全自动生化分析仪实验参数解析

张晓珍姜军 张娣

(1.沈阳军区兴城疗养院温泉疗养区，125100；2.辽宁省兴城胃肠专科医院检验科，125100)

全自动生化分析仪实验参数解析

张晓珍1姜军1张娣2

(1.沈阳军区兴城疗养院温泉疗养区，125100；2.辽宁省兴城胃肠专科医院检验科，125100)

全自动生化分析仪(TAA)性能的高低、功能多少的不同，输入的实验参数也不尽相同。本文介绍了7种参数的设置方法及其意义，有利于仪器、试剂的正确使用，有助于正确分析和处理测定数据，正确设置参数是使用好仪器得出可靠结果的重要环节。

全自动生化分析仪；参数设置；质量监控；线性核查；前滞现象

1 试剂空白参数

设置试剂空白，目的是通过监测试剂空白的吸光度，检查试剂的质量。一般来说吸光度上升的反应，试剂空白吸光度越低越好。吸光度下降的反应要求试剂空白吸光度不能低于一个底线，也就是说吸光度必须要求在某一数值以上。例如，在吸光度上升的反应中，在特定波长下光径1 cm比色杯、γ-GT、ALP、AMY、LDH、CK试剂空白吸光度应≤0.6，CHO、TG、GLU的试剂空白吸光度≤0.8。有些项目在动力法测定时吸光度是下降的，即所谓负反应，例如AST、ALT、UrEa、TCO2等项目的测定，试剂空白吸光度要求≥1.0。

上面列出的吸光度数值也并非一成不变，应根据商家试剂盒说明书给出的试剂空白吸光度限值作为参数输入仪器，在仪器运行过程中如发现试剂空白值超限，则仪器会报警或拒绝计算结果，此时应查找原因或重新更换试剂。

2 校正参数

2.1 标准空白水平核查 全自动分析仪可将已知标准空白吸光度的允许波动范围作为参数进行输入，进行空白水平核查。

2.2 双份标准重复核查 将双份标准测定的吸光度和双份标准空白的吸光度取其差值(STD-SB)作为“重复界线”参数输入，如果超出了“重复界线”值，应考虑样品加量是否准确，反应温度是否达到要求，光电系统是否稳定。

2.3 K值参数核查 K值核查是对标准液吸光度的核查。在自动分析仪运算中K=STD÷Abs，仪器在测得标准物吸光度后会自动计算出K值(F值)。K值会被仪器自动储存并用于以后样品测定结果的计算。在正常情况下前后测得的K值应允许在一定范围内波动，一般仪器可设为±2.0%。即参数输入是0.02，如果超出2%则报警为“定标失败”或校正故障[1]。

3 样品体积分数参数

样品体积分数(SVF)是样品体积与反应液总体积的比值(SV/TV)。

酶活力测定中，样品在总体积中的比例应在10%以下，如在AST测定中，SVF在0.016 7～0.083 3范围内ΔA/ Δt呈线性变化。但当SVF＞0.100以后就不呈线性了。IFCC选择0.083 3，有的厂商试剂盒(Kit)选择0.090 9。

ALP的测定在IFCC研究的数据表明，SVF应在0.038 5～0.013 9范围内变动，当SVF从0.038 5(SV/TV＝1/26)下降到0.019 6(SV/TV＝1/51)时，酶活性会轻度升高，即出现轻度稀释效应。如果进一步降低SVF在0.019 6～0.013 9(1/72)之间，结果没出现稀释效应。因而一些商家的试剂盒考虑到灵敏度信噪比而选择了0.019 6为SVF。

在γ-GT测定中SVF在0.010～0.250之间没有显示出稀释效应，降低SVF有利于避免黄疸血清的干扰，并可提高线性范围。IFCC推荐的SVF是0.019 1。

在CKNAC的测定中，稀释效应十分明显，SVF微小变化会导致测定结果的明显变化。因此SV、RV必须遵照商家试剂盒给出的数值严格掌握。

SVF是由多种因素决定的，SVF不能随意改动。事实证明，SVF过高会增加血清内源性干扰、特异性下降；SVF过低则会使反应过程中产生的信号太小、信噪比增大，造成结果重复性下降。在仪器性能和方法学允许的条件下，在降低试剂消耗的同时要选择最佳的SV/TV比值。

4 波长的选择

全自动生化分析仪TAA采用的测定技术多是吸收光谱分析，分析仪配有6～8个常用干涉滤光片或更多，测定波波长原则上选择待测物在该波长的光吸收最大；其吸收峰宜较宽而钝；常见干扰物在该波长下的光吸收最小。另外，有些仪器滤光片数量受限，应该以就近选择为原则，如果仪器稳定对测定结果影响不大。在酶类测定时要用消光系数计算酶活性，受波长影响较大，所以对波长的要求相对严格，有些项目需要做双波长或多波长检测，主波长是待测物光吸收最大，副波长的作用主要是排除测定过程中的干扰因素或提高测试过程中的灵敏度。波长测定可以免除试剂空白和样品空白的设置。

5 反应时间参数

5.1 延迟时间 延迟时间指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。延迟时间的选择取决于被测物质的浓度、反应速度的快慢、酶促反应的级数、样品中干扰物所需要的时间等。如CHE活性高仅需20～30 s，LDH一级反应需30～40 s，ALT需40～60 s，AST需60～75 s，CK需90～120 s等。

5.2 监测时间 酶促反应延迟期后，在过量底物的存在下，反应速率加快并达到一个反应速率稳定的阶段，即为线性反应期，全自动生化分析仪的监测时间即为此期。测酶的连续监测法至少90～120 s或至少4个点(3个ΔA)才称其为连续监测[2]，但如果监测时间太长容易导致发生底物耗尽，如果缩短监测时间就减少了线性测定范围，可测范围变窄。所以分析反应流程，合理设置延迟时间和监测时间就显得尤为重要。

6 线性与反应限参数

6.1 线性核查 全自动生化分析仪能对反应线性进行实时监测，如果在监测时间(TRI)内发现非线性结果，TAA会报警提示，防止因样品、试剂及仪器各方面因素造成的错误结果混入正常报告中。此时操作者可调出实时反应曲线，分析非线性(NL)产生的原因，必要时可通过修改参数得到线性结果。

不同的生化分析仪线性核查所依据的数学公式并非一样，有的仪器把用最小二乘法得到的全过程曲线Abs-time分成二段，每段根据监测时间可分成3～6个点，然后分别求出前段的Δt/min和后段的Δ1/min，以及全过程的Δ/min，然后再按下式计算和判断：

一般线性误差设为±(10%～15%)，如超过规定误差即报警为非线性结果。对于非线性的计算，多数是设为±10%，最简单的公式是将监测时间TRI等分4段得4个ΔA/Δt，分别设为X1、X2、X3、X4，然后按下面的公式进行计算：

此计算公式表明，非线性标准应该是±10%。

6.2 反应限核查 在线性反应区域被确定后，将测定范围内的Abs数据与反应时间(Abs-time)作线性回归分析，从中找到Abs-time回归线，得到ΔA/min，即可进行反应限核查[3]。反应限超限，一是指超出线性测量范围；二是指在酶活性测定中“底物耗尽”。一般情况下在酶催化的反应中底物都是处在过剩状态，但日常工作中免不了会遇到超限标本。为了保证结果准确可靠，TAA都设法进行反应限核查。反应限一般在试剂盒说明书中写的是线性测量范围，有的是以ΔA/min表示，二者可通过反应限计算公式互相转换。

7 前滞现象分析及样本稀释参数

7.1 前滞现象分析 抗原性物质与对应的特异性抗体可形成抗原(Ag)-抗体(Ab)复合物，这些免疫复合物可通过比浊的方法进行测定。在比浊法中，我们常见的抗原物质很多，如：血清蛋白、补体、免疫球蛋白、急性反应蛋白、血凝蛋白及尿微量蛋白等等。在Ag-Ab结合的过程中，在Ab一定时，增加Ag的浓度可出现如下3种情况：①反应初期，反应向Ag-Ab复合物形成的方向进行，此时反应浊度增加。②继续增加Ag浓度，反应浊度不再增加，达到平衡状态(平衡区)。③再继续增加Ag浓度，将导致浊度(沉淀)溶解，浊度反而下降(吸光度也随之降低)。此称为Ag过剩区。这种现象也称为前滞现象。前滞现象是指在化学反应中，随着反应时间的延长及反应物浓度的作用，使生成物停止或不再增多，或出现逐渐减少现象[4]。反应超限即是前滞现象的表现。

7.2 样本稀释参数 全自动生化分析仪在参数设置的时候，要把样本是否稀释以及样本稀释比例作为样本稀释参数输入仪器中，一般情况下，样品与稀释液比例应为1∶10，输入稀释参数的目的是为了避免样本反应超限和前滞现象的发生。

通过上述7个方面实验参数的讨论，可以看出参数的正确设置是保证仪器分析质量的前提。全自动生化分析仪种类繁多，但其工作原理却基本相同或相似，只有掌握其工作原理，才能对不同的实验测试选择正确的参数设置，发挥全自动生化分析仪准确高效的服务品质。

[1]韩志均，李树中，田维发，等.临床化学项目自动分析法[M].沈阳：辽宁科技出版社，1991：23-56.

[2]梦献荣，丁书亚，甘来军.自动生化分析仪参数设置技巧[J].中国民族民间医药杂志，2009，18(10)：136.

[3]叶应妩，王毓三，申子瑜，等.全国临床检验操作规程[M].3版.南京：东南大学出版社，2006：59-65.

[4]丛玉隆.检验医学[M].北京：人民卫生出版社，2009：216-218.

1005-619X(2012)09-0814-02

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