蟾灰胶囊质量标准的初步研究

张 华

(山东中医药大学，山东济南 250355)

癌症已成为人类致死的首要病因。目前临床放化疗药物效果皆不够理想。用中药治疗癌症［1-3］，不仅能扶正抗癌，且能针对性的治疗癌症，恢复受损的脏器功能，收到良好效果。蟾灰胶囊为验方制剂，由干蟾皮、灰树花、人参、全蝎等药材组成，是一剂疗效突出的扶正抗癌药。参考相关文献 ［4-6］，现对其质量控制方法进行探讨，为深入研究奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LabAlliance高效液相色谱仪;Diamonsil C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)柱。FA1104型电子分析天平 (上海精密科学仪器有限公司);ZF—2型三用紫外分析仪 (上海安亭电子仪器厂)。

1.2 对照品与供试品 人参皂苷Rg1(ginsenoside批号110703-200424);华蟾酥毒基 (cinobufagin批号 110803-200504);脂蟾毒配基 (resibufogenin批号110718-200507)，均购自中国药品生物制品检定所。蟾灰胶囊 (自制)。灰树花、干蟾皮、全蝎、人参均符合相关质量标准要求。

1.3 试剂 硅胶G(薄层色谱用，青岛海洋化工有限公司，批号20051056);甲醇色谱纯 (天津市四友生物医学技术有限公司，批号070515101)其余试剂均为分析纯。

2 定性鉴别

2.1干蟾皮鉴别［6-7］取内容物粉末5.0 g，加乙醇60 mL，回流30 min，滤过，滤液置5 mL量瓶加乙醇至刻度，通过D101大孔树脂柱，先用水洗脱至无色，弃水洗液;再用30%乙醇洗至无色，弃30%乙醇洗脱液;后用乙醇洗脱，收集洗脱液100 mL，水浴挥干，残渣用1 mL乙醇溶解，为供试品溶液。取干蟾皮药材，同法制备阳性对照液。取华蟾酥毒基对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法 (附录ⅦB)试验，吸取上述3种溶液各10、10、6μL，分别点于同一硅胶G薄层板，以环己烷-三氯甲烷-丙酮 (4∶3∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结果见图1。

图1 干蟾皮薄层鉴别

2.2 人参鉴别［8-11］取内容物细粉5 g，研细，用硅藻土分散，加甲醇20 mL，超声20 min，滤过，滤液蒸干，残渣用水溶解，移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取，萃取液加3倍氨试液，振摇，放置分层，取上清液水浴蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解。取人参皂苷 Rg1对照品制成0.24 mg/mL的对照液。取上述溶液各8、4 μL分别点于同一硅胶薄层板，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水 (15∶40∶20∶10)10℃放置后的下层液，展开，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结果见图2。

图2 人参的鉴别

3 定量测定

3.1 标准对照液的制备 精密称取减压干燥24 h的脂蟾毒配基1.60 mg，华蟾酥毒基1.82 mg，用甲醇溶解并定容至5 mL，从中精取0.1 mL稀释至1 mL，得对照品溶液。

3.2 供试液的制备［6-7］取3批胶囊内容物研细，约10 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL精密称定，回流2 h，放冷，用甲醇补足减失质量，滤过，取续滤液，微孔滤膜滤过，即得。

3.3 色谱条件［6-7］以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂;以0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈 (50∶50)(用磷酸调pH值3.2)为流动相，体积流量1 mL/min，检测波长为296 nm，柱温40℃，理论板数按脂蟾毒配基峰计算不低于4 000。

3.4 定量测定方法学考察［12］

3.4.1 专属性试验 阴性对照液的制备，取除干蟾皮外的三味药材，同本制剂制备方法制备阴性颗粒，同供试液的制备方法制备阴性对照液。

取阴性对照液及标准对照液，分别在测定的条件下进样，结果在与标准对照液色谱峰保留时间相应部位，阴性对照液无色谱吸收峰，表明该方法专属性良好，阴性对照无干扰。结果见图3。

3.4.2 线性关系及线性范围 取不同质量浓度的标准对照液分别进样50 μL，以进样质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图并线性回归，得脂蟾毒配基和华蟾酥毒基的标准曲线Y=25 735 876.5X+23 179.5，r=0.999 9，和Y=312 973 96X+12 656，r=0.999 5，表明两者质量浓度在0.003 2～0.32 mg/mL和0.003 64～0.364 mg/mL范围内，峰面积与质量浓度之间呈良好的线性关系。

3.4.3 精密度试验 精密吸取标准溶液，分别连续进样6次，记录峰面积，计算脂蟾毒配基和华蟾酥毒基RSD分别为1.8%和1.9%，表明仪器精密度良好。

3.4.4 稳定性试验 精制后的供试液，分别在0、4、8、12、24、48 h进样1次，测定，计算脂蟾毒配基和华蟾酥毒基RSD分别为2.0%和2.2%，说明供试液在48 h内稳定。

图3 阴性对照液 (A)、对照品 (B)和样品 (C)HPLC色谱图

3.4.5 重复性试验 同一批样品，按照3.2项下方法精制供试液6份，分别测定，计算脂蟾毒配基和华蟾酥毒基的含量，RSD分别为1.6% 和1.7%，说明重复性良好。

3.4.6 回收率试验 精密称取已知含有量的样品约5 g，精密称定，共6份，分别加入标准品0.8 mL、0.6 mL质量浓度为0.32 mg/mL和0.364 mg/mL的脂蟾毒配基及华蟾酥毒基标准对照液，按3.2项下方法制备，分别进样测定，结果见表1、表2。表明测定结果可靠。

表1 脂蟾毒配基回收率考查结果

表2 华蟾酥毒基回收率考查结果

3.5 蟾灰胶囊样品测定 取供试液，进样50 μL，测定并计算样品华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的质量分数。测定结果见表3。

3批样品中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的平均质量分数分别为0.052 9 mg/g和0.051 2 mg/g，考虑到干蟾皮有一定的毒副作用，拟定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的质量分数范围为0.046～0.058 mg/g。

4 讨论

蟾灰胶囊中人参，蟾皮均有独特的显色斑点。干蟾皮鉴别样品液的精制方法开始借鉴2010年版《中国药典》蟾酥项下鉴别方法，结果背景干扰很大，经改进后有好转，能较好达到鉴别的目的。灰树花和全蝎至今没有找到专属性好的鉴别方法，暂不对这两味药进行鉴别。

表3 蟾灰胶囊测定结果

脂蟾毒配基与华蟾酥毒基的高效液相吸收峰相邻但能达到较好的分离，可同时测定两种成分的含有量。测定方法快速便捷，方法学考查结果表明能保证测定结果的准确可靠。根据研究结果，暂定本品含脂蟾毒配基和华蟾酥毒基在0.046～0.058 mg/g范围内。

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