头孢替坦二钠的体外抗菌活性研究

杨信怡 胡辛欣 娄人慧 刘京芳 李聪然 张伟新 宋坤改 母立新 陈慧贞 游雪甫*

（中国医学科学院 北京协和医学院 医药生物技术研究所，北京 100050）

头孢替坦，别名双硫唑甲氧头孢菌素，为半合成头霉素类衍生物，药用形式为二钠盐，属注射用二代头孢菌素。头孢替坦二钠最早由日本山之内制药株式会社开发，20世纪80年代在日本上市，后授权瑞典阿斯利康在日本以外的国家上市，国际上注册的商品名有Cefotan和Apatef等[1]。2007年，美国Abraxis制药公司的头孢替坦二钠注射液（仿制药）获FDA批准在美上市。目前，该品种在最新的日本药局方16版和美国药典34版中均有收录，因在我国尚未上市，中国药典无收录。头孢替坦二钠分子量为619.59（C17H15N7Na2O8S4），血浆蛋白结合率高，半衰期长，抗菌谱广，对革兰阴性菌和厌氧菌抗菌活性强，对革兰阳性菌作用较弱，对质粒或染色体介导的β-内酰胺酶十分稳定[2]。随着该品种专利到期，部分国内制药企业开始仿制并进入临床前评价阶段。本研究以2008～2009年从北京地区各医院分离的20种共663株临床常见病原菌为对象，以四种头孢菌素为对照药，对一种国产头孢替坦二钠的体外抗菌活性进行评价。

1 材料与方法

1.1 药物及配制

头孢替坦二钠，批号YJ090701，重庆市庆余堂制药有限公司生产。对照药包括：头孢美唑钠（二代头孢），批号JPA0401，日本第一三共普乐发株式会社生产；头孢唑啉钠（一代头孢），批号K0905556，华北制药股份有限公司生产；头孢哌酮钠（三代头孢），批号0909062，丽珠集团丽珠制药厂生产；盐酸头孢吡肟（四代头孢），批号09050211，悦康药业集团有限公司生产。药物配制时按各自实际活性药物计算。

1.2 培养基和试剂

CAMH肉汤、脑心浸液培养基均为美国BD公司产品。MH琼脂、营养肉汤、中国蓝琼脂培养基均购自中国药品生物制品检定所。

1.3 细菌

受试菌株主要为实验室保存典型菌株及2008-2009年从北京地区医院收集的20种共663株临床分离菌（其中产β-内酰胺酶菌株535株），革兰阳性菌有：金黄色葡萄球菌37株（34株产酶，MSSA 21株、MRSA 16株）、表皮葡萄球菌35株（8株产酶，MSSE 18株、MRSE 17株）、化脓链球菌18株（均不产酶）、肺炎链球菌19株（均不产酶，耐青霉素肺炎链球菌PRSP 8株）、粪肠球菌18株（1株产酶）和屎肠球菌19株（均不产酶）。革兰阴性菌有：大肠埃希菌55株（均产酶，产ESBLs大肠埃希菌26株）、肺炎克雷伯杆菌56株（均产酶，产ESBLs肺炎克雷伯杆菌26株）、铜绿假单胞菌37株（均产酶）、鲍曼不动杆菌37株（均产酶）、奇异变形杆菌37株（22株产酶）、普通变形杆菌37株（36株产酶）、阴沟肠杆菌37株（均产酶）、产气肠杆菌37株（均产酶）、聚团肠杆菌17株（16株产酶）、弗劳地枸橼酸杆菌37株（均产酶）、异型枸橼酸杆菌37株（36株产酶）、雷极普鲁菲登杆菌19株（均产酶）、摩根摩根氏菌37株（33株产酶）和粘质沙雷氏菌37株（均产酶）。细菌β-内酰胺酶采用硝噻吩纸片鉴定，细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）鉴定按照CLSI推荐方法进行。

质控菌选用金黄色葡萄球菌ATCC29213、肺炎链球菌ATCC49619、粪肠球菌ATCC29212、大肠埃希菌ATCC25922、ATCC35218（产β-内酰胺酶）、肺炎克雷伯杆菌ATCC700603（产ESBLs）、铜绿假单胞菌ATCC27853。质控菌MIC均在CLSI参考范围内。

1.4 仪器

多点接种器为英国Denley公司产品；自动分装器为美国Oxford公司产品；二氧化碳培养箱为美国Forma公司产品；超低温冰箱为日本Sanyo公司产品；IKA MS2型液体涡漩混合器为广州仪科实验室技术公司产品。

1.5 最低抑菌浓度（MIC）测定

参照CLSI推荐方法，采用平皿二倍稀释法和多点接种器进行MIC测定[3]。药物用CAMH肉汤二倍稀释成各种所需浓度，分别加适量到平皿中，MH琼脂培养基溶化后定量注入含药液的平皿内混匀，药物的终浓度分别为0.03，0.06，0.125，0.25…128 μg/mL，肺炎链球菌、化脓链球菌的培养基中含5%脱纤维羊血。受试菌用营养肉汤或脑心浸液隔夜增菌，试验时，菌液适当稀释，多点接种器接种试验菌（接种量为104 CFU/点）于含药琼脂表面，干燥后置35℃恒温培养18～24h后观察结果，无菌落生长的平皿中所含药物的最小浓度即为MIC。

表1 头孢替坦二钠及其对照药对663株临床分离菌的MIC测定(μg/mL)

续表1

2 结 果

试验结果表明，头孢替坦二钠为广谱抗菌活性，对663株临床分离菌具有不同程度的抗菌作用，对517株革兰阴性菌普遍具有较强的抗菌作用，对146株革兰阳性菌的抗菌活性较弱。对耐甲氧西林葡萄球菌抗菌活性弱，而对产ESBLs的大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌抗菌作用较强，结果见表1～表3。

头孢替坦二钠对37株金黄色葡萄球菌的抗菌活性较弱，MIC50、MIC90值分别为8μg/mL、＞128μg/mL，抗菌活性弱于四种对照药。头孢替坦二钠对21株MSSA有一定抗菌作用，MIC50、MIC90值均为8μg/mL，弱于四种对照药；对16株MRSA的抗菌作用弱，MIC50、MIC90值均＞128 μg/mL。

头孢替坦二钠对35株表皮葡萄球菌的抗菌活性较弱，MIC50、MIC90值分别为32μg/mL、64μg/mL，对18株MSSE和17株MRSE的MIC50、MIC90值分别为16μg/mL、32μg/mL和32μg/mL、128μg/mL，抗菌活性弱于四种对照药。

头孢替坦二钠对18株化脓链球菌、19株肺炎链球菌有一定抗菌作用，MIC50值均为4μg/mL，抗菌活性弱于四种对照药。头孢替坦二钠对18株粪肠球菌、19株屎肠球菌的抗菌活性弱，MIC50、MIC90值均＞128μg/mL。

头孢替坦二钠对55株大肠埃希菌、56株肺炎克雷伯杆菌的抗菌作用强，MIC50、MIC90值均为0.125μg/mL、4μg/mL，抗菌活性优于四种对照药。头孢替坦二钠对26株产ESBLs大肠埃希菌和26株产ESBLs肺炎克雷伯杆菌也有较好抗菌作用，MIC50、MIC90值分别为1.4μg/mL和0.5μg/mL、8μg/mL，抗菌活性强于四种对照药。

头孢替坦二钠对37株奇异变形杆菌的抗菌活性强，MIC50、MIC90值分别为0.06μg/mL、0.25μg/mL，抗菌活性强于盐酸头孢吡肟和头孢美唑钠，明显优于头孢唑啉钠和头孢哌酮钠；头孢替坦二钠对37株普通变形杆菌的抗菌活性较强，MIC50、MIC90值分别为0.125μg/mL、2μg/mL，抗菌活性稍弱于盐酸头孢吡肟，优或远优于另三种对照药。 头孢替坦二钠对37株阴沟肠杆菌的抗菌活性较强，MIC50、MIC90值分别为8μg/mL、128μg/mL，抗菌活性弱于头孢哌酮钠和盐酸头孢吡肟，明显优于头孢美唑钠和头孢唑啉钠。

头孢替坦二钠对17株聚团肠杆菌的抗菌活性较强，MIC50、MIC90值分别为2μg/mL、＞128μg/mL，抗菌活性与盐酸头孢吡肟相近，优于另三种对照药。

头孢替坦二钠对37株弗劳地枸橼酸杆菌的抗菌活性较强，MIC50、MIC90值分别为0.25μg/mL、128μg/mL，抗菌活性稍弱于盐酸头孢吡肟，优于另三种对照药。

头孢替坦二钠对37株异型枸橼酸杆菌的抗菌活性较强，MIC50、MIC90值分别为0.5μg/mL、128μg/mL，抗菌活性稍弱于盐酸头孢吡肟，强于另三种对照药。

头孢替坦二钠对19株雷极普鲁菲登杆菌的抗菌活较强，MIC50、MIC90值分别为2μg/mL、32μg/mL，抗菌活性优于盐酸头孢吡肟和头孢美唑钠，明显优于头孢哌酮钠和头孢唑啉钠。

表2 头孢替坦二钠及其对照药对甲氧西林敏感/耐药葡萄球菌的MIC测定(μg/mL)

头孢替坦二钠对37株摩根摩根氏菌抗菌活性较强，MIC50、MIC90值分别为2μg/mL、64μg/mL，抗菌活性和头孢哌酮钠相近，强于头孢唑啉钠和头孢美唑钠，弱于盐酸头孢吡肟。

头孢替坦二钠对37株粘质沙雷氏菌的抗菌活性较强，MIC50、MIC90值分别为1μg/mL、32μg/mL，抗菌活性稍弱于盐酸头孢吡肟，优于另三种对照药。

头孢替坦二钠对37株铜绿假单胞菌、37株鲍曼不动杆菌、37株产气肠杆菌的抗菌活性弱，MIC50、MIC90值均＞128μg/mL。

3 讨 论

与已有报道相似，MIC数据显示头孢替坦二钠对革兰阴性菌的抗菌作用较强，对革兰阳性菌的抗菌作用较弱[1]。革兰阴性菌中，头孢替坦二钠除对铜绿假单胞菌、产气肠杆菌和鲍曼不动杆菌抗菌活性较弱外，对其余受试革兰阴性菌均具有较高的抗菌活性。不同细菌的MIC分布情况，可一定程度上为该药今后的临床抗感染选择提供参考。

与对照药比较，头孢替坦二钠对多数受试革兰阴性菌的抗菌活性优于对照的一、二、三代头孢，但稍弱于四代头孢盐酸头孢吡肟，其抗革兰阴性菌的总体表现在受试的头孢菌素中颇为突出。头孢替坦二钠对革兰阳性菌的体外抗菌活性总体较弱，弱于4种对照药。对于MRSA和MRSE，因耐药机制由β-内酰胺类低亲和力的PBP2a介导，所以受试的五种头孢菌素均无明显抗菌活性[4]。

总之，本研究中，头孢替坦二钠对各种产ESBLs 革兰阴性菌的良好抗菌活性令人印象深刻，值得进一步评价其体外、体内抗菌效应，期为我国临床抗感染领域提供又一种用药选择。

[1] Ward A,Richards DM.Cefotetan.A review of its antibacterial activity,pharmacokinetic properties and therapeutic use[J].Drugs.1985,30 (5)：382-426.

[2] Sirot D.Extended-spectrum plasmid-mediated beta-lactamases[J].J Antimicrob Chemother,1995,36 (Suppl A)：19-34.

[3] CLSI.Methodsfor Dilution Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria That Grow Aerobically： Approved Standard M7-A7.Wayne,Pennsylvania 19087-1898 USA[R].2007.

[4] Truesdell SE,Zurenko GE,Laborde AL.Interaction of cephalosporins with penicillin-binding proteins of methicillin-resistant Staphylococcus aureus[J].J Antimicrob Chemother,1989,23 (Suppl D)：13-19.