璇机化积膏质量标准研究

李 姣， 常增荣， 傅欣彤

(1.北京市药品检验所，北京 100035;2.北京中医药大学中药学院，北京 100102)

璇机化积膏为国际传统医药研究院研制的贴膏剂，由香附、木香、五灵脂、牵牛子等药味与适宜的基质和基材制成。为控制药品的内在质量，对处方中木香、香附、牵牛子进行了薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱法测定了制剂中α-香附酮。所建立的方法具有分离效果好、重复性好，专属性强，准确等优点，可以有效地控制本品的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-20A高效液相色谱仪，配备二极管阵列检测器 (PDA)型;硅胶G预制板 (烟台市化学工业研究所);硅胶G预制板 (青岛海洋化工厂分厂);MN-硅胶G预制板TLC-plate SIL G-25。

1.2 对照品及对照药材 去氢木香内酯对照品 (批号1525-200103)、α-香附酮对照品 (批号110748-200507)、咖啡酸对照品 (批号110885-200102)。香附对照药材 (批号121059-200505)、牵牛子对照药材 (批号121024-200604)，均购于中国药品生物制品检定所。璇机化积膏样品3批(批号分别为20100616，20100621，20100816)，由国际传统医药研究院提供;甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

2.1 木香中去氢木香内酯的薄层鉴别 取本品1片，除去盖衬，剪成小块，加甲醇30 mL，加热回流30 min，放冷，滤过，滤液加中性氧化铝5 g，充分振摇1 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，取上清液，作为供试品溶液。另取不含木香的阴性样品制剂，同法制成木香阴性样品溶液。再取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(20∶1)为展开剂，展距为12 cm，喷显色剂5%香草醛硫酸溶液后，热风加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺木香阴性样品无相应斑点。见图1。

图1 璇机化积膏中木香的TLC图谱

2.2 香附的薄层色谱鉴别 取本品3贴，除去盖衬，剪碎，置250 mL圆底烧瓶中，加水100 mL，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分并溢流入烧瓶时为止，再加乙酸乙酯1 mL，加热回流至沸，并保持微沸2 h，放冷，分取乙酸乙酯液，作为供试品溶液。取不含香附的空白制剂，同法制成阴性样品溶液。取香附对照药材1 g，置250 mL圆底烧瓶中，同法制成对照药材溶液。再取α-香附酮对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8.5∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 (254 nm)下检视观察。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。缺香附阴性样品无相应斑点。见图2。

图2 璇机化积膏中香附的TLC图谱

2.3 牵牛子的薄层色谱鉴别 取本品3贴，除去盖衬，剪碎，置烧杯中，加水70 mL，煎煮20 min，放冷，滤过，滤液加盐酸调节至pH值为1～2，用乙酸乙酯30 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取不含牵牛子的阴性样品制剂，同法制成阴性样品溶液。另取牵牛子对照药材2 g，加水70 mL，煎煮20 min，放冷，离心，取上清液，加盐酸调节至pH值为1～2，用乙酸乙酯30 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。再取咖啡酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述4种溶液各5 μL，点于同一高效硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(93∶9∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视观察。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。缺牵牛子阴性样品无相应斑点。见图3。

图3 璇机化积膏中牵牛子的TLC图谱

3 香附中α-香附酮的HPLC法测定

3.1 色谱条件 色谱柱为Phenomenex Gemini 5μm110ÅC18(4.6 mm×250 mm);流动相为甲醇-乙腈-水 (55∶5∶40);柱温为40℃，检测波长为254 nm。理论板数按α-香附酮峰计算应不低于6 000。

3.2 对照品溶液的制备 取α-香附酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含5 μg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备 取本品5片，除去盖衬，剪除不含药部分的底衬，将含药部分对折 (以防混匀及取样过程黏连)，称定总质量，剪碎，混匀，取约1片的量，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙酸乙酯20 mL，加热回流30 min，取出，加甲醇50 mL，振摇均匀，置水浴上继续回流10 min，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用甲醇分次洗涤药渣及滤器，洗液并入量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10 mL，置具塞锥形瓶中，加碱性氧化铝 (100～200目)3 g，振摇2 min，置冷水浴中放置15 min后，取上清液，用微孔滤膜 (0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

3.4 阴性样品溶液的制备 按处方比例及制剂制备工艺制备不含香附的阴性样品，再按3.3项下方法制备，即得。

3.5 专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，依法测定，结果阴性样品在α-香附酮相应保留时间处未见色谱峰，表明阴性样品对检测无干扰。见图4。

图4 α-香附酮测定HPLC图谱

3.6 线性关系考察 分别精密吸取α-香附酮对照品溶液(质量浓度为 1.098 mg/mL)0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.0、4.0 mL，分别置100 mL量瓶中，各加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，记录依法测定峰面积，以α-香附酮对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为:Y=2 576 661X+460(r=1.000 0)，表明α-香附酮对照品在0.010 98 μg ～0.439 2 μg范围内线性关系良好。

3.7 精密度试验 取同一供试品溶液 (批号20100616)，连续进样6次，每次10 μL，注入液相色谱仪，测定，结果α-香附酮峰面积RSD为0.96%。

3.8 稳定性试验 取同一份供试品溶液 (批号20100616)，按定量测定方法，分别在0、2、4、6、11、19、28 h进样测定。结果α-香附酮峰面积RSD为1.09%，表明供试品溶液在配制后28 h内基本稳定。

3.9 重复性试验 取本品20片，除去盖衬，称定质量，剪碎，取约1片的质量 (共取6份)，精密称定，依法测定。结果α-香附酮含量重复性良好，RSD为2.65%，方法重复性良好。

3.10 加样回收率试验 取约半片的量 (共取6份)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入用乙酸乙酯配制的质量浓度为0.230 6mg/mL的α-香附酮对照品溶液1.0mL，再加入乙酸乙酯19 mL，按供试品溶液同法制备，测定。结果α-香附酮对照品平均回收率为99.02%，RSD为2.88%，见表1。

3.11 样品测定按上述测定方法，对测定3批璇机化积膏样品，结果见表2。

4 讨论

4.1 木香的薄层鉴别［1-3］中，贴剂用甲醇回流提取后，溶液中有部分脱敏胶辅料，致使点样困难，加中性氧化铝可吸附脱敏胶及一些其他杂质。木香中主要含有倍半萜内酯类成分去氢木香内酯和木香烃内酯，木香烃内酯对热不稳定，在本制剂中曾同时对去氢木香内酯和木香烃内酯进行检测，结果供试品在木香烃内酯相应位置上未检出清晰的薄层斑点，故仅以去氢木香内酯为对照。

表1 回收率试验结果

表2 样品中α-香附酮测定结果(n=3)

4.2 木香的薄层鉴别中曾对展距进行考察，结果展距为12 cm左右时，分离效果最好，故确定展距为12 cm，另对本薄层鉴别的耐用性进行了考察，考察项目为3个不同厂家的薄层板、不同展开温度 (室温25℃和低温6℃)、湿度 (相对湿度45%和75%)，结果表明不同厂家薄层板、不同的温湿度条件下本薄层鉴别均能获得较好的分离效果。

4.3 贴膏剂的质量控制研究［4-10］中，最大问题是检测成分的提取和净化，本品为含亲脂性基质的贴剂，有较强的黏附性，为有效提取α-香附酮及尽可能少的带入基质，对提取溶剂进行预筛选，分别采用甲醇、乙醇、异丙醇、乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷提取，结果乙醚、三氯甲烷、乙酸乙酯能较好溶解药膏，但同时贴膏的赋形剂也较多溶出，用甲醇为溶剂提取液颜色较浅，表明甲醇不能较好渗透进本贴剂中，提取效果较差，同时，由于α-香附酮具有挥发性，供试品不宜采用蒸发等浓缩过程，故采用乙酸乙酯提取后加甲醇使赋形剂沉淀析出的提取方法。为进一步除去残留的赋形剂及制剂中其他黄酮等成分的干扰，又采用碱性氧化铝处理净化样品。

4.4 参照文献的方法［11-13］，α-香附酮定量测定的流动相曾采用①甲醇-水 (75∶25)，②甲醇-水 (70∶30)，③甲醇-水 (65∶35)，④甲醇-水 (60∶40)，⑤乙腈-水 (60∶40)，⑥乙腈-水 (55∶45)，⑦乙腈-水 (45∶55)体积流量为1.0 mL/min，⑧甲醇-乙腈-水 (55∶5∶40)，体积流量为1.0，柱温分别采用30℃与40℃，结果流动相⑧甲醇-乙腈-水 (55∶5∶40)，柱温40℃，分离效果较好，故采用甲醇-乙腈-水 (55∶5∶40)为流动相，柱温40℃。

4.5 采用本文色谱条件用归一化法计算，α-香附酮对照品纯度为96.08%。

4.6 分别采用不同品牌色谱柱 (1)Phenomenex Gemini 5μm110ÅC18(4.6 mm ×250 mm)，(2)COSMOSIL Packed Column 5C18-MS-Ⅱ (5μm，250 mm ×4.6 mm)， (3)YMC Packed ProC18(5 μm，250 mm ×4.6 mm)， (4)Inertsil ODS-3(5 μm，250 mm×4.6 mm)，进行测定，结果α-香附酮峰在各种色谱柱均分离良好，空白无干扰，不同色谱柱间测定α-香附酮的RSD为2.42%，表明本HPLC方法有较好的耐用性。

［1］周 军，张 晶，金兆祥，等.济坤丸质量标准研究［J］.天津药学，2010，22(1):28-30.

［2］李冬梅，刘永利.中国药典品种参苏丸中木香鉴别的商榷［J］. 时珍国医国药，2010，21(7):1820.

［3］姚令文，郑笑为，刘 燕，等.治痢片的质量标准研究［J］.中国药品标准，2009，10(5):342-346.

［4］郭汉文，王怡君，孔黎冰，等.HPLC法测定骨友灵贴膏中延胡索乙素的含量［J］.中国药品标准，2007，8(4):32-34.

［5］韩建伟，刘 颖，魏元锋，等.HPLC法测定痛经膏贴中黄芩苷和汉黄芩素含量研究［J］.中国实验方剂学杂志，2008，14(8):8-10.

［6］郭 玫，余晓晖，陈卫林，等.咳喘灵贴膏质量标准研究［J］.中国中医药信息杂志，2006，13(3):47-48.

［7］樊敏伟.如意金黄贴膏剂质量标准的研究［J］.中成药，2005，27(7):864-866.

［8］刘建芳，毕开顺.肾泰贴膏中蛇床子素的含量测定［J］.中国中药杂志，2002，27(10):745-746.

［9］刘卓妍，梁勇坤，徐履琴.胃痛贴膏的质量标准研究［J］.中成药，2000，22(6):407-409.

［10］叶立新，张树平，赖素萍，等.乳癖宁贴膏中淫羊藿苷的含量测定方法［J］.中国中药杂志，2005，30(12):944-945.

［11］许世辉.高效液相色谱法测定妇科调经片中α-香附酮的含量［J］.海峡药学，2010，22(9):62-63.

［12］侯立静，吴丽丽，李英霞.不同产地香附和醋炙香附中α-香附酮含量测定［J］.陕西中医，2011，32(4):480-481.

［13］翟志光，牛 欣，冯前进，等.HPLC测定良附口服液中α-香附酮的含量［J］.中国中药杂志，2007，32(10):988-989.