血清TK-1检测对原发性肝癌的诊断及介入治疗后效果评估的意义

艾敏 陶晨 文剑 张永臣 戴峰 陈刚 赵红 赵伟

原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。我国的肝癌患者约占全世界的50%。国内外同行一致认为经导管肝动脉化疗栓塞(TACE)是不适合手术切除的中晚期肝癌的首选疗法，在老年肝癌患者应用尤其广泛。

TK-1的升降水平与DNA在细胞周期S期的合成速度密切相关［1］。恶性肿瘤细胞中的DNA合成剧增导致肿瘤细胞的急剧增殖，因此，TK-1的水平与肿瘤细胞数量和生长状态关系密切。TK-1作为肿瘤细胞的血清学增殖标志物，在乳腺癌、肺癌、膀胱癌等恶性肿瘤中已有相关研究［1-2］。本研究检测了肝癌患者介入治疗前后血清中TK-1的水平，以观察其在肝癌的早期诊断、疗效监测等方面的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2010年4～10月在南京市第二医院住院老年原发性肝癌患者54例，男39例，女15例，年龄45～63岁，平均(51±4.8)岁。肝功能分级均为Child A级，无TACE治疗禁忌证。分别在介入治疗前、治疗后1周、1月保留血清进行TK-1水平测定。正常对照组28例，为本院体检老年健康人，男19例、女9例，年龄45～60岁，平均(49±3.8)岁，正常对照组为排除贫血、任何肿瘤疾病、传染性疾病、炎症疾病和其他疾病征兆的健康人。医学伦理委员会批准上述标本的收集。

1.2 方法

TACE:采用标准Seldinger法通过右侧股动脉穿刺行常规造影，根据造影结果将导管或微导管置于肿瘤染色异常供血动脉内，经导管注入50 mg顺铂(齐鲁制药)，然后根据血管造影显示病灶大小、范围和血供情况给予10～15 ml液化碘油与20 mg吡柔比星(深圳万乐药业)乳化和适量明胶海绵行病灶和肿瘤血管栓塞，4～8周重复1次。介入治疗1月后复查肝脏增强CT以观察病灶大小变化、碘油存积情况及病灶有无增强后强化，进一步评价疗效。

血清TK-1值检测:于清晨空腹抽取静脉血2 ml，3 h内以4000 r/min离心10 min，分离血清，按编号分装于2个离心管，保存于-20℃冰箱(1管用于检测、另1管用于复检)，标本收集完成后进行血清TK-1值测定。测定时，采用不同浓度TK-1(20，6.6，2.2 pmol/L)做标准品(A1-3)制定标准曲线。按照TK-1的标准曲线计算供试者的TK-1值的pM浓度。风险值为2 pM，STK-1＞2 pM检测者评估为细胞增殖风险人群，判断为阳性结果。采用ECL点印迹免疫-增强化学发光法检测系统，TK-1检测灵敏度为0.2 pmol/L。

全部过程实行严格的双盲法操作，TK-1印迹免疫-增强化学发光法试剂盒和CIS-1化学发光数字成像分析仪由华瑞同康生物技术(深圳)有限公司提供。

1.3 疗效评价 根据介入治疗前及治疗后4～6周CT检查，参照《常见恶性肿瘤诊治规范》的肝癌疗效标准进行评价，近期疗效判断分为4级［3］:肿瘤病灶最大的2个相互垂直直径的乘积缩小(坏死)≥50% 为完全缓解(CR);缩小(坏死)25% ～50% 为部分缓解(PR);缩小(坏死)＜25% 或增大≤50% 为稳定(SD);增大＞50% 或出现新病灶为进展(PD)。CR+PR为有效，而SD+PD为无效。本研究54例中有效31例，无效23例。

1.4 随访 采用住院随访及门诊随访，随访间隔为每月1次。门诊随访内容包括血常规、生化肝功能、凝血时间、TK-1、甲胎蛋白、肝脏增强CT或MR(每2月1次)，药物不良反应及体能状况(ECOG PS)评分。

1.5 统计学处理 数据处理均用SPSS 15.0进行。计量资料以均数±标准差表达，各组之间TK-1水平的比较用student's t检验，组间计数资料比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组TK-1水平及TK-l阳性数比较 肝癌组治疗前TK-1水平［(3.30±2.30)pmol/L］显著高于对照组［(1.32±0.86)pmol/L］，在介入治疗1周后TK-1水平于治疗前比较无显著差异(P＞0.05)，但在治疗1月后显著下降，为(2.81±2.48)pmol/L，差异有统计学意义(P＜0.01)。肝癌组TK-1阳性37例(68.52%)，显著高于对照组3例(16.67%)，差异亦有统计学意义(P＜0.01)。

2.2 介入治疗1月后血清TK-1水平与疗效的关系介入治疗1月后血清TK-1水平＜2 pmol/L组的治疗效果明显好于＞3 pmol/L组，差异有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

表1 介入治疗1月后血清TK-1水平与疗效相关比较(n)

3 讨论

原发性肝癌是一种常见的恶性肿瘤。甲胎蛋白(AFP)被认为是原发性肝癌的特异性好、阳性率高的首选血清肿瘤标志物，但其阳性率仅为60%左右［4］，约三分之一的患者无法根据此指标做出诊断及疗效评价，因此如果能找到AFP以外的肝癌肿瘤标志物，对原发性肝癌的诊断和治疗有很重要的意义。

TK-1基因定位在17q13.2～25.3，靠近半乳糖激酶基因，与DNA的合成密切相关，是S期特异性的激酶。TK-1水平取决于细胞的增殖度，正常情况下成人体内TK-1含量极微［5］，肿瘤疾病是一种细胞异常增殖性疾病，正常细胞生长一旦失控，将导致细胞恶性增殖，DNA合成速度急剧升高。由于 TK-1与DNA合成呈正相关，TK-1活力增加会引起细胞DNA合成速度提高，所以肿瘤恶性程度越高，TK-1的含量也相应升高。95%的恶性肿瘤病人的血清中都存在TK-1水平不同程度的升高［2］。因此，近年来这一新的细胞增殖标志已逐渐受到人们的关注，应用于临床肿瘤的疗效监测和预后评估，以及对健康人群早期发生恶性肿瘤风险的预测和筛查［6-8］。

高水平的TK-1主要存在于胎儿组织和成人的增殖细胞质中，在非增殖细胞和健康人血清中，TK-1含量极微或检测不到。针对血清TK-1在肝癌患者中表达水平变化的研究较少。本研究结果显示，与健康对照组比较，肝癌组TK-1水平及阳性检出率显著升高(P＜0.05)，与相关文献的报道一致［9］。

据文献报道TK-1半衰期为30 d左右［10-12］。本研究比较了介入治疗前后肝癌患者的血清TK-1水平，发现治疗1周后TK-1水平与治疗前无显著差异，分析原因可能是因为介入治疗1周后尚处于TK-1的半衰期内，血清中仍有残留的TK-1。而介入治疗1月后复查的患者血清中TK-1水平明显下降，其原因可能为:介入治疗后肿瘤细胞生长受抑制，肿瘤组织增殖速度减缓。

本研究对介入治疗后血清TK-1不同水平组的治疗疗效进行了比较，结果提示介入治疗1月后，血清TK-1水平＜2 pmol/L组，疗效明显好于血清TK-1＞3 pmol/L组，证实血清TK-1水平与介入治疗疗效相关，提示其可以作为判断肝癌介入治疗疗效的指标。

本研究采用印迹免疫-增强化学发光法检测血清TK-1水平，该方法灵敏度高，可达0.1～1 pg。与放射性同位素法相比，该方法具有快速、灵敏、无环境危害等特点，具有广泛的应用前景。

本研究认为，TK-1作为一种新的血清肿瘤标志物，检测重复性好，可靠性高，可作为一种评估肝癌介入治疗疗效的有效指标，值得临床逐步推广使用。但是由于研究时间过短，未能随访肝癌患者介入治疗后长期的TK-1水平变化趋势，TK-1水平能否对肝癌复发及长期预后进行有效预测还需要进一步研究。

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