血清中肿瘤相关钙信号转导蛋白2抗体对乳腺癌诊断及预后的临床价值

郑专 董学君

血清中肿瘤相关钙信号转导蛋白2抗体对乳腺癌诊断及预后的临床价值

郑专 董学君

目的探讨乳腺癌患者血清中肿瘤相关钙信号传导蛋白2(TACSTD2)抗体表达水平及其在乳腺癌诊断及预后中的临床应用价值。方法用表达TACSTD2的噬菌体包被空白的微孔板，ELISA法分别检测100例乳腺癌患者、60例乳腺良性增生患者及60名健康体检者血清中TACSTD2抗体含量。结果与健康对照组相比，乳腺癌患者血清中TACSTD2抗体含量明显升高，具有统计学意义(P＜0．001);乳腺癌患者组血清中TACSTD2抗体含量亦明显高于良性对照组(P＜0．001);但是已发生淋巴结转移的乳腺癌患者与未发生淋巴结转移的患者血清中TACSTD2抗体含量相比较，无显著性差异(P＞0．05)。结论血清TACSTD2抗体的表达与乳腺癌的发生密切相关，可作为乳腺癌诊断的肿瘤标志物。

TACSTD2乳腺癌肿瘤标志物

本文利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测100例乳腺癌患者血清中TACSTD2抗体的含量，探讨血清中TACSTD2抗体在乳腺癌的诊断及预后中的临床应用价值。

对象与方法

1．对象:经病理和影像学确诊的乳腺癌患者共100例，年龄35～70岁，其中无淋巴结转移36例，有淋巴结转移64例。病理确诊为乳腺良性疾病患者60例，年龄26～58岁，其中乳腺纤维瘤31例，乳腺囊肿29例。以上研究对象均为绍兴市人民医院住院患者。对照组为60名健康体检者，年龄20～65岁，无任何慢性疾病。

2．标本采集:均采空腹静脉血5ml，4℃1800×g离心10min，收集血清并于－20℃保存待测。

3．TACSTD2抗体测定:将表达TACSTD2的T7噬菌体液1∶1000稀释，并包被96孔酶标板，4℃冰箱内过夜，次日每孔加200μl 5%牛血清白蛋白(BSA)/磷酸盐缓冲液(PBS)室温封闭2h;用TBS－T(50mmol/L Tris－HCl pH 7．5，0．15mol/L NaCl，0．1%吐温20)洗5次，每次3min，加入1∶100稀释的血清样本100μl，室温孵育1h;用TBS－T洗5次，加入1∶10000稀释的HRP偶联的山羊抗人IgG100μl，室温放置1h;用TBS－T洗5次，加入显色液A、B各1滴，于37℃孵育15min，立即加入终止液1滴;酶标仪450nm波长下检测OD值。每孔反应均重复3次，并设阴性对照和空白对照。按试剂说明书，Cutoff值=2．0×阴性对照平均OD值。

结果

1．TACSTD2抗体在乳腺癌、乳腺良性肿瘤患者及健康体检女性血清中的表达:乳腺癌患者血清中TACSTD2抗体水平高于健康对照组及乳腺良性疾病组患者(P＜0．001);而乳腺良性疾病组与健康对照组之间无显著性差异(P=0．274，表1)。

2．乳腺癌患者血清中TACSTD2抗体水平与肿瘤淋巴结转移的关系:出现淋巴结转移的患者与未出现转移的患者TACSTD2抗体水平无显著性差异(P= 0．162，表2)。

表2 血清TACSTD2抗体表达与乳腺癌淋巴结转移的关系

讨论

大量研究结果显示，人体内的肿瘤能诱导机体产生免疫反应，生成抗肿瘤相关抗原(TTA)的自身抗体，其在肿瘤抗原表达量很低的时候就能检测出。ADMON A和SHOSHAN SH提出，这些自身抗体可直接作用于体内细胞表面的受体，活化和刺激细胞生长的信号传导通路，从而可能导致细胞无限制的增殖，甚至诱导肿瘤的发生［10］。这些异常的自身抗体有可能出现在肿瘤发生早期的某个阶段，在上调促肿瘤受体的表达、增加肿瘤的恶性程度或者在导致肿瘤获得潜在的转移能力中起到关键性的作用，因此产生的自身抗体有可能作为肿瘤发生标志物。

本研究显示乳腺癌患者血清中TACSTD2抗体整体水平显著高于正常对照组及乳腺良性疾病组，而乳腺良性疾病组的TACSTD2抗体水平与正常对照组无显著性差异，表明该指标可用于乳腺癌的辅助诊断。我们进一步研究发现，发生淋巴结转移的乳腺癌患者与未发生淋巴结转移的患者血清中TACSTD2抗体含量相比，无显著性差异(P＞0．05)，说明该指标在监测乳腺癌病情方面价值不大。

研究中我们还应用了噬菌体展示技术，用噬菌体展示肽库来源的模拟抗原替代TACSTD2，包被微孔板，用ELISA法检测血清中的抗体［11］。其操作简便，重复性好，检测速度快，可以对乳腺癌进行早期诊断，有利于肿瘤的早期治疗，提高患者的生存率。

总而言之，检测乳腺癌患者血清中的TACSTD2抗体，为肿瘤的诊断与治疗提供一个新的有效思路。

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9Tan EM，Zhang J．Autoantibodies to tumor associated antigens:reporters from the immune system［J］．Immunol Rev，2008，222(1):328－340

10Admon A，Shoshan SH．Antibodies as oncogenes:a hypothesis［J］．Med Hypotheses，2006，67(3):471－473

11董学君，李志国，杨明峰，等．乳腺癌新指标的筛选及其临床价值验证［J］．中华实验外科杂志，2011，28(11):2005－2006

(收稿:2011－12－31)

(修回:2012－02－16)

Diagnostic Value of Antibody Against Tumor－associated Calcium Signal Transducer 2 in Patients with Breast Cancer．

Zheng Zhuan，Dong Xuejun．Molecular Medicine Center，Shaoxing People's Hospital，Zhejiang 312000，China

ObjectiveTo evaluate the application value of antibody against tumor－associated calcium signal transducer 2 (TACSTD2)in the treatment effect monitoring in breast cancer．MethodsAntibody against TACSTD2 was determined by ELISA in breast cancer patients(n=100)，benign breast disease patients(n=60)and health controls(n=60)．ResultsThe level of antibody against TACSTD2 was significantly higher in breast cancer patients than that in health controls and in benign breast disease patients(P＜0．001)．However，there was no statistically significant difference between antibody against TACSTD2 in the breast cancer patients who had axillary lymph node metastasis and that in the breast cancer patients who had no axillary lymph node metastasis(P＞0．05)．ConclusionAntibody against TACSTD2 is helpful in the diagnosis of breast cancer．

TACSTD2;Breast neoplasms;Tumor markers

乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一。近年来，乳腺癌发病率呈明显上升趋势，流行病学调查表明，女性25～35岁乳腺癌的发病率大幅增加，55～65岁为第2个发病高峰。在大中城市，乳腺癌已跃居女性恶性肿瘤的首位或第2位，成为“女性之敌”。检测乳腺癌血清标志物可以反映肿瘤的生物学特性，对辅助诊断、指导治疗及判断预后均有重要意义。肿瘤相关钙信号传导蛋白2(TACSTD2)在人类的角膜、胰腺、前列腺等器官中均有表达，并在正常的滋养层细胞、多层上皮细胞及上皮癌中高度表达［1～4］。TACSTD2参与多种细胞的增殖、凋亡相关基因和癌基因的转录。TACSTD2的表达与肿瘤侵袭及预后有关，已有研究报道，乳腺癌组织中TACSTD2的基因表达量远远高于正常乳腺组织，但是乳腺癌患者血清TACSTD2抗体含量是否高于正常人，TACSTD2抗体检测能否作为检测乳腺癌的标志物之一，还有待进一步研究［5～8］。

浙江省医药卫生科学研究基金资助项目(2009A208)

312000绍兴市人民医院分子医学中心

董学君，电子信箱:dxj9666@163．com