ERCC1和EGFR表达与NSCLC生物学特征的关系

张晶晶，吕喜英

(1.承德医学院，河北承德 067000;2.承德医学院附属医院肿瘤放化疗科)

肺癌居恶性肿瘤首位，发病率和死亡率均呈上升趋势，占癌症死亡率之首，其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占85%。NSCLC治疗方法主要包括手术、放化疗、分子靶向治疗等，目前以铂类为基础联合第三代新药(异长春新碱、紫杉醇、吉西他滨、培美曲塞等)的化疗方案是NSCLC的标准一线方案，但有效率仅为25%-35%，总生存率仅提高约4.1%[1]。近年来多项研究证实，切除修复交叉互补基因1(ERCC1)与顺铂(DDP)耐药有关，而对于耐DDP的NSCLC患者通过检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态可选择性给予表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)分子靶向治疗，从而提高疗效和改善生存率。本研究采用免疫组化法检测97例NSCLC患者癌组织ERCC1和EGFR蛋白的表达情况，并探讨二者与NSCLC生物学特征的关系，以期为指导NSCLC患者选择化疗方案提供依据，从而提高疗效、降低化疗毒副反应、改善预后。

1 材料与方法

1.1 研究对象 承德医学院附属医院胸外科2008年6月-2010年12月住院接受手术的97例NSCLC患者。男性72例、女性25例，年龄38-80岁，中位年龄58岁。癌组织:97例NSCLC患者肿瘤组织蜡块，癌旁组织:NSCLC患者病理蜡块中随机选取30例癌旁组织蜡块。

1.2 实验方法 MaxVision法免疫组化染色。片厚5μm、抗原修复，以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知的阳性切片作为阳性对照，滴加小鼠抗人ERCC1、EGFR一抗(1:50、1:100)、二抗、DAB显色、苏木素复染、封片。ERCC1和EGFR检测试剂盒和MaxVision试剂盒均购于福州迈新生物技术开发有限公司，操作步骤严格按照说明书进行。

1.3 结果判定 每张切片随机观察5个高倍视野(×400)，每个视野计数100个肿瘤细胞。①按显色强度分为4级:阴性(不着色)、弱阳性(淡黄色)、阳性(棕黄色)、强阳性(棕褐色)，分别记为0-3分;②阳性肿瘤细胞百分比:0%=0，1%-9%=0.1，10%-49%=0.5， ＞50%=1.0。 判定标准:以强度评分与阳性细胞百分比的积(半定量H值)作为蛋白表达的相对强度，以中位H值的大小判断结果，中位H值≥1.5为阳性，＜1.5为阴性。

1.4 统计方法 采用SPSS 17.0统计软件，应用卡方检验及确切概率法进行统计分析，应用卡方分割分析组间差别。

2 结果

2.1 ERCC1 ERCC1阳性产物主要位于肿瘤细胞核，呈棕褐色(图1)。97例NSCLC中ERCC1阳性率为29.9%(29/97)，30例癌旁组织ERCC1均为阴性表达，NSCLC中ERCC1的阳性率明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P＜0.05)。NSCLC中ERCC1的表达与性别、吸烟指数、分化程度、临床分期及病理分型无关(P＞0.05)，与年龄有关(P＜0.05)。见附表。

2.2 EGFR EGFR阳性染色定位于肿瘤细胞膜和胞浆(图2)。97例NSCLC中EGFR阳性率为22.7%(22/97)，癌旁组织EGFR阳性率为3.3%(1/30)，NSCLC中EGFR的阳性率明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P＜0.05)。NSCLC中EGFR的表达与年龄、吸烟指数、分化程度及临床分期无关(P＞0.05)，与性别和病理分型有关(P＜0.05)。NSCLC中，女性肺腺癌EGFR阳性表达7例、阴性表达者11例，男性肺腺癌阳性表达4例、阴性表达者7例，男、女性腺癌EGFR的阳性表达率比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

附表 NSCLC中ERCC1和EGFR表达与NSCLC临床生物学特征的关系(n/%)

图1 ERCC1强阳性表达

图2 EGFR强阳性表达

3 讨论

ERCC1是人类首个克隆获得的DNA损伤修复基因，在核苷酸切除修复系统(NER)中起限速或调节作用[1-2]。顺铂药物的毒性源于与DNA的结合，从而影响DNA修复、细胞周期阻滞及细胞凋亡等过程，ERCC1过表达通过NER途径可使停滞在G2/M期损伤的DNA迅速修复，导致肿瘤细胞对铂类耐药。研究表明[3]，ERCC1对NSCLC患者术后生存具有双重效应，ERCC1高表达在减少术后肿瘤复发危险的同时可导致对DDP耐药。I期NSCLC患者术后ERCC1高表达多发挥保护作用;Ⅱ-Ⅲ期以铂类耐药或抵抗为主，而中晚期NSCLC一线治疗方案多为以铂类为主的两药联合治疗。有文献报道[4]，ERCC1阴性者更能从含铂类方案的辅助化疗中获益，为临床医师选择化疗方案提供了依据，如果ERCC1表达高，将导致对铂类耐药，应尽量避免使用此类化疗方案。因此，对于NSCLC患者需常规检测耐药基因尤其是ERCC1。

近年来，针对于NSCLC患者EGFR基因表达的分子靶向治疗药物EGFR-TKI(吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼)显示了空前的优越性，对于EGFR突变阳性患者可给予EGFR-TKI一线治疗。EGFR在30%-40%的NSCLC中过表达，尤其是非吸烟女性肺腺癌患者。对于未检测EGFR突变状态的群体，亚裔非吸烟女性肺腺癌患者是EGFR-TKI治疗的优势人群;对于EGFR突变的高选择群体，有研究显示，一线接受TKI治疗的有效率为70.6%-74.5%，中位生存期为10.6-14.0个月[5-8]。本研究的结果仅显示EGFR在女性、腺癌(基本符合优势人群[9])患者中呈高表达，而男、女性腺癌患者EGFR的阳性表达率比较差异无统计学意义，原因可能为样本量较少，不能准确反映真实情况，期待后期多中心、大样本前瞻性研究进一步补充说明。

对于中晚期NSCLC ERCC1高表达的患者，若应用含铂二联方案化疗，不但限制临床疗效，而且化疗药物的毒副作用降低患者机体抵抗力、降低生活质量，从而影响预后。因此，选择个体化化疗方案是肺癌临床治疗的必然趋势，而分子靶向治疗是个体化治疗最主要的形式之一。对晚期肺腺癌患者进行EGFR突变的分子检测，这是基于包括IPASS、OPTIMAL等多项临床试验的高级别证据(EGFR突变筛选出的肺腺癌患者一线接受EGFR-TKI治疗，有效率＞70%，而未经EGFR突变筛选者的总体治疗有效率仅为30%)。因此，术后病理组织常规检测ERCC1、EGFR基因及蛋白突变状态，有助于指导肺癌患者的个体化治疗。

综上所述，ERCC1和EGFR可影响甚至决定化疗药物及方案的选择，在一定程度上实现个体化治疗，从而提高化疗疗效、改善预后。

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