高效液相方法测定给希古那－5中大黄素的含量

2012-09-12王晓娟

中国民族医药杂志 2012年10期

关键词：三氯甲烷液相色谱仪锥形瓶

王晓娟

(锡盟药检所，内蒙古锡林浩特 026000)

蒙成药给希古那－5由红花、大黄、赤瓟、高良姜、当归等5味药组成。处方中大黄为主药成分，大黄素可作为给希古那－5中含量的指标成分。本文采用HPLC方法对大黄素进行测定。

1 仪器、材料与试剂

岛津SIL－20A高效液相色谱仪。大黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供;给希古那－5由西乌旗蒙医院提供，给希古那－5模拟样品自制。乙睛、甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 含量测定

2.1 色谱条件:色谱柱天河 C18(250mm ×4.5mm，5μm);流动相乙腈－水－冰醋酸(65:35:1);检测波长437nm;柱温40℃。

2.2 提取方法及提取效率的考察

2.2.1 提取方法的选择:取本品粉末约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，置锥形瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10mL，超声处理5min，加三氯甲烷10mL，加热回流1小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次，每次8mL，合并三氯甲烷液，以无水硫酸钠脱水，滤过，滤液挥干，残渣用少量甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，用甲醇稀释到刻度，即得。

2.2.2 提取效率的考察:称取样品粉末6份各约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流30min、60min各3份，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，置锥形瓶中，挥去甲醇，各加2.5mol·L－1硫酸溶液10mL，超声处理5min，分别加三氯甲烷10mL，分别将第一次回流时间为30min、60min的各3份溶液再分别加热60min、90min和120min，冷却，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次，每次8mL，合并三氯甲烷液，以无水硫酸钠脱水，滤过，滤液挥干，残渣用少量甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，用甲醇稀释到刻度，即得。结果见表1。

表1 提取效率的考察表

从表中数据可见，第一次回流30min、第二次回流60、90和120min，大黄素的含量基本稳定且提取效率好，故2次回流提取时间分别定为30min、60min。

2.3 专属性

2.3.1 精密称取大黄素对照品 12.61mg、本品粉末 2.0g及模拟阴性对照样2.0g，按2.2.1项下方法制备，分别取10μL注入液相色谱仪，进行测定。

2.3.2 测定结果:阴性对照色谱图中在与大黄素对照品以及供试品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对大黄素的测定无干扰。

2.4 线性关系考察:大黄素精密称取大黄素对照品2.50mg置100mL量瓶中，分别加甲醇适量使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀(每1mL含25μg)精密吸取大黄素对照品溶液各 0.25、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL 置 10mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各取20μL，按上述色谱条件测定，以峰面积A对进样量进行回归分析，得大黄素回归方程为 Y=988950X+5460，R2=0.9990;结果表明，大黄素在0.0125μg～0.4000μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 稳定性试验:取同一份供试品，按2.2项下方法制备，精密量取10μL注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件条件测定，分别于0、2、4、8、12、24h 进样，结果表明供试品在24h内稳定。见表2。

2.6 重复性试验:取同一批号供试品(批号:20090405)6份，精密称取 2.0g，按 2.2.1 项下方法制备，取 10μL 注入液相色谱仪，进行含量测定，测得大黄素含量为0.3165、RSD0.89%。

表2 不同时间测定样品中大黄素的峰面积积分值

2.7 回收试验:供试品溶液的制备取供试品(批号20090405 含量 0.3165 mg·g－1)9 份，各约0.5g，精密称定，分别置9个具塞锥形瓶中，在1～3、4～6、7～9号分别加入浓度为 3.035、6.07、8.93μg·mL－1的大黄素甲醇溶液，分别精密吸取上述溶液各20μL注入液相色谱仪进行测定。平均回收率分别为107.82、99.82、94.65%，RSD 为0.67、0.63、1.69%。