单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素含量测定*

孙维洋，李剑芳

(山东中医药大学药学院，济南250355)

蔓荆子为常用中药材，始载于《神农本草经》，在我国已有2 000余年的栽培和药用历史，具有疏散风热、清利头目的功效，主治风热感冒头痛、齿龈肿痛、目赤多泪、目暗不明、头晕目眩。《中华人民共和国药典》2010年版收载蔓荆子为马鞭草科植物单叶蔓荆(Vitex trifoliaL.var.simplicifoliaCham.)或蔓荆(Vitex trifoliaL.)的干燥成熟果实[1]。目前蔓荆子资源以野生为主，主产区有山东、江西和广西，其中山东、江西以单叶蔓荆为主[2]。传统中药以单叶蔓荆或者蔓荆的果实入药是否最为合理，蔓荆的其他部位如叶片、枝条、根能否入药，能否找到化学依据，针对这些问题，笔者在本实验中采用高效液相色谱法测定单叶蔓荆各不同器官——包括干燥的果实、叶片、枝条和根中蔓荆子黄素的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器Agilent 1200型高效液相色谱仪，G1314B VWD紫外检测器，Agilent Technologies色谱工作站。

1.2 试药本研究采用的单叶蔓荆(Vitex trifoliaL.var.simplicifoliaCham.)试材系2009年7月份取自山东牟平姜格庄镇海滩，在山东中医药大学药用植物标本园人工驯化1年，土质为棕壤土，有机质中等偏低，含较多砂砾，种植行距1.2 m，株距约1 m，为提高根系透气性，均起垄栽植，垄高约15 cm。移植蔓荆于翌年正常开花结实，2010年8月下旬于同一植株采收其果实、叶片、枝条和根系。果实的采摘以颜色变黑为标准，去除幼果及杂质;取一年生健壮枝条为枝条试材，去除叶片及枝梢;采用健壮枝条中部叶片为试材，除去病虫危害的叶片及杂质;根试材选取直径1～3 mm根，去除杂质及严重木质化部分。以上试材均采用自然晾干，粉碎，过内径0.425 mm(40目)筛后于－18℃密封贮存备用。蔓荆子黄素对照品(批号:111554-200402，中国药品生物制品检定所)，甲醇(色谱级，天津市协和昊鹏色谱科技有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱:Hypersil ODS(4.6 mm×150 mm，2.5 μm)，柱温30℃，检测波长为258 nm;流速为1 mL·min－1;流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)，上样量为20 μL，流动相经孔径0.45 μm滤膜滤过。理论板数按蔓荆子黄素峰计算应不低于4 000[1]。

2.2 对照品溶液的制备精密称取蔓荆子黄素对照品3.2 mg，置10 mL量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 mL，置10 mL量瓶，加甲醇稀释至刻度。每毫升含对照品约32 μg，备用，使用前过孔径0.45 μm微孔滤膜[1]。

2.3 供试样品溶液的制备干燥至恒重的蔓荆不同器官过内径0.425 mm(40目)筛，精密称取2 g，置具塞锥形瓶，准确加入甲醇50 mL，称定质量，加热回流1 h，冷却，再称定质量并用甲醇补足损失溶剂，摇匀，滤过待用。

2.4 线性关系考察分别用微量移液器精密吸取“2.2”项下对照品溶液40，80，120，160，200 μL，置1.5 mL EP管，再分别精密加入甲醇补齐至总体积200 μL，按上述色谱条件进样。以峰面积为纵坐标，蔓荆子黄素的浓度(μg·mL－1)为横坐标绘制标准曲线，回归方程:Y=0.033 34X+1.352 5，r=0.999 9。结果表明，蔓荆子黄素浓度在6.4～32.0 μg·mL－1与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验取同一浓度的蔓荆子黄素对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积积分值，结果其RSD为0.66%，表明仪器的精密度良好。

2.6 重复性实验精密称取蔓荆子果实干燥粉末5份，每份1 g，依“2.3”项下方法操作并测定蔓荆子黄素的质量分数。结果RSD为1.59%，表明该方法重复性较好。

2.7 稳定性实验精密称取蔓荆子果实干燥粉末1 g，依照“2.3”项方法制备供试品溶液，每隔2 h进样一次，共进样5次，结果蔓荆子黄素的峰面积RSD为1.77%，表明供试品溶液在8 h内测定结果稳定。

2.8 加样回收率实验取已测知含量的蔓荆子果实干燥粉末9份，每份1.0 g，精密称定，分别精密加入0.32 μg·mL－1蔓荆子黄素对照品溶液1.5，1.5，1.5，1.0，1.0，1.0，0.5，0.5，0.5 mL;按“2.3”项方法制备供试品溶液(相应减少加入甲醇量)，按“2.1”项色谱条件测定样品中蔓荆子黄素的含量，结果见表1。由表1可见，蔓荆子黄素的平均回收率为100.37%，RSD为1.07%。

2.9 样品测定称取不同试材粉末，每份2 g，按“2.3”项方法处理，按“2.1”项色谱条件，精密吸取20 μL进样测定，结果见表2。

3 讨论

由表2可见，同一单叶蔓荆植株中，以其干燥成熟果实中蔓荆子黄素含量最高，约为0.030 8%，而干燥叶片中的含量仅为0.012 0%，低于果实含量的40%，充分证明，仅以蔓荆子黄素为指标衡量药材质量，果实入药是最佳选择，这为传统中药中蔓荆果实入药提供了理论依据。

表1 蔓荆子黄素加样回收率实验结果Tab.1Result of recovery of vitexicarpin

单叶蔓荆叶片中蔓荆子黄素的含量虽然较低，但叶片是否可以作为入药部位仍是一个值得研究的课题:第一，叶片的生物产量较高，在结果初期或特殊的年份有可能超过果实产量;第二，叶片和果实一样是自然脱落器官，其利用不会对植株造成较大的伤害;第三，除含有一定量的蔓荆子黄素之外，其叶片还含有丰富的挥发油(本研究室未发表数据)，是否能够单独作为一种中药材，与蔓荆子在化学成分、药理作用等方面有何异同，值得进一步研究。近缘植物马鞭草科蔓荆(Vitex trifoliaLinn.)的干燥叶为傣医临床常用药材之一，香，温，入风、水塔，具有清火解毒、消肿止痛、除湿止痒的功效[3]，也是傣医传统经方雅喃满雅的(神药油)[4]和《中华人民共和国药典》[5]自1990年版即收载的傣医制剂雅叫哈顿散的配方药材之一。研究发现，蔓荆的干燥叶也含有多种挥发油[6]，且蔓荆与单叶蔓荆同为蔓荆子药材的原植物，在许多研究方面可以相互借鉴;赵应红等[7]对蔓荆干燥叶片的质量标准进行了研究，以上成果都将有利于开展单叶蔓荆(V.trifoliaL.var.simplicifoliaCham.)叶片研究工作。

由实验结果可知，枝条和根系中蔓荆子黄素含量未能检测出，同时作为单叶蔓荆植株的宿存器官，枝条和根系的采收较为困难且对植株损伤较大，不利于居群及环境保护，故目前不建议以这两种器官入药。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:340－341.

[2]曹元宇.神农本草经[M].上海:上海科学技术出版社，1987:220.

[3]朱成兰，赵应红，马伟光.傣药学[M].北京:中国中医药出版社，2007:29.

[4]康朗腊.档哈雅龙[M].昆明:云南民族出版社，2004:613.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，1990:510.

[6]潘炯光，徐植灵，樊菊芬.牧荆、荆条、黄荆和蔓荆叶挥发油的GC-MS分析[J].中国中药杂志，1989，14(6):37－39.

[7]赵应红，林艳芳，彭霞，等.傣药蔓荆叶的药材质量标准研究[J].中国民族医药杂志，2008，6(1):58－59.