露兜 簕 果萜类化合物的分离和鉴定

武嫱，章程辉，牛雷，常刚，詹丽丽

（海南大学食品学院，海南海口 570228）

露兜簕（Pandanus tectorius Sol.）又名露兜树、野菠萝、假菠萝、簕菠萝、山菠萝，为露兜树科露兜树属的果实，形态奇特，坚硬而含木质，少许肉质部分可食用[1]。本科共3属，约800种，广布于亚洲、非洲和大洋洲热带和亚热带地区，大多为海岸或沼泽植物，为东半球热带特征植物[2]。我国有2属，10种，2变种，分别为藤露兜属（Freycinetia Gaud.）和露兜树属（Pandanus Linn.f.）。海南及广东有1属（露兜树属），5种，果实为卵球形或圆柱状聚花果，由多数核果或核果束组成，或成浆果状，形似“菠萝”，故有“野菠萝”之称[3]。《纲目拾遗》“露花粉”条引《粤志》云[4]：“其生于土者，蕊落结子，大如瓜，日路头花，多不香；惟露花盛夏时露花始熟，以花覆盆盎晒之，香落茶子油中，其气馥烈，是日露花油”。

本属植物多为常绿分枝灌木或小乔木，少数为草本，除经济价值较高，作为绿化和观赏树种之外，本属植物的果实、花、叶和根等部位也具有较好的药用价值。如露兜簕的气生根和果有平肝清热、去湿利尿的功效，可治感冒发热、肝火头痛、尿路感染、肾炎水肿等；叶子民间用于治疗麻疯病、梅毒和疥癣；雄花周围的白色苞片含有浓烈玫瑰香味的精油，是很好的兴奋剂和抗菌剂[5]。此外，露兜簕果还有降血压、治痢疾的作用，其果核可治痔疮，在民间有一定的药用历史。

目前国内外关于露兜树属化学成分的研究不多，主要报道的成分有挥发油[6-7]、甾体[8]、脂肪酸[9-10]、酯类[11]，胡萝卜苷[12]等。本文选择以露兜簕的果实为研究对象，首次对露兜簕果中的萜类化合物进行提取分离研究，扩大其药用价值以及综合开发利用等提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料、试剂和仪器设备1.1.1 实验材料

所用实验材料为露兜簕（P.tectorius Sol.）的新鲜果实，并经杨小波教授进行了鉴定。经干燥、粉碎、过20目筛的露兜簕果的粉末。

1.1.2 试剂仪器设备

薄层层析硅胶：GF254，青岛海洋化工厂，（105℃活化30 min，置于干燥器中备用）；常压柱：2 cm×30 cm，4 cm×50 cm，5 cm×75 cm，北京玻璃仪器厂；旋转蒸发仪：RV06 ML 2－B型，德国IKA公司；紫外可见分光光度计：UV－2450型，日本岛津公司；红外光谱仪：EQUINOX 55型，美国Unicam公司；核磁共振波谱仪：400MHZ型，瑞士Bruker公司。

1.2 预实验

1.2.1 提取分离的方法选择

对已制备的露兜簕果的乙醇提取物进行了化学成分的预实验，结果见表1。

表1 露兜簕果乙醇提取物化学成分的预实验结果Table 1 The pre-experimental results of chemical composition of ethanol extract

结果显示：露兜簕果中可能含有糖苷类、萜类、黄酮类、生物碱类、甾体类化合物。因此，根据以上的实验结果和相关文献，设计使用95%的乙醇溶液提取露兜簕果中的化学成分，再使用硅胶柱层析进行分离。

1.2.2 薄层条件的选择

进行薄层条件的选择中选择适当的展开剂是首要任务。一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷＜己烷＜苯＜乙醚＜THF＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇。使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂，通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，常用的溶剂组合有：Petroleumether/Ethylacetate；petroleumether/Acetone；Petroleumether/Ether；CHCl3/MeOH等。展开剂的比例要根据文献报道，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。

本实验选用活化后的硅胶GF254的薄层层析板，分别比较了常用的展开系统，环己烷－乙酸乙酯、石油醚－乙酸乙酯、氯仿－甲醇等，选用通用显色剂：10%硫酸乙醇溶液和碘显色，并考虑安全、经济、环保等问题，最后发现，石油醚部分的萃取物在石油醚－乙酸乙酯展开系统下分离效果较佳。

因此，在对露兜簕果的化学成分分离的过程中，选用石油醚部分进行研究，并采用石油醚－乙酸乙酯系统进行梯度洗脱。

2 提取和分离

2.1 提取与粗分离

取上述露兜簕果粉末5.0 kg，用3倍量的95%乙醇加热回流提取3次，每次提取时间分别为2 h；过滤，合并提取液；提取液经减压浓缩至无醇味，得到浸膏；浸膏用少量的水混悬；然后依次用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇各萃取4次～5次，至萃取液颜色无明显变化；合并各部分萃取液，浓缩成浸膏，冰箱保存，备用。

2.2 硅胶柱层析分离与纯化

将上述石油醚部分的浸膏用少量的石油醚溶解，称取约15 g硅胶倒入与之拌匀，挥干溶剂，研匀，作为要上柱的样品。称取柱层析硅胶约500 g以石油醚∶乙酸乙酯=9∶1为溶剂，湿法装柱后上样，再以石油醚－乙酸乙酯（1∶9～9∶1）梯度洗脱，每 200 mL 为一份收集馏分。同时以石油醚：乙酸乙酯为展开剂，TLC跟踪检查，并合并相同馏分。

最后，在石油醚∶乙酸乙酯=2∶8的洗脱部分合并得到化合物F5的粗品，经重结晶得到化合物F5－1（25 mg）。

3 化合物的结构鉴定

将最后分离纯化得到的F5－1取部分溶解于氘代氯仿（CDCl3），利用400 MHz核磁共振波谱仪，测定氢谱（1H－NRM）和碳谱（13C－NRM）；再将部分溶于乙腈，进行红外光谱分析；此外，还利用液相色谱－质谱联用技术测定出其分子量。通过对各谱图的分析，并结合参考文献，确定该化合物五环三萜类，分子量456，分子式为C30H48O3，结构式如图1。

化合物F5－1：无色针晶状，无臭，无味，溶于甲醇、乙酸乙酯、乙醇、苯、乙醚、丙酮和氯仿，几乎不溶于水，对酸碱均不稳定。mp 287℃～290℃，点样于硅胶板上，紫外灯下无荧光，硫酸显紫红色斑点，Liebermann－Burchard反应呈阳性。

以上数据与文献报道[13]的齐墩果酸基本一致，故鉴定化合物F5-1为齐墩果酸。

4 小结与讨论

4.1 小结

露兜簕果的乙醇提取物经不同的有机溶剂萃取后，采用薄层色谱、硅胶柱层析、重结晶等方法进行分离纯化，得到物质F5-1，利用波谱技术结合化合物的理化性质以及参考文献等，鉴定该化合物为五环三萜类化合物，齐墩果酸（3β-hydroxy-olea-12-en-28-oic acid），是首次从该科植物中分离得到。齐墩果酸主要具有护肝降酶、促进肝细胞再生、抗炎、强心、利尿、抗肿瘤等作用，还具有降血糖、降血脂、镇静的作用，是开发治疗肝病和降血糖等药物的有效成分。因此首次在露兜属树属中首次分离出，对进一步研究该植物的药用价值等具有重要的意义。

4.2 讨论

1）选择分离方法时，通常采用经典的柱色谱法进行分离，其中硅胶是应用最多的填料，本实验就是利用反复硅胶柱层析结合薄层色谱进行分离。硅胶柱层析的关键是选择分离效果好的洗脱体系，并采用TLC进行追踪检测。此外，装柱也是柱色谱分离成败的关键因素之一，湿法装柱分离效果好，易操作，因此在实验过程中采用湿法装柱。

2）由于露兜簕果中的成分复杂，用单一的分离手段不易得到理想的效果，本研究同时结合其他分离手段纯化的效果会更好。

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[2]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京:科学出版社,1992:12-18

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[4]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999:536

[5]莱斯莉·布雷姆尼斯(Bremness,L.)药用植物[M].台湾猫头鹰出版社,译.2版.北京:中国友谊出版公司,2007:70

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[13]胡金锋,叶仲林,沈凤嘉.云南甘草中新三萜成分的研究[J].药学学报,1995,30(1):27-33