HPLC法测定升麻葛根颗粒中葛根素的含量 *

2012-09-06李建华申庆亮

中医研究 2012年8期

李建华，胡倩，申庆亮

(1.武警河南总队医院，河南郑州450052;2.济宁神农中医药研究所，山东兖州272100)

升麻葛根颗粒是从仲景葛根汤化裁而来［1］，是由升麻、葛根、赤芍、甘草为原料，经提取、浓缩，加蔗糖、淀粉为辅料制成的中药复方制剂，具有解肌透疹、和营解毒的作用［2］，用于麻疹欲发而不畅或发而不透，是帮助透疹的常用方剂［3－5］，临床运用范围广。升麻葛根颗粒处方中葛根为主药，葛根中主要含葛根素［6］，葛根素是葛根的主要药理活性成分。为有效控制产品质量，本研究选择葛根素为含量测定指标，采用高效液相色谱法测定其含量。

1 药品、试剂与仪器

升麻葛根颗粒，自制，批号20111207，20111103，20111015。葛根素，化学对照品，中国药品生物制品检定所提供，批号110752－200608;甲醇，色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司产品，批号SP0050;水，为重蒸馏水，自制。LC－10ATVP高效液相色谱仪;SPD－10VP紫外检测器，日本岛津公司产品;N－2000双通道数据工作站，浙江大学智能信息工程研究所提供;FA－1004电子分析天平，上海天平仪器公司产品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

ODS C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm);流动相为甲醇－水(25∶75);检测波长250 nm，体积流量1.0 mL/min，进样体积20 μL。在上述条件下，理论板数按葛根素计算不低于2000。

2.2 溶液的制备

对照品溶液的制备:精密称取葛根素对照品8.01 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。精密吸取5 mL于10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

供试品溶液的制备:取升麻葛根颗粒适量，研细，混匀。取粉末约0.8 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，超声处理20 min，放至室温，滤过，弃去初滤液，续滤液用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

阴性对照品溶液的制备:按处方自制不含葛根的升麻葛根颗粒100 g，取适量按供试品溶液制备方法制备缺葛根阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验

精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液、缺葛根阴性对照品溶液各20 μL，依次进样，测定，记录色谱图，见图1～3。供试品色谱中，与对照品在相同的保留时间位置上有对应的吸收峰出现，缺葛根阴性对照色谱则在相对应的位置上无相应的吸收峰检出。结果表明，本品中除葛根外的其他药物对含量测定无影响。

2.4 标准曲线的制备

精密称取葛根素对照品8.01 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取1，2，5，7，10 mL 置 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μL，以葛根素的峰面积(A)对质量分数(C)进行线性回归，得回归方程，Y=69 608X+171 719，R2=0.999 8。结果表明，葛根素在浓度16.02～160.20 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系。见表1、图4。

图1 葛根素对照品HPLC色谱图

表1 线性关系考察试验结果

2.5 精密度试验

取批号为20111103的升麻葛根颗粒5 g，研细，取约0.8 g，精密称定，按2.2项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，连续进样 6次。结果显示，平均峰面积为4 835 124，RSD=0.77%。结果表明，仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验

取批号为20111207的升麻葛根颗粒5 g，研细，按2.2项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，放置不同时间，按上述色谱条件进样测定，记录色谱图并计算结果。结果见表2。结果显示，平均峰面积4740632，RSD=0.86%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

分别精密称取本品(批号20111103)约0.8 g，共6份，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别测定其含量。结果见表3。结果表明，本方法重复性良好。

表2 稳定性试验测定数据

表3 重复性试验测定数据

2.8 加样回收率试验

取批号为20111103的样品约0.8 g，精密称定，按2.2项下供试品制备方法操作，制备供试品溶液，测定葛根素的含量为3.1589 mg/g。另取同批次样品约0.4 g，共9份，精密称定，分别加入葛根素对照品1.5 mg(精密称取葛根素对照品15 mg置20 mL量瓶中加甲醇溶解并定容至刻度，精密量取2 mL样品中)，置50 mL量瓶中，按供试品溶液的制备方法制成加样回收供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和加样回收供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定，计算回收率，结果见表4。

加样回收率=(测得总量－样品含量)/加入量×100%。

结果表明，葛根素加样平均回收率为99.93%，RSD值为0.60%，符合含量测定方法学验证的有关技术要求。

2.9 样品含量测定及含量限度的确定

精密称取葛根素对照品适量，加甲醇－水(25∶75)制成每mL含0.08 mg的葛根素溶液，作为对照品溶液。取本品粉末约0.8 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加入流动相，用流动相稀释至刻度，超声处理20 min，放冷，滤过，弃去初滤液，取续滤液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，作为供试品溶液。分别精密吸取上述两种溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表5。