新生仔猪在哺乳前几乎检测不到PCV－2母源抗体，吮初乳后则逐渐上升，其中 A1－5、B1－5和 D1－5在10日龄时母源抗体水平最高，分别与母猪产前1周抗体水平相当，而C1－5的母源抗体至20日龄达到最高值。之后母源抗体水平均随日龄的增加而逐渐降低，B1－5和C1－5则在40日龄时出现缓慢上升再下降的现象。统计分析显示A1－5在10、20、40日龄时，平均抗体水平显著低于其余各组（P＜0.05），且在50日龄时，平均抗体水平降至临界值（0.168）以下，其余3组在各检测日龄段PCV－2平均抗体水平均高于临界值（表1）。

2.2 仔猪血清PCV－2核酸检测结果

试验母猪所产仔猪在哺乳前、10、20、30、40、50、60日龄时采集的血清中均未检测出PCV－2核酸。

表1 不同日龄仔猪PCV－2母源抗体消长变化情况Table1 The PCV－2 maternal antibody dynamics in diferent ages of piglets

2.3 试验母猪PCV－2疫苗免疫接种前后的繁殖性能比

对试验母猪PCV－2疫苗免疫接种后与免疫接种前的繁殖性能进行比较，发现其窝产仔数和窝产活仔数分别增加了0.36头和0.43头，差异极显著（P＜0.01）；仔猪初生重增加0.01 kg，差异显著（P＜0.05）；窝产弱仔数减少0.11头，差异显著（P＜0.05）；但对窝产死胎数和窝产木乃伊胎数没有明显影响（表2）。

表2 试验母猪PCV－2疫苗免疫接种前后的繁殖性能比较Table2 Reproduction performance comparision of test sows both before and after inoculation

3 讨论

由PCV－2引起的母猪繁殖障碍等相关疾病给各国养猪业的发展造成了严重威胁，是继猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）之后又一影响猪繁殖性能的重要疫病［7］。国外大量田间试验表明，PCV－2在母猪繁殖失败中发挥着决定性作用，母猪免疫接种PCV－2疫苗对猪场恢复收益率有着重要经济意义［8］。德国277个猪场接种PCV－2疫苗后生产收益显著提高，其窝产仔数提高0.5头，窝产活仔数提高0.5头，窝产死胎数降低0.1头；丹麦一个SPF母猪繁育场免疫接种PCV－2疫苗后窝产仔数提高了0.7头，窝产活仔数提高了1.2头［2］。本试验中，母猪PCV－2疫苗免疫接种后与免疫接种前相比较，平均窝产仔数和窝产活仔数分别增加了0.36头和0.43头，窝产死胎数降低0.04头，虽与国外报道的数据相比有一些差距，这可能与猪场的管理水平、生产设备等因素相关，但母猪免疫接种PCV－2疫苗后能提高其生产性能是显而易见的。

猪的胎盘属上皮绒毛膜类型，母源抗体不能经胎盘从母体传递给胎儿，而是通过吮吸初乳的方式获得母源抗体［9－10］。仔猪获得被动免疫保护的时间有限，在疫病流行地区，如将母源抗体水平很低或无母源抗体的仔猪长期暴露，风险很大。因此仔猪免疫接种PCV－2疫苗十分必要，能使其主动产生免疫保护力，对后期PCV－2的感染具有高度的抵抗力。最佳首免日龄应在母源抗体能保证仔猪抵御病毒感染，且母源抗体能发挥最大保护作用的时候［11］。本试验中仔猪哺乳前母源抗体几乎为零，其中3组试验仔猪吮初乳后10日龄时具有较高的抗体水平，至30日龄时迅速下降，随着日龄的增加而逐渐降低。因此可以确定PCV－2疫苗免疫接种母猪所产仔猪首免为20日龄左右。

哺乳仔猪较高的母源抗体水平能够降低血清中PCV－2病毒血症的出现，从而抑制PCV－2在机体内的复制，保护仔猪在早期免受PCV－2感染，并且能减少仔猪粪便、血清和免疫器官中的病毒数量［12－13］。四组试验仔猪血清中均未检测到PCV－2核酸，与李郁等［14］对该猪场PCV－2感染情况的研究结果相比，母猪接种PCV－2疫苗后，使该病毒对仔猪的感染下降，但并不代表该场整个仔猪群都得到了完全保护。国外研究证实仔猪早期初乳摄入量少是引起断奶仔猪综合征的一个主要因素［15］。因此在生产实践中，科学地做好母猪PCV－2疫苗免疫接种，保证新生仔猪及时足量吃好初乳是保证仔猪群具有良好免疫力的重要措施。

综上所述，母猪产前免疫接种PCV－2疫苗不仅能有效预防由PCV－2感染造成的母猪繁殖障碍，提高母猪繁殖性能，而且可以通过母源抗体的传递来预防仔猪发生早期感染。

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