HPLC法测定牛蒡子中绿原酸的含量

赵 英周 凯张 静浦中滨

(1.内蒙古人民医院，内蒙古呼和浩特010020;2.内蒙古食品药品检验所，内蒙古呼和浩特010010;3.内蒙古医科大学，内蒙古呼和浩特010010)

HPLC法测定牛蒡子中绿原酸的含量

赵 英1周 凯2*张 静3浦中滨3

(1.内蒙古人民医院，内蒙古呼和浩特010020;2.内蒙古食品药品检验所，内蒙古呼和浩特010010;3.内蒙古医科大学，内蒙古呼和浩特010010)

目的:建立高效液相色谱法测定牛蒡子中绿原酸的含量，为绿原酸的药用植物资源开发提供依据。方法:依利特C18色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸(10∶90)，流速:1.0 mL·min-1;检测波长:327nm;柱温:30℃。结果表明:绿原酸在2.82μg·mL-1～56.40μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系r=0.9999。平均回收率为100.2%，RSD=0.325%(n=6)。结论:该方法简便、准确、灵敏度高、重现性好，为牛蒡子的内在质量控制提供实验依据。

牛蒡子;绿原酸;高效液相色谱法;含量测定

牛蒡子为菊科植物牛蒡Arctium Lappa L.的干燥成熟的果实。主产于东北及浙江省，此外四川、湖北、河北、河南、陕西等省亦产。秋季果实成熟时采收果序，晒干，打下果实，除去杂质，再晒干。生用或炒用，用时捣碎，为常用中药。药性辛﹑苦，寒。归肺﹑胃经。具有疏散风热，宣肺祛痰，利咽透疹，解毒消肿等功效。主要治疗风热感冒，温病初起;麻疹不透，风疹瘙痒;痈肿疮毒，丹毒，痄腮，喉痹［1-2］。牛蒡子煎剂对肺炎双球菌有显著抗菌作用。水浸剂对多种致病性皮肤真菌有不同程度的抑制作用。牛蒡子有解热﹑利尿﹑降低血糖抗肿瘤作用［3］。据有关文献报道，牛蒡子中会有牛蒡苷，有机酸(绿原酸，咖啡酸等)及黄酮类［4］。绿原酸为本品清热解毒，抗菌消炎的主要活性成分。故本实验以高效液相色谱法对绿原酸进行了分析研究，为牛蒡子的质量控制提供实验依据。

1 仪器与药品

仪器:日本LC-10AVP高效液相色谱仪;检测器:紫外可见检测器;工作站:Shimadzu CLASS-VP色谱工作站。

试剂与试药:绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号:110753—200413(供含量测定用);乙腈为色谱纯;水为超纯水;其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:依利特C18色谱柱(5μm，4.6mm×250mm);流动相:乙腈-0.4%磷酸(10∶90);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:327nm;柱温:30℃。在此色谱条件下，分离度好，对照品及样品色谱图见图1、2。

图1对照品色谱图

图2供试品色谱图

2.2 对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照品1.88mg，置于棕色容量瓶中，加适量流动相溶解制成每1mL含绿原酸188μg的溶液。即得。

2.3 供试品溶液的制备:取牛蒡子药材粉末(过60目筛)约0.5g，精密称取，置具塞锥形瓶中，精密加入50%的甲醇50mL，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

测定方法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.4 线性关系考察:精密称取绿原酸标准品1.88mg，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度。精密吸取0.15mL、0.9mL、1.2mL、1.5mL、2.3mL、3mL置10mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，分别吸取20μL进样，按上色谱条件测定。结果峰面积Y与浓度之间呈良好的线性关系，回归方程:Y=63723X+11305，r=0.9999﹙Y为峰面积积分值，X为浓度μg·mL-1).结果见表1。结果表明，绿原酸在2.82～56.40μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。

表1标准曲线测定结果

2.5 精密度测定:取牛蒡子粉末约0.5g，精密称定，按供试品制备方法操作制备供试品溶液，连续进样6次，测得绿原酸峰面积。结果见表2，结果表明仪器精密度良好。

表2精密度试验结果

2.6 稳定性试验:取牛蒡子样品，按样品制备项下方法制备供试品溶液，分别于0，1，2，4，6及8h进样，记录峰面积积分值并计算含量，供试品在8小时内稳定。结果如下:

表3稳定性实验结果

2.7 重复性试验:取同一批次牛蒡子粉末6份，精密称定，每份取样量约为0.5g。分别按样品制备方法制备并测定每份的含量。结果见表，表明该方法线性良好。

表4重复性试验结果

2.8 回收率试验:取已知含量的牛蒡子粉末6份(绿原酸含量为0.305%)。每份加入绿原酸对照品0.7625mg。按照样品制备方法操作测定每份样品的含量，计算回收率。结果见表5。

表5回收试验结果

2.9 样品的测定:取不同产地及不同批次3批次牛蒡子样品，按供试品溶液制备及测定方法处理并测定以上实验证明:不同产地的牛蒡子，绿原酸含量在0.29%～0.31%之间。

表63批样品含量测定结果

3 讨论

3.1 牛蒡子为常用中药，2010版中国药典规定了本品中牛蒡苷的含量，但有关绿原酸在本品中的分析研究目前尚未有报道。本实验研究证明:牛蒡子中含有较高的绿原酸，本实验研究结果对牛蒡子的质量控制及开发利用提供了依据。

3.2 绿原酸对照品不稳定，配制应后置棕色瓶中避光放置或临用时配置。

3.3 实验参照文献及《药典》有关品种中绿原酸的提取方法［5］，比较了超声提取和加热回流提取两种方法，结果表明，加热回流提取效果优于超声提取故选择加热回流提取方法。加热回流30min即可达到提取完全。故选择加热回流提取方法，提取30min。

3.4 实验根据文献及中国药典2010年版中有关绿原酸的测定波长均为327nm，经在200～700nm波长范围内进行光谱扫描证明对照品及供试品均在327nm处有最大吸收。故选择327nm为检测波长，既可保证样品测定，又可排除其它组分的干扰。

［1］Tsutomu W.Masabiro Y，Shigeo O.New sulfur-containing acetylenic compounds from Arctium lappa［J］.Agric Biol Chem，1986，50(2):263-269

［2］Tsutomu W.Hideroshi K.Yoshitomi I.Structures of Lappaphen-a and Lappaphen-b，new guaianolides linked with a sulfur containing acetylenic compound from Arctium lappa L［J］.Agric Biol Chem，1987，51(6):1475-1480

［3］高雪敏，中药学［M］.北京:中国中医药出版社，2002:76-77

［4］王海燕，杨峻山.牛蒡子化学成分的研究〔J〕.药学学报，1993，28(2)∶911

［5］国家药典委员编.(中华人民共和国药典)［S］.2010版一部，2010:329

2012年8月7日收稿

HPLC determination of Great Burdock Achene in the content of Chlorogenic Acid

Zhaoying1Zhoukao2Zhangjing3Puzhongbin3
(1.Inner Mongolia People’s Hospital Hohhot010020;2.Inner Mongolia Institute for Food and Drug Control;3.Inner Mongolia Medical University)

Objective:To determine the content of Chlorogenic Acid in Great Burdock Achene by HPLC for developing the medicinal resources of Chlorogenic Acid.Methods:An external standard method by HPLC with Discovery YILITE C18column(250 mm×4.6 mm，25 μm)was employed.The mobile phase was consisted of acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution(10︰90)，at the flow rate of 1.0mL·min-1，the detection wavelength was 327 nm，column temperature was 30℃.Results:It showed good linearity in the range of 2.82～56.4μg·mL-1(r=0.9999).The content of Chlorogenic Acid in Great Burdock Achene was 0.343%，and the average recovery rate of Chlorogenic Acid was 100.2%，RSD=0.325%(n=6).Conclusion:The method is simple，accurate，sensitive and reproducible.Internal quality control of the Great Burdock Achene is provided as experimental evidence.

Great Burdock Achene;Chlorogenic Acid;HPLC;Content determination

R291.2

A文献标志码:1006-6810(2012)09-0044-03

周凯(1953-)，男，汉族，主任药师，主要从事中蒙药药品检验与分析研究等。联系电话:18647101153，邮箱:zhoukai1800@yahoo.com.cn