大肠黏膜组织sialyl lewis X表达及生物学意义

于秀文 吴甜

大肠黏膜组织sialyl lewis X表达及生物学意义

于秀文 吴甜

目的探讨大肠肿瘤sLex(sialyl lewis X)表达及其与大肠癌临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学方法对55例大肠腺癌、15例远切端大肠黏膜及20例大肠腺瘤进行sLex检测。结果大肠腺瘤、大肠腺癌sLex阳性表达率分别为50．0%(9/18)，80．0%(44/55)(P=0．005);34例大肠腺癌、相应的癌旁正常黏膜及相应远切端正常黏膜sLex阳性表达率分别为79．4%(27/34)，41．2%(14/34)，5．88%(2/34)(P＜0．05);55例大肠腺癌sLex阳性表达与患者的性别、部位、浸润深度、淋巴结转移、Duke's分期及生存时间无关(P＞0．05)，而与分化程度有关(P=0．021)。结论sLex是检测大肠肿瘤发生及大肠癌分化程度的重要生物学标志物。

大肠腺癌sLex免疫组织化学

大肠癌是消化系统常见恶性肿瘤之一，目前对于检测大肠癌的发生、分化、浸润、转移及预后还没有一个特异性的标志物。唾液酸化的路易斯寡糖X(sialyl lewis X，简称sLex)抗原是近年来发现的一种肿瘤标志物，关于sLex与大肠癌关系的报道观点不一［1］。我们应用免疫组织化学方法检测大肠癌、癌旁正常黏膜、远切端黏膜及大肠腺瘤组织，探讨sLex在大肠肿瘤发生，大肠癌分化、浸润、转移及预后的价值，为临床诊断、治疗及预后的判断提供依据。

材料与方法

1．研究对象:随机选取黑龙江省齐齐哈尔医学院病理中心2000～2005年经手术切除的大肠癌组织标本55例(男性29例，女性26例，年龄20～75岁，平均年龄为58．89±14．72岁，发生部位:结肠20例，直肠35例;根据2004年WHO肿瘤组织学分类:高分化16例，中分化18例，低分化21例;侵及肌层以上者29例，侵及浆膜和(或)浆膜以外器官26例;有淋巴结转移者23例，无淋巴结转移者32例;Duke's分期:A期21例，B期11例，C期20例，D期3例;生存期＞5年者27例，＜5年者28例)，34例带有癌旁正常黏膜(据癌组织＜1.0cm)及远切端黏膜(据癌组织＞10cm)。另外选取18例大肠腺瘤组织作对照研究。

2．方法:采用免疫组织化学SP法(链酶卵白素－过氧化酶法)。一抗为多克隆兔抗sLex－IgA(BD，Denmark A/S)浓缩型抗体，工作浓度为1∶200;SABC试剂盒为武汉博士德生物公司产品、DAB试剂盒为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。用0．01mol/L，pH值为6．0±0．1柠檬酸缓冲液进行微波抗原修复，其余操作步骤按说明书进行。人的胃癌组织作为阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。

3．结果判定:采用综合评分法:sLex定位于细胞膜或细胞质，随机观察10个高倍视野，每个视野记数100个细胞，根据其中阳性细胞的比率和染色强度分别进行综合评定。(1)按阳性细胞的比率评分:0分为阳性细胞数占总细胞数＜5%;1分为5%～30%;2分为31%～60%;3分为＞60%。(2)按染色强度评分:0分为细胞无棕色颗粒与背景一致;1分为出现淡棕黄色颗粒;2分为出现明显的棕色或棕黄色颗粒;3分为强棕色或棕黄色颗粒。(3)总积分=阳性细胞的比率评分×染色强度评分:0分为阴性(－);1～3分为弱阳性(+);4～6分为弱阳性(++);7～9分为强阳性(+++)。

4．统计学方法:采用SPSS 13．0软件进行非参数检验，sLex表达与生存时间的关系采用Kaplan－meier生存率曲线及Log Rank检验，所有统计检验均为双侧概率检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

结果

1．大肠腺瘤及大肠腺癌组织sLex的表达:sLex阳性染色位于细胞膜及细胞质，正常黏膜及大肠腺瘤组织sLex主要表达于腺腔的腔缘及细胞膜周围的细胞质，而癌细胞出现细胞膜及细胞质的弥漫表达(图1)。大肠腺瘤、大肠腺癌sLex阳性表达率分别为50.0%(9/18)，80．0%(44/55)，大肠腺癌sLex阳性表达率高于大肠腺瘤，具有统计学意义(P=0．005) (表1)。

图1 大肠腺瘤及大肠腺癌组织sLex的表达(×400)

表1 大肠腺瘤及大肠癌组织sLex的表达

2．大肠腺癌、癌旁正常黏膜及远切端正常黏膜sLex的表达:癌旁正常黏膜sLex阳性染色主要位于黏膜固有层深层的腺体，而大肠腺癌sLex阳性染色表现于癌细胞浸润越深表达越明显。34例大肠腺癌、相应的癌旁正常黏膜及远切端正常黏膜sLex阳性表达率分别为79．4%(27/34)，41．2%(14/34)， 5.88%(2/34)，大肠腺癌＞癌旁正常黏膜＞远切端正常黏膜，具有统计学意义(P＜0．05，表2)。

图2 大肠腺癌及癌旁正常黏膜sLex的表达(×400)

表2 大肠腺癌、癌旁正常黏膜及远切端正常黏膜sLex的表达

3．大肠腺癌sLex的表达与临床病理参数的关系:55例大肠腺癌sLex阳性表达与患者的性别、发生部位、浸润深度、淋巴结转移及Duke's分期无关(P＞0．05)，而与分化程度有关(P=0．021)(表4)。

表4 大肠腺癌sLex的表达与临床病理参数的关系

4．大肠腺癌sLex的表达与生存时间的关系:55例大肠腺癌Kaplan－Meier生存曲线(图3)显示，sLex阳性表达组的生存曲线位于阴性组的下方，即sLex阳性表达率高者，生存时间短，但不具有统计学意义(Log－rank=0．919，P=0．338)。

讨论

sLex是Lewis X抗原的唾液酸基衍化物，属于

Lewis血型决定簇抗原之一。其结构为NeuAcα2→3

图3 大肠腺癌sLex表达与生存时间的关系

Galβ1→4Fucα1→3GclNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer［2］。正常情况下，sLex主要表达于人体粒细胞和单核细胞表面。近年研究表明，它是糖化的肿瘤相关抗原，其表达是肿瘤恶性发展和预后不良的标志物［3，4］。

关于sLex在大肠正常黏膜，腺瘤及腺癌的表达情况文献观点不一，Croce等［5］应用免疫组织化学方法检测了88例大肠癌，22例腺瘤和23正常黏膜sLex的表达，大肠癌、腺瘤阳性率分别为31%，41%，而在正常的黏膜中只有2例阳性。而Portela等［6］研究表明，sLex表达在大肠癌癌周正常组织为sLex为6．7%，腺瘤为27．0%，交界区及肿瘤组织分别为25.6%、74．8%。本研究结果显示，大肠腺瘤、腺癌sLex阳性表达率分别为50．0%(9/18)、80.0%(44/ 55);癌旁正常黏膜为41．2%(14/34)，主要表达于固有层深部增生腺体;远切端正常黏膜只有2例阳性，其表达率为5．88%。从远切端黏膜－癌旁黏膜－大肠腺癌sLex表达呈现明显的上升趋势，提示sLex参与了大肠肿瘤的发生及恶性转化，并且在这一过程中sLex表达部位出现了变化。文献报道Fuc－TVI调节sLex的生物合成［7］。那么sLex表达与临床病理参数的关系，Nakamori等［8］将132例大肠癌分为sLex阴性、阳性两组，研究表明，sLex阳性组瘤细胞侵袭能力、淋巴结转移高于sLex阴性组，尤其是肝转移能力增强，而且患者5年生存率sLex阳性组(58．3%)低于阴性组(93%)。本研究结果显示，sLex的表达与患者性别、发生部位、浸润深度、淋巴结转移、Duke's分期均无关，而与分化程度有关，而且通过Kaplan－Meier生存曲线及Log－rank检验显示，sLex阳性表达率高者，生存时间短，但不具有统计学意义。提示sLex表达与不同分化的大肠癌相关，即中低分化者，sLex表达高，而高分化者，sLex表达低。

本研究应用免疫组化研究了大肠癌及腺瘤sLex表达，同时对大肠癌周围及远切端黏膜进行了sLex检测，结果表明sLex是检测大肠肿瘤发生及大肠癌分化程度的重要生物学标志物。

1Doekhie FS，Morreau H，de Bock GH，et al．Sialyl Lewis X expression and lymphatic microvessel density in primary tumors of node－negative colorectal cancer patients predict disease recurrence［J］．Cancer Microenviron，2008，1(1):141－151

2Mannori G，Crottet P，Cecconi O，et al．Differential colon cancer cell adhesion to E－，P－，and L－selectin:role of mucin－type glycoproteins［J］．Cancer Res，1995，55(19):4425－4431

3Hiratani K．The clinical significance of tumor－associated glycosylated antigen，sialylated Lewis［J］．Nihon Kyobu Shikkan Gakkai Zasshi，1991，29(9):1096－1103

4Jorgensen T，Berner A，Kaalhus O，et al．Up－regulation of the oligosaccharide sialyl LewisX:a new prognostic parameter in metastatic prostate cancer［J］．Cancer Res，1995，55(9):1817－1819

5Croce MV，Sálice VC，Lacunza E，et al．Alpha 1－acid glycoprotein (AGP):a possible carrier of sialyl lewis X(slewis X)antigen in colorectal carcinoma［J］．Histol Histopathol，2005，20(1):91－97

6Portela SV，Martín CV，Romay LM，et al．sLea and sLex expression in colorectal cancer:implications for tumourigenesis and disease prognosis［J］．Histol Histopathol，2011，26(10):1305－1316

7Trinchera M，Malagolini N，Chiricolo M，et al．The biosynthesis of the selectin－ligand sialyl Lewis x in colorectal cancer tissues is regulated by fucosyltransferase VI and can be inhibited by an RNA interferencebased approach［J］．Int J Biochem Cell Biol，2011，43(1):130－139

8Nakamori S，Kameyama M，Imaoka S，et al．Increased expression of sialyl Lewisx antigen correlates with poor survival in patients with colorectal carcinoma:clinicopathological and immunohistochemical study［J］．Cancer Res，1993，53(15):3632－3637

(收稿:2011－12－12)

(修回:2012－01－04)

Expression and Biological Significance of Sialyl Lewis X in Colorectal Mucosal Tissues．

Yu Xiuwen，Wu Tian．Department of Pathology，Qiqihaer Medical College，Heilongjiang 161006，China

ObjectiveTo explore relationship between expression sLex(sialyl lewis X)and clinicopathological parameters in colorectal tumors．MethodsThe expression of sLex was detected in 20 colorectal adenomas，55 colorectal adenocarcinomas and 15 normal colorectal mucosal tissues by immunohistochemical method．ResultsThe positive expression rates of sLex in colorectal adenoma and colorectal adenocarcinomas and normal colorectal mucosal tissues were 50．0%(9/18)，80．0%(44/55)(P=0．005)．The positive ex-pression rates of sLex in 34 colorectal carcinoma and carcinoma adjacent mucosa were 79．4%(27/34)，41．2%(14/34)，5．88%(2/34) (P＜0．05)．The colorectal adenocarcinomas sLex expression was unrelated to patient's sex，site，invasion，lymph node metastasis，Duke' s stages and survival time(P＞0．05)．The positive expression of sLex was related with differentiation of tumor(P=0．021)．Conclusion sLex is the detection of colorectal tumorigenesis and colorectal cancer differentiation degree important biological markers．

Colorectal adenocarcinoma;sLex;Immunohistochemistry

黑龙江省教育厅高等学校青年学术骨干支持计划项目基金资助项目(1155G66)

161006齐齐哈尔医学院病理教研室