高效液相色谱法测定复方消渴滴丸中葛根素含量

戴 薇，张 锦

(1.重庆医科大学附属第二医院，重庆 400010;2.重庆市药品检验所，重庆 401121)

复方消渴滴丸是由葛根、苦瓜、山药等药材经现代提取工艺制成的纯中药制剂，具有益气养阴、清热生津功效，临床用于治疗气阴不足所致的消渴以及2型糖尿病患者。笔者采用高效液相色谱法测定该制剂中葛根素的含量，旨在探讨其质量控制方法。

1 仪器与试药

LC－20A型高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器，Autoscience溶剂过滤器，超声波提取器;Sartorius BP211D型电子天平。葛根素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为752－200108);复方消渴滴丸(市售品，批号为 110901，110902，110903);甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(28∶72);流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;紫外检测波长:250 nm;进样体积:10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取葛根素对照品 5.23 mg，置25 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取2 mL，置10 mL容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含葛根素41.84 μg 的对照品溶液。取复方消渴滴丸适量，研细，称取 0.2 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加70%乙醇适量，超声处理20 min，放冷至室温，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例，取除葛根外的其他各味药材，按制剂工艺制成阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取2.2项下3种溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，依法测定。结果阴性对照品溶液色谱在葛根素相对保留时间处未见色谱峰，表明阴性样品对葛根素的检测无干扰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:分别精密吸取质量浓度为0.202 9 g/L的对照品贮备液，分别稀释成 83.68～836.8 μg/mL 7个系列质量浓度的对照品溶液，各进样10 μL，记录色谱图，以对照品溶液质量浓度(C)为横坐标、峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线，得葛根素回归方程 Y=265 572.945 5 X+289.279，r=0.999 8(n=7)。结果表明，葛根素质量浓度在83.68～836.8 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取质量浓度为41.84 μg/mL的对照品溶液，连续依法进样6次。结果葛根素峰面积的 RSD=1.08%(n=7)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，在上述色谱条件下分别于0，1，2，4，6，8，24 h 时依法进样测定，结果葛根素峰面积的RSD=1.28%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

重复性试验:取同一批(批号为110901)样品6份，分别制备成供试品溶液，依法进样测定。结果葛根素含量为6.36 mg/丸，RSD=1.74%(n=6)，表明方法重现性良好。

检测限与定量限试验:取对照品溶液1 mL(41.84 μg/mL)，以70%乙醇逐级稀释后依法进样测定。按信噪比(S/N)=3确定葛根素检测限为0.24 μg/mL，按信噪比(S/N)=10确定葛根素定量限为 1.36 μg/mL。

加样回收试验:称取已知葛根素含量的供试品约0.1 g，精密称定，共9份，分别置25 mL容量瓶中，分别精密加入高、中、低3种量级(120%，100%，80%)的葛根素对照品溶液，按供试品溶液制备方法制得回收试验溶液，依法进样测定含量。计算结果见表1。

表1 葛根素加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，注入液相色谱仪测定，按外标法计算样品中葛根素含量。结果批号为110901，110902，110903，葛根素含量分别为 6.36，6.37，6.36 mg/丸。

3 讨论

3.1 检测波长选择

精密称取葛根素对照品溶液，在200～400 nm波长范围内扫描，结果在250 nm处有最大吸收，故将250 nm波长作为检测波长。

3.2 流动相选择

曾参照2010年版《中国药典(一部)》[1]葛根项下葛根素含量测定的流动相甲醇－水(25∶75)，结果葛根素色谱峰与相邻色谱峰分离度不好，峰形较宽，对称性不理想。经多次试验，筛选出流动相甲醇－水(28∶72)并进行分离，结果峰形好，理论塔板数较高。

3.3 供试品溶液制备

参照文献[2－6]报道，样品用70%乙醇分别超声10，20，30 min，结果超声20 min与超声30 min样品含量接近，且为比超声10 min含量高;提取溶剂选用甲醇、50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇，制备供试品溶液，结果以70%乙醇制备的供试品溶液中，葛根素含量较其他溶剂高，因此制备供试品溶液时样品用70%乙醇超声20 min即可。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:312.

[2]王金宏，李 馨，金 迪，等.感冒清热口服液中葛根素含量测定[J].黑龙江医药，2010，23(1):1.

[3]王 健，魏清榕，洛 丽，等.心血宁片中葛根素含量测定方法的研究[J].中药材，2004，27(6):446.

[4]郝建莉，孔维涵，胡 静，等.葛根异黄酮胶囊葛根素含量测定[J].天津药学，2007，19(4):12.

[5]周 翎，许 枫.HPLC法测定糖消片中葛根素的含量[J].辽宁中医杂志，2007，34(2):212.

[6]高国峰，周 珩.粉葛饮片质量标准研究[J].中国药业，2010，19(12):47.