HPLC法测定合胃口服液中橙皮苷含量

张 克

河南省中医药研究院附属医院，河南郑州 450004

HPLC法测定合胃口服液中橙皮苷含量

张 克

河南省中医药研究院附属医院，河南郑州 450004

目的：建立合胃口服液中橙皮苷含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法（HPLC）测定本品中橙皮苷的含量。ODS 柱（250 mm×4.6 mm×5 μm），甲醇-2%乙酸水溶液（39:61）为流动相，流速为 1 ml/min，检测波长为 283 nm。结果：橙皮苷在 0.134 4～1.680 0 μg含量呈线性关系，r=0.999 8；加样回收率为 98.44%，RSD=1.21%（n=6）结论本法灵敏、准确、重现性好，可作为合胃口服液的质量控制指标之一。

橙皮苷；高效液相色谱法；合胃口服液；质量控制

合胃口服液是本院消化科常用制剂，由陈皮、藿香、砂仁、厚朴、鸡内金等组成，功能：理气合胃、消积导滞。陈皮为君药，具有行气、止呕、燥湿、化痰作用，橙皮苷为其主要有效成分[1]，笔者以《中国药典》2010版药典一部[2]陈皮项下橙皮苷的含量测定方法为基础，建立以橙皮苷成分的合胃口服液质量控制标准。本法可作为合胃口服液内在质量控制的定量指标。

1 仪器与试剂

Waters 2695高效液相色谱仪。Waters 2696二极管阵列检测器，Empower色谱工作站（美国 Waters）。Hypersil ODS 柱（250 mm×4.6 mm×5 μm）

橙皮苷（中国药品生物制品检验所，批号：0721-200010），甲醇（批号100821，天津四友精细化学品有限公司），水为重蒸馏水，其他所用试剂均为分析纯。合胃口服液由本院制剂室生产，生产批号依次为 101103、101104、101105。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取橙皮苷对照品8.40 mg，置25 ml容量瓶中加甲醇适量，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇2 ml混匀，加水稀释至刻度，摇匀，即得。每1毫升中含橙皮苷67.20 μg。

2.2 样品制备

2.2.1 供试样品制备 精密量取合胃口服液10 ml，加三氯甲烷提取2次（15 ml、10 ml），弃去三氯甲烷溶液，上层水液小心移置50 ml量瓶中，加甲醇振摇，并加至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2 阴性样品制备 按处方比例称取除陈皮以外的各味药材，按合胃口服液制备方法制得无陈皮的阴性口服液，按供试样品制备方法，制得无陈皮阴性样品。

2.3 标准曲线的绘制

精密吸取橙皮苷对照品溶液（浓度为0.067 2 μg/ml）2、5、10、15、20、25 μl，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。得到橙皮苷的标准曲线为：y=2.185×103x-6.576×104，r=0.999 8，橙皮苷在 0.134 4～1.680 0 μg 线性关系良好。

2.4 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液10 μl，连续进样6次，测定橙皮苷的峰面积，RSD=1.3%。

2.5 重复性试验

取合胃口服液共6份，按“2.3”项下方法分别制备供试品溶液，进样测定，测定橙皮苷的峰面积，RSD=1.9%，表明本方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于 0、2、4、8、12 h 进样，测定橙皮苷的峰面积，RSD=1.7%，表明供试品溶液在12 h内稳定。见图1。

2.7 加样回收率试验

取已知含量的样品，加入橙皮苷对照品溶液，并测定其中橙皮苷的含量，结果见表1。

图1 样品、阴性对照和对照品溶液的HPLC色谱图

表1 加样回收试验结果

2.8 样品含量测定

取合胃口服液，按上述方法操作测定其中的橙皮苷的含量，结果显示，三批样品（批号 101103、101104、101105）的含量依次为 0.473、0.487、0.455 mg/ml。

根据以上测定结果，并考虑到原料的产地来源不同等因素，暂定本品每1毫升中含陈皮以橙皮苷（C28H34O15）计，不得少于 0.40 mg。

3 结果与讨论

合胃口服液样品制备：本研究曾采用样品直接加甲醇[3-4]或超声[5]；或加氨试液使碱化[6-8]，以乙醚脱脂，再使溶液酸化后，以乙酸乙酯提取及通过大孔树脂柱（1.5 cm×12.0 cm），先以水100 ml洗涤，弃去，再以50%甲醇水溶液100 ml洗脱，水浴蒸干的方法制备样品，最后确定先以氯仿提取，除去部分脂溶性杂质，可以降低杂质峰的数量和大小，减少了杂质峰的干扰，提高了测定的精密度和准确度。

总之，用本方法测定合胃口服液的有效成分橙皮苷含量，分离效果良好，重现性好，专属性强，可以作为合胃口服液的质量控制方法。

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HPLC determination of content of hesperidin in combined stomach oral liquid

ZHANG Ke

Affiliated Hospital of Henan Institute of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou 450004，China

Objective:To establish the determination method for determining the content of hesperidin in combined stomach oral liquid.Methods:The high-performance liquid chromatography(HPLC)method was used to determine the content of hesperidin in the studied product.The Octadecylsilyl(ODS)column was 250 mm×4.6 mm×5 μm;the methanol-2%acetic acid solution(39∶61)presented mobile phase;the flow rate was 1 ml/min;the detection wavelength was 283 nm.Results:Hesperidin showed a linear relationship in the content of 0.134 4 to 1.680 0 μg,r=0.999 8.The sample recovery rate was 98.44%,RSD=1.21%(n=6).Conclusion:This method is sensitive,accurate and reproducible,and therefore can be used as one of the quality control indicators of combined stomach oral liquid.

Hesperidin;HPLC;Combined stomach oral liquid;Quality control

R286.0

A

1674-4721（2012）01（a）-040-02

张克（1974-），男，职称：主管药师；工作单位：河南省中医药研究院附属医院。

2011-06-07）