五种检测淋球菌方法的比较

颜俊青，邢俊，王丹丹

(海南省人民医院检验科，海南海口570102)

五种检测淋球菌方法的比较

颜俊青，邢俊，王丹丹

(海南省人民医院检验科，海南海口570102)

目的探讨5种检测方法对淋球菌的检出率及其影响因素，为临床淋球菌性尿道炎、阴道炎的诊断提供检测方法上的参考。方法用直接涂片法、快速检查试纸片法、淋球菌培养法、SPA协同凝集法、金标免疫斑点法分别对160份样本进行淋球菌检测。结果以淋球菌培养法为检测“金标准”，直接涂片法敏感性和特异性分别为72%和63%、快速检查试纸片法为79%和68%、SPA协同凝集法为93%和71%、金标免疫斑点法为95%和96%。结论从各方面因素(如快速性、特异性及敏感性等)考虑，SPA协同凝集法及金标免疫斑点法适合作为门诊的常规检查方法。

淋球菌；分泌物；检测方法；敏感性

淋球菌是引起尿道、阴道感染的常见菌，正确检测淋球菌，是诊断和治疗淋球菌性尿道炎、阴道炎的关键。几年来，我们使用过的检测方法有多种，包括直接涂片法、淋病快速检查试纸片法、淋球菌培养法、SPA协同凝集法及金标免疫斑点法。5种方法都有其各自的优缺点，从2010年4月至2011年10月，我们同时用5种方法分别对160例疑似淋球菌性尿道炎阴道炎患者的分泌物作比较性检验，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料采集160例门诊疑似患者的尿道或阴道分泌物，其中男108例，女52例，同时抽取静脉血2 ml用于金标免疫斑点法检测。

1.2 试剂革兰染色剂由深圳贝索公司提供(生产批号：0411061)，淋球菌快速检查试纸片购自桂林中辉生物技术有限公司(生产批号：2010030101)，淋球菌选择培养基由广东省江门市凯林生物公司生产(生产批号：100207)。SPA协同凝集试验试剂盒由白求恩医科大学地方病研究所生产(生产批号：2010030909)。金标免疫斑点试验试剂盒由福建三明市蓝波生物技术研究所生产(生产批号：201002011)。

1.3 方法

1.3.1 直接涂片法①将分泌物厚薄适中地制成涂片，待涂片自然干燥后固定；②加结晶紫染液1 min，清水冲洗；③加碘液1 min，水洗；④加脱色液，不时摇动30 s，至无紫色脱落为止，水洗；⑤加复染液30 s水洗；⑥待干后用油镜寻找革兰氏阴性双球菌。

1.3.2 快速检查试纸片法用洁净棉签将分泌物(如分泌物太稠，可先用生理盐水浸湿棉签后再取)涂于桔红色的试纸片，也可用试纸片直接粘取分泌物进行检测。粘涂分泌物后10～20 s，即可与比色表进行比较，试纸片颜色在阴性范围，表示非淋菌感染，颜色在阳性范围，表示可能有淋球菌感染。

1.3.3 淋球菌培养法将分泌物均匀涂布于培养基上，置烛缸(含5%～10%CO2环境)37℃温箱培养24～48 h。选择圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色、有粘性的菌落制作成薄片。革兰染色，油镜寻找革兰阴性双球菌。同时进行氧化酶试验，如氧化酶反应呈阳性，再加上菌体、菌落形态等符合者，基本上可判断为淋球菌。必要时，可进一步做生化鉴定。

1.3.4 SAP协同凝集试验取1滴生理盐水于洁净玻片上，与待检标本混合，或用浸有湿盐水的棉签取分泌物点于玻片上，加1滴试剂，用玻片角轻轻搅拌混匀，放置1～3 min，呈现肉眼可见凝集颗粒、液体透明者为阳性，2 min内无肉眼可见之凝集颗粒为阴性。

1.3.5 金标免疫斑点法①加试剂A2滴于反应板孔中，待液体充分吸入；②用吸管加样(血清用生理盐水作4倍稀释)0.15 ml(4滴)于反应板孔中，待液体充分吸入；③去除蓝色过滤盖；④加试剂B3滴于反应板孔中，待液体吸入；⑤后观察结果；⑥结果判断：孔中央有红色圆斑者为阳性，无红色圆斑者为阴性。

2 结果

以淋球菌培养法为“金标准”，在160例疑似患者样本中检出淋球菌阳性样本128例，同时比较其他4种方法的检出敏感性和特异性。见表1。

表1 4种检测方法敏感性和特异性比较(%)

3 讨论

本研究结果显示，检测的敏感性由低到高依次是：直接涂片法、快速检查试纸片法、SPA协同凝集法、金标免疫斑点法、淋球菌培养法。5种方法中，直接涂片法的敏感性最低(72%)，与韩景银等[1]报道的结果(68%)相近。其主要原因可能是部分患者正在治疗或曾经治疗过，或治疗不当已转变为慢性炎症，致使分泌物中淋球菌数大大减少所造成。其次，女性分泌物中杂菌过多也产生一定的影响。有资料表明，在男性患者中敏感性为90%，女性为50%～60%，因此，世界卫生组织推荐用培养法检查女性患者[2]。

快速检查试纸片法最大的优点就是“快速”(10～20 s)[3]，该方法利用产β-内酰胺酶的淋球菌产生的β-内酰胺酶，破坏青霉素中的β-酰胺环形成青霉噻唑。但是β-内酰胺酶并非淋球菌所独有，能引起泌尿系感染的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等，也可以产β-内酰胺酶[4]，因此该法缺乏特异性。即使试纸颜色在阳性范围，也只表示可能感染淋球菌，需进一步作确证试验。本实验所检测敏感性为79%，与常同洁[5]所报道的83%相似。

SPA协同凝集试验，是用已知抗体来检测未知抗原的一种免疫反应。由于有特异性标记的葡萄球A蛋白(SPA)的介导，从而使反应的敏感度显著提高。该法除具有特异性强、敏感度高的特点外，还有操作简便、不受杂菌干扰，对初期感染(尤其是女性)患者的诊断该法不失为一种可靠的检测方法。本实验所测敏感性达93%，与杨勤德等[6]所报道的检测结果(92%)基本相同，但是对菌量太少的慢性患者的诊断则不如金标免疫斑点法。

金标免疫斑点法，其反应原理是：斑点反应板上的固相淋球菌抗原(人工合成多肽)特异地与血清中抗淋球菌抗体(IgG或IgM)结合形成复合物，胶体金标记的抗人IgG红色圆斑。该法与SPA协同凝集法虽然都是一种特异性很强的免疫学反应，但不同的是，该法是用已知抗原检测未知抗体，而且使用胶体金做标记以提高反应的灵敏度。由于该法检测的对象是血清中的抗淋球菌抗体，只有在抗体产生之后且达到一定的滴度方能出现阳性反应。所以该法对初期感染的诊断不如SPA协同凝集法敏感。本实验所检测敏感性达到95%，较马远方等[7]所报道的87%为高，这可能跟所选病例数及地域差异有关。

淋球菌培养法，目前国外推荐选择培养基有改良的TM培养基和NYG培养基。国内采用巧克力琼脂或血琼脂培养基，均含有抗生素，可抑制许多其他细菌生长，文献报道，该法培养敏感性男性为80%～95%，女性为80%～90%[8]，与我们的实验结果较接近。淋球菌培养法的检出率虽然比较高，但操作较为繁杂，耗时也较多，不利于门诊快速诊断。

总之，从快速性、敏感性及特异性等方面综合考虑，我们主张以SPA协同凝集法及金标免疫斑点法作为门诊的常规方法，以直接涂片法及淋球菌培养法作为协助方法。

[1]韩景银,魏丽华,王玉英,等.直接涂片法检查淋球菌技术的实验室控制[J].陕西医学检验,2004,7(1)：63.

[2]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程[M].南京：东南大学出版社,2004：459.

[3]吴志华.现代性病学[M].广州：广东人民出版社,2006：98-117.

[4]吕火祥,刘建栋,沈蓓琼.全自动细菌分析系统在检测产超广谱β-内酰胺酶细菌中的临床应用[J].中华医学检验杂志,1999,22(5)：284-286.

[5]常同洁.淋病快速检查试纸片临床使用观察[J].现代中西医结合杂志,1996,32(6)：18.

[6]杨勤德,张玉芳,李新忠.SPA协同凝集试验快速检测淋球菌[J].临床荟萃,1997,(18)：848.

[7]马远方,孙会升.免疫斑点法检测淋球菌抗原的研究[J].中华皮肤科杂志,1992,25(5)：309-310.

[8]王振勇,洪为松,杨胜.聚合酶链反应与淋球菌培养法检测淋病奈瑟茵的比较研究[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志,2005,4 (4)：245-246.

R446.5

B

1003—6350（2012）18—084—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.040

2012-06-11)

颜俊青(1973—)，男，海南省万宁市人，主管检验师，本科。