复方中药CRFC-2对小鼠食物过敏模型拮抗作用的实验研究

满永宏 包东武

复方中药CRFC-2对小鼠食物过敏模型拮抗作用的实验研究

满永宏 包东武

目的研究复方中药CRFC-2在小鼠食物过敏动物模型中拮抗花生变态反应的效果及机制。方法以花生粗提物和金黄色葡萄球菌肠毒素B诱导花生过敏小鼠动物模型，分别经CRFC-2处理和胃肠道激发后，检测过敏症状、直肠体温、血管渗出、组胺水平、血清特异性抗体水平。结果CRFC实验组小鼠未出现明显的过敏症状。结论复方中药CRFC-2在小鼠动物模型中能够拮抗花生诱导的食物变态反应。

食物过敏;CRFC;复方中药

多数花生过敏是由IgE抗体介导的I型超敏反应，可以引起血压降低、面部和喉咙肿胀等症状阻碍呼吸，从而导致休克。同时，花生过敏也是食物过敏中导致死亡人数最高的一种，90%因食物过敏引发的死亡都是由花生导致的，而西医对花生过敏尚缺乏有效的预防手段［1］。先前的研究中，我们已经证实复方中药CRFC-1可以在食物过敏小鼠动物模型中阻断变态反应，本实验去掉了艾叶、黄苓两味中药，研究其是否具有相同的功能。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级Balb/c小鼠50只，鼠龄6～8周，雄性，体重18～20g，购自郑州大学实验动物中心。

1.2 复方中药CRFC-2由当归、黄芪、香附、荆芥、麻黄、陈皮、党参、黄连、灵芝组成。原材料购自南阳市乾景中药村有限责任公司，产地明确，并经南阳医学高等专科学校中医系教研室鉴定并煎制，含原药材0.16g/ml，置于4℃冰箱备用。

1.3 试剂 山羊抗小鼠IgE抗体为Serotec公司产品;组胺检测试剂盒为eBioscience公司产品;小鼠组胺ELISA试剂盒为The Binding Site，Inc公司产品;Evan’s蓝染料为上海如吉生物技术有限公司产品;金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)购自中国军事医学研究院;花生粗取物(WPE)按文献方法制备［2］。

1.4 给药及分组 50只实验小鼠随机分为CRFC-2组(n=25)和对照组共两组(n=25)。2mg WPE与10μg SEB混合，共溶于400μl 0.2M重碳酸盐中，灌胃喂服小鼠每周2次，连续3周。从第3周开始，CRFC-2组按10ml/kg体质量取复方中药CRFC-2灌胃，对照组给予等体积蒸馏水，2次/d，连续7周(3～9周)。在第5周和第7周，分别给予2mg WPE与10μg SEB混合物灌胃以维持致敏状态。在第10周，两组均以100mg WPE灌胃进行胃肠道激发。

1.5 过敏症状检查 WPE灌胃5～10min之后，小鼠开始出现症状，30～50min达到高峰，评分标准如下:0-无症状发生;1-搔挠鼻子及头部;2-呼吸部位毛竖起、眼周和唇部水肿增加或腹泻;3-口周及尾巴紫绀、呼吸困难或震颤及痉挛;5-死亡。

1.6 血管性渗出检查 WPE灌胃激发前，从小鼠尾静脉注入 Evan’s蓝染料100μl(0.5%)，胃肠道激发后30～40min之后，检查小鼠四肢变蓝程度确定血管渗出性。

1.7 直肠温度检查 胃肠道激发后25min，以体温计测量小鼠直肠温度。

1.8 血浆组胺水平检测 胃肠道激发后30min取血约0.8ml，室温放置2～3h，离心取上层血清检测组胺水平。

1.9 血清特异性IgE检测 CRFC组和对照组于第3、5、9周于尾静脉取血，分别贮存于-20℃，最后同时检测血清特异性IgE水平。

2 结果

2.1 过敏症状 CRFC组和对照组激发后的体征结果如表1所示。

表1 胃肠道激发后小鼠的变态反应体征

2.2 血管性渗出检查 对照组存在明显的血管渗出性改变(蓝色)，而CRFC-2组未见此特征。

2.3直肠温度检测 CRFC-2组直肠平均温度为37.4℃，而对照组为34.4℃，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.4 血浆组胺水平检测 CRFC-2组组胺水平为(51±25)nmol/L，对照组为(5421±2836)nmol/L，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

2.5 小鼠血清特异性IgE CRFC-2组和对照组在第3周和第5周，血清特异性卵清蛋白IgE水平无明显差异，第9周两组血清特异性卵清蛋白IgE的差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 CRFC-2组及对照组血清特异性卵清蛋白IgE水平(nmol/L)

3 讨论

花生过敏是具有较高致死率的变态反应，至今尚无有效的治疗手段。虽然部分新型免疫疗法可以在一定程度上预防其发生，但还没有能完全降低或阻断其严重症状的方法。

多数花生过敏为I型速发型超敏反应，其发病机制中，IgE抗体的产生是重要的中心环节。花生中的Arah1和Arash2蛋白诱导机体产生食物特异性IgE抗体，IgE和过敏原通过高亲和力的IgE受体(FceRI)，激活已致敏的肥大细胞及嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放组胺等生物活性介质，引起毛细血管扩张、通透性增加、平滑肌收缩、腺体分泌增加，产生一系列局部或全身性临床症状［3］。

本研究以花生粗提物(WPE)和金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)混合物致敏小鼠，诱导建立花生过敏动物模型。对照组小鼠出现呼吸困难、眼周和唇部水肿等症状，血清中特异性IgE水平上升，这与Kirthana的研究结果一致［4］。

研究结果显示，CRFC-2复方中药在小鼠模型中可以完全预防花生过敏。在所有监测指标中，对照组表现出花生过敏症状，包括明显的过敏体症;血清特异性IgE、组胺水平显著升高;直肠温度下降，血管渗出性改变，而CRFC-2组则未出现明显的过敏症状及上述生理指标的改变。

因此，复方中药CRFC-2可以在小鼠花生过敏动物模型中阻断花生过敏原诱发的食物变态反应，该方的毒理作用及对人类花生过敏的治疗效果有待进一步研究。

［1］刘文忠，韩跃华.食物超敏反应.国外医学.消化系疾病分册，2003，23(1):3.

［2］Bock SA，Munoz-Furlong A，Sampson HA.Fatalities due to anaphylactic reactions to foods.J Allergy Clin Immunol，2001，107:191-193.

［3］Norman PS.Immunotherapy:1999-2004.J Allergy Clin Immunol，2004，113:1013-1023.

［4］Ricki M，Helm，Richard W.Nonmurine animal models of food allergy.Environ Health Perspect，2003，111(2):239-244.

Herbal formula crfc-2blocks peanut-induced anaphylaxis in food allergy model

MAN Yong-hong，BAO Dong-wu.Microbiology Laboratory of Nanyang Medical College，Nanyang 473061，China

ObjectiveThe purpose of this study was to investigate the effects and mechanism of a herbal formula，CRFC-2on anaphylactic reactions induced by peanut in a mouse model.MethodsAfter CRFC treatment for 7weeks，the mice were challenged with peanut and the anaphylactic scores rectal temperature，vascular leakage，plasma histamine levels，serum IgE were measured.ResultsAfter challenges，CRFC treated mice showed no sign of anaphylactic reactions.ConclusionCRFC-2treatment completely eliminated anaphylaxis in peanut-sensitized mice.

Food allergy; CRFC;Herbal formula

473061南阳医学高等专科学校基础医学部病免教研室