HPLC法测定其格日木汤中栀子苷的含量

2012-09-18王晓娟

中国民族医药杂志 2012年9期

关键词：液相色谱仪量瓶栀子

王晓娟

(锡盟药检所，内蒙古锡林浩特026000)

HPLC法测定其格日木汤中栀子苷的含量

王晓娟

(锡盟药检所，内蒙古锡林浩特026000)

目的:HPLC法测定其格日木汤中栀子苷的含量。方法:以C12柱(250mm×4.5mm，5μm)，乙腈-水-甲醇(12:88:1)为流动相，检测波长为238nm，流速为1mL·min-1，柱温为40。C。结果:线形范围0.1993～1.1960μg(r=0.9993)，平均含量为2.6234 mg·g-1，RSD为1.1%。结论:本法可作为其格日木汤中栀子苷含量测定的一种准确、灵敏、可行的方法。

其格日木汤;蒙药;栀子苷;HPLC法;含量测定

蒙成药其格日木汤由五灵脂、红花、栀子、川木通、瞿麦、诃子、川楝子、丹参、苦地丁、黄连、五味子、猪胆粉、甘草等13味药组成，主要用于肝热，肝久热，肝血昔日相江，肝胆“粘”热等。处方中栀子为主药成分，栀子苷可作其格日木汤中含量指标。本文采用HPLC方法对栀子苷进行测定。

1 仪器、材料与试剂

岛津SIL-20A高效液相色谱仪。栀子苷对照品由中国药品生物制品检定所提供;其格日木汤由东乌旗蒙医院提供，其格日木汤模拟样品自制。乙睛、甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 含量测定

2.1 色谱条件:色谱柱天河C18(250mm×4.5mm，5μm);乙腈-水-甲醇(12:88:1)为流动相，检测波长为238nm，流速为1mL·min-1，柱温为40。C。

2.2 提取时间考察与样品制备:参照《中国药典》2005年版一部“三子散”项下栀子苷含量测定的方法，选用甲醇作为提取溶剂精密称取0.3g，至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)50min，放冷，称定重量，甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，制得供试品溶液，进行测定。

实验中考察了超声提取10、20、30、40、50、60和70min不同超声提取时间对提取效率的影响，结果见表1。

表1提取效率的考察表

从表中数据可见，超声处理50、60和70min栀子苷的含量基本一致，故超声提取时间定为50min。

2.3 专属性:栀子苷对照品的HPLC图的测定:精密称取栀子苷对照品14.94mg，置50mL量瓶中，加甲醇(色谱纯)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL于50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液，精密量取10μL注入液相色谱仪测定。

其格日木汤HPLC图的测定:取本品，研细，称取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇(分析纯)25mL，密塞，称定重量，超声处理50min，放冷，再称定重量，用甲醇(分析纯)补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μL注入液相色谱仪测定。

阴性对照液的HPLC图的测定:按处方配比取处方中除主药外的12味药混匀，制成模拟阴性对照。取上述模拟阴性对照约0.3g，精密称定，制成阴性对照液，同法测定。

测定结果:阴性对照色谱图在与栀子苷对照品以及供试品色谱相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明处方中其它组分对栀子苷的测定无干扰。

2.4 线性关系考察:取栀子苷对照品15mg，精密称取为14.95mg，置150mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取0.5、1、2、3、4、5、6mL，分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各取20μL进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对浓度进行回归分析，结果栀子苷在0.1993～1.1960μg范围内呈良好的线性关系。

回归方程为:Y=1379109.7X+1331.10，R2=0.9993

表2栀子苷的标准曲线数值表

2.5 稳定性试验:取同一份供试品溶液(批号:20090604)，分别在0、2、4、8、12、24(h)进行测定，结果见表3。

表3不同时间测定样品中栀子苷的峰面积积分值

从表中数据可见，栀子苷在24h内的峰面积积分值基本稳定不变。

2.6 精密度:取同一批号供试品(批号:20090604)6份，研细，精密称取0.3g，按2.2项下的方法制得供试品溶液;另精密称取栀子苷对照品14.94mg依法制成每1mL含栀子苷29.88μg的溶液作为对照品溶液。分别精密吸取上述溶液各10ul注入色谱仪测定每份供试品含量。按外标法计算含量。平均含量(2.6234mg·g-1)，RSD为1.1。

2.7 回收试验:栀子苷对照品溶液的制备:精密称取栀子苷对照品14.94mg，置50m量瓶中，加甲醇制成每1ml含栀子苷0.2988mg的溶液，再分别精密吸取5mL、10mL、15mL分别至200mL量瓶中制成7.47、14.94和22.41μg·mL-1栀子苷对照品溶液。

加样回收试验:取供试品(批号:20090604含量2.6234mg·g-1)9份，各约0.15mg，精密称定，分别置9个具塞锥形瓶中，在1～3、4～6、7～9号分别精密加入浓度为0.00747、0.01494、0.02241 mg·mL-1的栀子苷对照品甲醇溶液25mL，按2.2项下的方法制得供试品溶液，分别精密吸取上述溶液各10uL注入液相色谱仪进行测定。平均回收率分别为101.1、101.9、98.8，RSD为1.0、0.8、1.0。