乙型肝炎患者血清标志物、HBV-DNA及肝功能指标的联合分析

蒋淑娟 武利娟 刘艳丽

（1 郑州市第一人民医院，河南 郑州 450004；2 郑州市第七人民医院，河南 郑州450006；3 郑州大学第三附属医院，河南 郑州450001）

乙型肝炎病毒（HBV）是引起急慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌的重要致病因素[1]，乙型肝炎已成为严重威胁到人类健康的全球性问题。据报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染者，我国HBv的携带者约1.2亿[2]，是乙型肝炎高感染的国家。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取在我院门诊和住院的患者，共342位进行标本检测，诊断符合2005年由中华医学会肝病学分会和中华医学会感染病学分会联合制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中的病毒性肝炎诊断标准。采用时间分辨荧光免疫分析法检测HBsAg阳性、HBeAg阳性及HBcAb阳性且荧光定量PCR法检测HBv-DNA阳性（＞104拷贝/mL）的病例70例，HBsAg阳性、HBeAg阴性、HBeAb阳性、HBcAb阳性且荧光定量PCR法检测HBv-DNA阳性（＞103拷贝/mL）和阴性（＜103拷贝/mL）的病例各10例，排除甲、丙、丁、戊肝炎或重叠感染的患者。

1.2 标本的采集及处理

要求检测对象在空腹的状态下，用一次性真空采血管抽取静脉血，静置凝固后以2000rpm 5min分离血清，分装0.5mL离心管置冰箱-20℃保存备用。

1.3 检测方法

HBV血清标志物：采用时间分辨荧光免疫分析法（fluorescenee quantitative PCR，TRFIA），时间分辨荧光分析仪Anytest2000及配套试剂由上海新波生物技术有限公司提供，HBsAg值＞0.5ng/mL为阳性，HBeAg＞0.03Ncu/mL为阳性。HBV-DNA的定量检测：采用荧光定量PCR（fluorescenee quantitative PCR，FQ-PCR），荧光定量PCR仪Applied Biosystems 7300（美国），试剂由广州中山医科大学达安基因技术有限公司提供。血清ALT：由美国雅倍AerosetTM全自动生化分析仪检测，试剂由上海荣盛公司提供。

1.4 统计学处理

采用SPSS 16.0软件对数据进行χ2检验

2 结 果

在HBV血清学标志物阳性的各种模式中，均有不同程度的病毒DNA复制。本组的342例血清标本中，HBV-DNA阳性的为188例，阳性率为58.02%。1，3，5模式（大三阳）和1，3模式中HBV-DNA阳性率分别为87.5%和85.7%，阳性率比较高。1，4，5模式（小三阳）中HBV-DNA的阳性率为60.5%。血清ALT异常有64例。乙型肝炎大三阳HBV-DNA的阳性率明显高于小三阳的阳性率，差异有统计学意义（χ2=14.35，P＜0.05）。乙型肝炎大三阳ALT异常率明显高于小三阳，差异有统计学意义（χ2=36.21，P＜0.01）。见表1。

表1 不同HBV-M阳性模式中HBV-DNA及ALT检测结果

3 讨 论

本实验采用TRFIA和FQ-PCR技术对血清的HBV不同血清标志及HBV-DNA检测，结果显示在299例HBsAg（+）血清中，HBV-DNA（+）181例，占60.5%；HBeAg（+）63例中，HBV-DNA（+）55例，阳性率为87.3%，说明用FQ-PCR技术检测，绝大多数HBsAg（+）或HBeAg（+）血清中均有HBV-DNA存在。部分HBsAg（+）和HBeAg（+）血清中显示HBV-DNA（-），可能是HBV-DNA整合于宿主细胞基因或基因变异，血清中游离的HBV-DNA很少[3]，或者是由于HBVDNA的消失比HBeAg的消失早以及病毒发生变异有关[4]，乙型肝炎大三阳ALT异常率明显高于小三阳，与以往观点相符。

本研究采用的是荧光定量PCR，它可以快速、准确地检测标本中的HBV-DNA，并能够真实地反映出HBV感染和复制的状态，这对于乙型肝炎的诊断、疗效观察以及预后都具有十分重要的指导意义[5]。TRFIA是近年来发展起来的一种新的免疫测定方法，TRFIA提高了乙型肝炎病毒的检出率，能够动态观察疗效和对病情进行监测，可以给医师对病情疗效作出合理的解释提供依据和参考。

综上所述，随着新的乙型肝炎病毒亚型以及基因突变不断出现，综合多方面的结果，方可更准确、更全面地判断急慢性乙型肝炎的预后，对临床的乙型肝炎诊断、指导用药和治疗监测等方面均具有重要价值。

[1] Qian WP,Tan YQ,Chen Y.Rapid quantification of semen hepatitis B virus DNA by real-time poly merase chain reaction [J].World J Gastroenterol,2005,11(34)：5385-5289.

[2] Shi M,Zhang Y,Zhu YH,et al.Comparision of real-time with the COBAS test for quantitation of hepatitis B virus DNA in serum samples[J].World J Gastroenterol,2008,14(3)：479-483.

[3] 骆抗克.HBsAg阳性的HBV感染.乙型肝炎基础与临床[M].北京：人民卫生出版社,1997：246-259.

[4] 高桂风,谭文秀,杜志勋,等.PCR检测HBVDNA与其血清标志物关系及其临床意义[J].包头医学,1999,23(1)：3-4.

[5] 沈宏伟,范敏明,吴育连,等.荧光定量PCR和ELISA检测外科病人HBV标志物结果的比较[J].临床检验杂志,2002,20(5)：307.