RP－HPLC法测定蒙药黄柏－8味散中小檗碱的含量

萨仁高娃 吴双英 白玉霞

(1.内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028041; 2.内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028041)

蒙药黄柏－8味散由黄柏、香墨、栀子、甘草、红花、荜茇拨、黑云香、牛胆粉等8味蒙药组成的传统蒙药制剂，具有清热凉血、固精之功效。临床上主要用于肾热、尿路感染、尿中带血、经下过多等病症［1］。运用HPLC法测定盐酸小檗碱的含量。本方法精密度高，分离效果良好，平均加样回收率为98.17%，RSD=0.50%;为蒙药黄柏－8味散的质量标准制定奠定了良好的基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器:日本岛津产LC－10ATVP型高效液相色谱仪(双泵、二极管阵列检测器);KQ－100型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司);电子天平 AUW220D(Max 220g d=0.01 mg)日本岛津公司。

1.2 试药:黄柏－8味散:内蒙古蒙医药学院附属医院(070314，080811)，自制的蒙药黄柏 －8味散按文献［1］方法制备，小檗碱对照品:中国药品生物制品检定所，批号110713－200708，流动相用乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水;其余溶剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件［2，3］:LC －10ATVP 泵，SPD － M10AVP 检测器，SCL－10AVP工作站，VP－ODS柱(250mm ×4.6μm);流动相:乙腈－0.5%三乙胺水溶液用磷酸调 PH3(28:72)［2］;流速 1.0 mL·min－1;柱温 25℃;检测波长 345nm，在此条件下，样品中小檗碱与其它成分达到基线分离。结果见图1。

2.2 标准曲线的制备［2］:精密称取盐酸小檗碱对照品3.01mg，置10mL容量瓶内，加甲醇3.0mL溶解，精密吸取此液1.0mL置50mL容量瓶中加甲醇至刻度即得20.067μg·mL－1的标准溶液。精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液5.0μL;7.5μL;10.0μL;12.5μL;15.0μL 进样，测定峰面积，按峰面积积分值对浓度进行线型回归计算，得标准曲线回归方程为 A=1996763C －3470.5，r=0.9999。结果表明小檗碱在0.10034～0.30101μg范围内呈良好的线性关系，结果见表1。小檗碱对照品图见图3。

表1 小檗碱进样量(μg)与峰面积(A)的关系

2.3 空白干扰实验:按黄柏－8味散处方比例称取除黄柏以外的其它药材适量，依照供试品溶液的制备工艺制备阴性对照溶液，在相同的色谱条件下测定，阴性对照溶液在小檗碱出峰位置上无干扰。结果见图2。

图1 黄柏—8味散样品色谱图

图2 样品阴性对照品色谱图

图3 小檗碱对照品色谱图

2.4 精密度实验:取浓度为20.067μg·mL－1的对照品溶液及样品液各10μL，分别进样，重复5次测定峰面积。结果为对照品RSD=0.85%，样品RSD=1.16% 。

2.5 重复性实验:取同一批号样品5份，按样品测定项下方法制备和测定，其RSD=1.07% 。

2.6 回收率试验［4］:精密称取已知小檗碱的样品5份(批号080811)，分别加入一定量的小檗碱对照品，按供试品处理方法处理后进样10μL测定，计算小檗碱回收率，结果见表2。

表2 样品回收率试验结果

2.7 提取方法的选择

2.7.1 称取供试品(批号:070314)0.5g，加盐酸 － 甲醇(1:100)40mL，回流 30min，滤过，精密吸取供试品液10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量，结果见表3。

2.7.2 称取供试品(批号:070314)0.5g，加盐酸 － 甲醇(1:100)40mL，浸泡30min，并超声30min，滤过，精密吸取供试品液10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量，结果见表3。

2.7.3 称取供试品(批号:070314)0.5g，加盐酸 － 甲醇(1:100)40mL，超声30min，滤过，精密吸取供试品液10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量，结果见表3。

表3 不同提取方法供试品中小檗碱的含量

从表3结果分析，回流提取方法含量略高于超声提取方法，但是回流提取进样后分离效果较差，故选用直接超声提取方法。

2.8 供试品溶液的制备和测定［5］

2.8.1 供试品溶液的制备:称取不同批号黄柏－8味散0.5g精密称定重量置于100mL魔口瓶中，加盐酸－甲醇(1:100)40mL超声提取30min，过滤，加甲醇定容至50mL，摇匀，即得。

2.8.2 供试品溶液的测定:精密吸取供试品液10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量，结果见表4。

表4 黄柏－8味散中小檗碱的含量(n=5)

3 讨论

3.1 黄柏为黄柏－8味散中的主药之一，占组方的23.81%，小檗碱为其主要活性成分之一。为提高药品质量确保疗效，我们采用HPLC对黄柏－8味散进行了小檗碱的含量测定，该HPLC法不经分离，直接测定其中小檗碱的含量，方法简便快速，经加样回收试验及精密度试验，认为结果可靠，为提高药品质量，该试验为黄柏－8味散的质量标准研究奠定了良好基础。

3.2 黄柏－8味散由8味药组成，本试验采用超声提取法提取样品，能使样品中的小檗碱得到良好分离。此法简便，易于操作，为蒙成药的质量分析提供了简便易行的方法。

［1］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)［S］.1998.161.

［2］HPLC法测定蒙药协日嘎－4汤中小檗碱的含量［J］.内蒙古民族大学学报自然版(蒙文版)，2005，15(2):40－42.

［3］谭生建，魏萍，刘刚，等.HPLC测定黄柏石膏散中盐酸巴马丁和盐酸小檗碱含量［J］.中国药学杂志，2004，39(7):546.

［4］梁生旺.中药制剂分析［M］.中国中医药出版社，2003.108.

［5］林瑞群，龙彬.连蒲黄双清片中盐酸小檗碱的含量测定［J］.今日药学，2009，19(6):52－53.