HPLC法同时测定高冠平胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量

苏英英 宋 敏 杨东花 刘 峰

(1山海丹医院，陕西省西安市西八路116号，710004;2西安阿房宫药业有限公司;3陕西步长制药有限公司)

高冠平胶囊是由白芍、红参、丹参、三七、灵芝、蒲黄等19味药材提取加工制成的医院制剂，具有益气养血，活血化瘀、通络潜阳的功效，主要用于治疗冠心病、高血压病及高血压性心脏病［1～3］。红参和三七既是方中的主药，又为贵重药材，有效成分均为皂苷类成分，我们按《中华人民共和国药典》2010年版规定的红参、三七药材的含量测定指标，建立了高效液相色谱法同时测定高冠平胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1含量的方法，用于控制本制剂的质量，确保临床疗效。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Ultimate3000高效液相色谱仪(戴安公司);AR1140电子天平(梅特勒－托利多);ΜPT－1－10高纯水机(北京子涵);KQ·250TB超声波清洗器(昆山超声)。

表1 梯度洗脱曲线

1.2 试药 三七皂苷R1对照品(批号110745－200318，供含量测定用)、人参皂苷Rg1(批号110703－200415，供含量测定用)、人参皂苷 Re(批号0754－200013，供含量测定用)和人参皂苷Rb1对照品(批号110704－200420，供含量测定用)，购于中国食品药品检定研究院。高冠平胶囊(批号20091201、20100108、20100201，山海丹医院提供)。水为超纯水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱:HibarC18(250mm ×4.6mm，5μm);流动相:以乙腈为流动相 A，水为流动相B，按表1进行梯度洗脱;流速:1.0mL/min;检测波长:203nm;柱温:30℃;进样量:20μL;理论板数按三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1峰计算均不低于6000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含三七皂苷R10.1mg、人参皂苷Rg10.5mg、人参皂苷Re 0.3mg、人参皂苷Rb10.5mg的混合溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取约8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率250Hz，频率40kHz)40min，提取液放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，滤液蒸干，残渣加水50mL溶解，用三氯甲烷50mL提取，弃去三氯甲烷层，水液用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次50mL，合并正丁醇液，用氨试液150mL洗涤，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备 按处方比例准确称取处方中除红参和三七以外的其他各味药材，模拟本品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制成阴性对照品溶液。

2.3 干扰试验 按2.1项下色谱条件分别吸取对照品、供试品、阴性对照品溶液各20μL进行测定，绘制色谱图(见图1)。结果在相同保留时间对照品与供试品溶液均出现色谱峰，而阴性对照品溶液在相应位置无色谱峰，表明其他化学成分对含量测定结果无干扰，方法具有专属性。

图1 高冠平胶囊HPLC色谱图

2.4 线性关系考察 分别精密吸取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1对照品的混合溶液 2、4、8、16、24、32μL 注入液相色谱仪，测定其峰面积。分别以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表2。表明线性关系良好。

表2 线性关系考察结果

2.5 精密度试验 取分别含三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1对照品0.1026mg/mL、0.5221mg/mL、0.3055mg/mL、0.5018mg/mL 的混合对照品溶液，重复进样5次，测定其峰面积，RSD分别为 0.641%、0.486%、0.796%、0.957%(n=5)，表明本方法精密度良好。

2.6 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12 和24h 按 2.1 项下色谱条件测定其峰面积。结果RSD为0.116%、0.853%、0.674%、1.055%(n=8)，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 重复性实验 取同一批样品(批号20091201)，按2.2.2项下供试品溶液制备方法平行制备6份，按2.1项下色谱条件测定，含量分别为三七皂苷 R10.026mg/g、人参皂苷 Rg10.368mg/g、人参皂苷 Re 0.124mg/g、人参皂苷 Rb10.220mg/g，RSD 分别为0.544%、0.792%、0.359%、0.959%(n=6)，表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率实验 精密称取已知含量的样品(批号20091201)4g，分别加入一定量的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1对照品，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样分析，计算回收率，结果见表3、表4、表5、表6。

表3 三七皂苷R1回收率试验(n=6)

表4 人参皂苷Rg1回收率试验(n=6)

表5 人参皂苷Re回收率试验(n=6)

表6 人参皂苷Rb1回收率试验(n=6)

2.9 样品含量测定 取3批样品按2.2.2项下供试品溶液制备方法，制成供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，测得样品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量，结果见表7。

表7 样品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量测定结果(mg/g，n=3)

3 讨论

高冠平胶囊处方组成中红参和三七是主药，本文参照《中华人民共和国药典》［4］2010年版一部中红参和三七【含量测定】项下的色谱条件，并根据文献［4～8］报道，对流动相梯度洗脱方法和供试品溶液的制备方法进行了优选研究，实现了采用高效液相色谱法同时测定高冠平胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量，方法简便、准确、重现性好，可用于高冠平胶囊的质量控制。但本文仅对红参和三七《中华人民共和国药典》2010年版一部中规定的四个指标成分三七皂苷R1及共有成分人参皂苷Rg1、Re、Rb1建立了含量测定方法，其他独有的皂苷类成分，如三七含有的三七皂苷 R2、R4、R6、Fa，红参中的人参皂苷Rb2、Rf等的含量控制方法有待进一步研究。

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